本发明专利技术涉及植物有效成分质量研究技术领域，尤其涉及一种红豆杉枝叶中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：(1)制备供试品溶液：将红豆杉枝叶用有机溶剂浸泡超声，过滤，得到供试品溶液；(2)制备对照品溶液：用有机溶剂配制10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ对照品，过滤，得到对照品溶液；(3)检测方法：用高效液相色谱对步骤(1)得到的供试品和步骤(2)得到的对照品进行检测。本发明专利技术的检测方法在准确度、精密度、线性范围、中间精密度、耐用性和溶液的稳定性等方面均能达到要求，采用的分析方法科学、合理，且所述方法相比于现有方法更快速、简便、有效，解决了基线波动较大的问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物有效成分质量研究
，尤其涉及一种红豆杉枝叶中10-去 乙酰基巴卡亭III的检测方法。
技术介绍
10-去乙酰基巴卡亭III(10-DAB)为红豆杉中有抑制肿瘤作用的紫杉烷萜类化合 物。它同时是合成多西他赛和紫杉醇的重要原料。紫杉醇是具有抗癌活性的天然二萜类化 合物，其结构新颖、抗癌机理独特、抗癌效果显著、抗癌谱广，对转移性卵巢癌和乳腺癌具有 很好的治疗作用，并且对肺癌、食管癌也有一定疗效，因此紫杉醇被认为是迄今所发现最好 的抗癌药物之一，已在40多个国家被批准上市。然而，紫杉醇供应匮乏大大限制了它在临 床上的应用。目前，药用紫杉醇的主要来源是从天然红豆杉属植物的根部中提取分离。但由于 该种属植物数量少，生长慢，含量低，且提取难度颇大，从长远考虑根本无法满足日益增长 的临床需求。近年来，紫杉醇类化学半合成是具有实用价值的一种制备方法，该方法是以红 豆杉属植物（以枝叶为主）中提取分离的10-去乙酰基巴卡亭III(10-DAB)为前体，通过几 部反应得到紫杉醇，其中10-去乙酰基巴卡亭III(10-DAB)为前体的半合成紫杉醇已占据紫 杉醇销售总量的2/3。 目前，已有研究者研究了红豆杉中测定10-去乙酰基巴卡亭III的方法，CN 103808850Α公开了一种红豆杉中10-去乙酰基巴卡亭III的薄层色谱检测方法，所述方法 包括如下步骤：（1) 10-去乙酰基巴卡亭III对照品溶液制备；（2)样品溶液制备；（3)薄层 色谱检测，该方法虽然检测简单，但是检测不准确，只能进行半定量检测，不能够准备知道 10-去乙酰基巴卡亭III含量。浙江大德药业集团有限公司研究人员建立红豆杉中10-DAB 的含量测定（《现在中药研究与实践》2013年第27卷第5期11-13页），但是运用该方法 在含量检测时，供试品溶液处理时间比较长，并且洗脱方式为梯度洗脱，影响基线的波动较 大，影响了 10-去乙酰基巴卡亭III含量测定。 因此有必要进一步研究更有效的10-去乙酰基巴卡亭III含量测定方法，新方法的 建立可以帮助我们快速、准确获知红豆杉中10-DAB有效含量，便于我们大规模从红豆杉枝 叶提取10-DAB。
技术实现思路
针对现有技术的不足及实际的需求，本专利技术提供一种红豆杉枝叶中10-去乙酰基 巴卡亭III的检测方法，所述检测方法检测时间短，检测限低，操作简单且能够准确的测量红 豆杉枝叶中10-去乙酰基巴卡亭III的含量。 为达此目的，本专利技术采用以下技术方案： -方面，本专利技术提供一种红豆杉枝叶中10-去乙酰基巴卡亭III的检测方法，包括 以下步骤： (1)制备供试品溶液：将红豆杉枝叶用有机溶剂浸泡超声，过滤，得到供试品溶 液； ⑵制备对照品溶液：用有机溶剂配制10-去乙酰基巴卡亭III对照品，过滤，得到 对照品溶液； (3)检测方法：用高效液相色谱对步骤（1)得到的供试品和步骤（2)得到的对照 品进彳丁检测。 本专利技术中，首先，所述检测方法由于红豆杉只需要浸泡超声和过滤两个环节即可 进行检测，整个过程只需3h即可完成，而相比于现有的色谱检测方法的检测时间都需要1 天以上，时间上大大缩短了；其次，本专利技术的检测方法，检测限低，可以检测到万分之二浓度 的10-去乙酰基巴卡亭III，且HPLC的特征峰明显，10-去乙酰基巴卡亭III的浓度与峰面积的 线性关系良好，检测稳定，误差低。 优选地，步骤（1)所述的有机溶剂为甲醇。 