本发明专利技术涉及一株猪舍粪尿环境适应型枯草芽孢杆菌及其应用。该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCCNo.11724,其16SrDNA序列如SEQ.NO.1所示。经实验证明，该枯草芽孢杆菌能够很好的在猪舍粪尿环境中快速生长繁殖，并具有抑制大肠杆菌生长的特性。该株枯草芽孢杆菌在动物饲喂实验中，未见明显的毒副作用，适合在猪舍微生态环境改良中应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于养殖微生物及其
，设及从一株枯草芽抱杆菌及其在畜禽养殖 环境中的应用。
技术介绍
规模化养猪已是我国养猪业发展的主要形式，养猪密度大，猪舍内部含有丰富的 粪便、尿液、饲料残留、动物体表皮屑等有机物。运些有机物是微生物生长的良好"培养基"。 大量的有害和有益微生物均可W在运些"培养基"中快速的生长。如果有害的细菌大量生 长，则会对动物的健康带来严重的危害。目前在生产中控制猪舍内部有害细菌的生长的常 见措施是定期消毒。但即使采取频繁的消毒措施也只是短暂的减少微生物的数量，消毒结 束后微生物的数量很快又会回到消毒前的水平。在每次消毒结束后，环境中的微生物大部 分被杀灭，猪舍内部处于一个短暂的微生物"真空期"，由于微生物的繁殖速度非常快，很多 有害的细菌在20min内即可繁殖一代，造成一些在环境中能够增殖的微生物在很短时间内 即可达到消毒前的数量，迅速抵消消毒的效果。 枯草芽抱杆菌是农业部《饲料添加剂品种目录》所列的常见兽用微生物添加剂，对 人和动物没有毒性，在生长过程中可W分泌具有广谱抗菌活性物质W及其它高活性的蛋白 酶、淀粉酶和纤维素酶类，能够抑制有害细菌的生长。目前养殖中枯草芽抱杆菌多应用于动 物胃肠道微生态调控方面，对于动物环境中有害微生物的抑制机制研究并不多见。专利技术专 利201110267214. 1的专利中，公开了一种畜舍及动物体表微生态环境改良的益生菌组合 菌剂及应用方法，定期在畜舍内部喷洒益生菌菌剂，利用益生菌在畜舍内部快速的繁殖，快 速的分解和利用粪污中的营养物质，分泌抗菌类物质，杀灭或抑制有害微生物的生长，从而 减少了环境中有害微生物的数量。 目前所使用的枯草芽抱杆菌均是采用实验室的富营养培养基分离而来。运些分离 筛选出的枯草芽抱杆菌能够在良好的培养基、适宜的培养环境下快速高效的生长。但在具 体应用到生产中，由于枯草芽抱杆菌喷撒到猪舍环境中后，所处的环境主要W猪粪便、尿液 和残留饲料为主，发现枯草芽抱杆菌虽然能够在猪舍粪尿环境中繁殖生长，但是生长速度 不快，难W发挥高效抑制有害微生物的效果。分析其主要原因是猪舍内部粪尿营养值较低， 而目前大部分枯草芽抱杆菌均是在实验室富营养培养基中筛选分离而来，并不能很好的适 应猪舍内部特定的粪尿环境。如何进一步提高枯草芽抱杆菌在粪尿培养基中生长繁殖是利 用枯草芽抱杆菌来调控畜舍微生态平衡的关键点之一。
技术实现思路
为了解决现有技术中的问题，本专利技术在粪尿中分离了一株枯草芽抱杆菌 度acillussubtilis)，采用畜舍常见的动物粪便、尿液、饲料残留等作为培养基（粪便 lOOg、尿液100ml、饲料5g，加水至1000ml，高压灭菌）来多代次筛选和驯化枯草芽抱杆菌， 得到枯草芽抱杆菌度acillussubtilis)SR001，保藏号为CGMCCNo. 11724,该菌株能够在 畜舍环境中快速生长，用于改良猪舍微生态环境；尤其能显著抑制大肠杆菌生长。 W此为基础还能够开发在畜舍快速生长，并具有广谱抗菌活性的益生菌制剂，通 过定期的施用菌剂产品，来达到畜舍微生态改良的效果，降低畜舍内部有害细菌的数量，提 高动物的健康水平，显著降低抗生素的使用量，推进养殖业向健康、环保、绿色的方向发展。 本专利技术从健康母猪的新鲜粪便中分离出一株枯草芽抱杆菌，并采用粪尿培养基进 行多代次传代培养和驯化，最终得到一株猪舍粪尿环境适应型枯草芽抱杆菌SR001。经实验 证明，该株枯草芽抱杆菌能够很好的适用猪舍中特殊的环境，能够在粪尿培养基中快速生 长繁殖，并形成良好的菌落。菌落形状不规则，有皱權，边缘波纹状，灰白色，革兰氏染色阳 性。该株枯草芽抱杆菌在动物饲喂实验中，未见明显的毒副作用，适合在猪舍内部微生态环 境改良中应用。 一株猪舍粪尿环境适应型枯草芽抱杆菌度acillussubtilis)SR001，于2015年 11月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、，保藏地址：北京市朝阳 区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101;保藏号CGMCCNo. 11724， 其16srDNA如沈Q.NO. 1所示。【附图说明】 图1为SR001及对照组枯草芽抱杆菌粪尿培养基中生长曲线图。【具体实施方式】 W下结合实施例旨在进一步说明本专利技术，而非限制本专利技术。 实施例1.SR001枯草芽抱杆菌的分离 收集健康母猪新鲜猪粪，80°C的水浴处理30min，利用稀释涂布法在普通营养琼脂 培养基上培养1-3天后观察。根据菌落形态和革兰氏染色进行初筛，再将初筛的枯草芽抱 杆菌进行大肠杆菌共培养，筛选具有抑制作用的枯草芽抱杆菌进行leSrDNA测序进行最终 确认。确定是枯草芽抱杆菌的菌株进行营养培养基培养备用。[001引 （1)制备粪稀释液 取健康母猪新鲜猪粪lOOg，装入无菌塑料袋中扎好。将粪样与100ml无菌生理水 充分混合，振摇20min，80°C水浴1小时后取出。无菌吸取1ml粪样悬液加入盛有9ml无菌 生理水的试管中，充分混匀，制成101稀释度的猪粪溶液；W此类推，利用上述方法再分别 制成102、103、104、105不同稀释度的猪粪溶液。 似涂布培养 无菌吸取103、104、105不同稀释度的猪粪溶液各0. 2ml滴在所述的普通营养琼 脂培养基，用无菌涂布器涂布。将培养基平板倒置于30°C培养箱中培养1-3天。 做分离鉴定 观察菌落形态，与标准菌株比对，去除非目的菌株；进行革兰氏染色，显微镜下观 察；并挑选多株菌落进行leSrDNA序列测定，根据序列结果进行分析，选择一株枯草芽抱杆 -tt： 园〇 (4)传代驯化 配制粪尿培养基：取新鲜猪粪（粪便lOOg、尿液100ml、饲料50g当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株猪舍粪尿环境适应型枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SR001，保藏号为CGMCC No.11724。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：许道军，文舸，
申请(专利权)人：湖南农业大学，湖南树人牧业科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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