优选地，所述甲醇与红豆杉枝叶的体积质量比为（5-12) :1，例如可以是5 :1、6 :1、 7 :1、8 :1、9 :1、10 :1、11 :1 或 12 :1，优选为（6-10) :1，进一步优选为 8 :1。 优选地，所述浸泡超声的时间为80_160min，例如可以是80min、81min、82min、 85min、88min、90min、92min、95min、98min、100min、105min、110min、115min、120min、 125min、130min、135min、140min、145min、150min、155min或 160min，选为 100_150min，进一 步优选为120min。 本专利技术中，所述甲醇溶剂可以溶解部分细胞壁，加上超声可以充分破坏细胞壁， 同时细胞中的10-去乙酰基巴卡亭III可以溶解在甲醇中，故此方法可以提取红豆杉中的 10-去乙酰基巴卡亭III。 优选地，步骤（2)所述的有机溶剂为甲醇和醋酸的混合液。 优选地，所述甲醇和醋酸的体积比为（150-300) :1，例如可以是150 :1、151 :1、 152 :1、155 :1、160 :1、165 :1、170 :1、175 :1、180 :1、185 :1、190 :1、195 :1、200 :1、210 :1、 220 :1、230 :1、240 :1、250 :1、260 :1、270 :1、280 :1、290 :1 或 300 :1，优选为（180-240) :1， 进一步优选为200 :1。 优选地，步骤（2)所述的对照品的浓度为0· 05-0. 5mg/mL，例如可以是0· 05mg/ mL、0. 06mg/mL、0. 08mg/mL、0.lmg/mL、0. 2mg/mL、0. 3mg/mL、0. 4mg/mL或 0· 5mg/mL，优选为 0· 1-0. 3mg/mL，进一步优选为 0· 2mg/mL。 优选地，步骤（3)所述的高效液相色谱中的色谱柱为ShimpackC18分析柱。 优选地，所述分析柱的规格为250mmX4. 60mm，5. 0μπι。 优选地，步骤（3)所述的高效液相色谱检测时的进样量为10-20μL，例如可以 是 10yL、llyL、12yL、13yL、14yL、15yL、16yL、17yL、18yL、19yL或 20yL，优选为 15-20μL，进一步优选为20μL。 优选地，步骤（3)所述的高效液相色谱检测时的流动相为水、甲醇和乙腈的混合 溶液。优选地，所述混合溶液中水、甲醇和乙腈的体积比为（20-35):(5-20):(3-12)，例 如可以是 20 :5 :3、21 :6 :4、22 :7 :5、23 :8 :6、24 :9 :7、25 :10 :8、28 :12 :9、30 :12 :10、31 : 14 :10、32 :16 :11 或 35 :20 :12,优选为（25-30) :(10-18) :(5-10)，进一步优选为 29 :13 :8。 优选地，步骤（3)所述的高效液相色谱检测时的流动相的流速为0. 9-1.lmL/min， 例如可以是0. 9mL/min、lmL/min或1.lmL/min，优选为lmL/min。 优选地，所述高效液相色谱检测时的洗脱方式为等浓度洗脱。 优选地，步骤（3)所述的高效液相色谱检测时的检测波长为200-250nm，例如可 以是 200nm、20lnm、202nm、205nm、210nm、215nm、220nm、225nm、227nm、228nm、230nm、23lnm、 235nm、236nm、238nm、240nm、245nm或 250nm，优选为 210_230nm，进一步本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种红豆杉枝叶中10‑去乙酰基巴卡亭Ⅲ的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备供试品溶液：将红豆杉枝叶用有机溶剂浸泡超声，过滤，得到供试品溶液；(2)制备对照品溶液：用有机溶剂配制10‑去乙酰基巴卡亭Ⅲ对照品，过滤，得到对照品溶液；(3)检测方法：用高效液相色谱对步骤(1)得到的供试品和步骤(2)得到的对照品进行检测。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梅科锋，葛月兰，喻琼林，
申请(专利权)人：江苏红豆杉药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。