本发明专利技术涉及分子生物学和肿瘤药学领域，公开一种与癌细胞或肿瘤辅助诊断相关的标志物，该标志物为NATD或者NATD和Slug的组合。本发明专利技术提供了快速简便的非小细胞肺癌标记物的检测方法，可以作为非小细胞肺癌及其他上皮肿瘤早期诊断的辅助手段。此外NATD作为表观遗传修饰酶，可以筛选出该蛋白特异性的抗体或小分子化合物来抑制其活性从而达到治疗非小细胞肺癌及其他上皮肿瘤病人的目的。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】-种与非小细胞肺癌辅助诊断相关的标志物及其应用[000。 专利说明 在本专利技术提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独 引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本专利技术的讲授内容之后，本领域技术人员可W对 本专利技术作各种改动或修改，运些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。 专利
本专利技术属于生物
，提供了对非小细胞肺癌进行检测和诊断、预后、W及 治疗的新方法。具体地说，本专利技术设及Ν-α-乙酷基转移酶D(NATD)单独或和Slug蛋白联 合用作非小细胞肺癌特异性诊断标志物、对患有非小细胞肺癌患者进行预后、W及用作非 小细胞肺癌治疗的潜在祀点的应用。
技术介绍
世界卫生组织的数据显示全球每年约有800万人死于癌症，其中肺癌死亡人数高 居榜首。肺癌是发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤，占全部恶性肿瘤死亡病例的22. 7%， 且发病率和死亡率仍在继续上升。如不及时采取有效的控制措施，预计到2025年，中国的 肺癌患者人数将达到100万，成为世界第一肺癌大国。 肺癌可W分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer, NSCLC)，其中后者占大约80%，是最常见的肺癌。非小细胞肺癌又可W分为Ξ类：鱗癌、腺 癌和大细胞癌。肺癌的死亡率高，五年生存率不足15%。一个重要的原因是早期诊断率极 低，不足2%，80%W上患者就诊时已在晚期。目前非小细胞肺癌的诊断方法有X-射线检 查、CT扫描、支气管镜检、疲细胞学检查W及肺癌生物标志物检测等。现有的广谱肺癌标志 物无法确诊肺癌，而其他检查方法都存在早期普查的漏检率较高的缺陷。因此，开发新的特 异性的肺癌生物标志物用于早期诊断和治疗成为当务之急。除了诊断方法上的不足外，癌症病人死亡率居高不下的一个重要原因是癌细胞的 远端转移1。事实上，90%W上的肺癌患者都死于原位肿瘤的侵袭和转移。肺癌的转移部 位多，转移途径也很多，有淋己转移、局部直接蔓延、血行转移和局部种植等。癌细胞的转移 是许多生理学过程共同作用的结果。其中，上皮向间充质转化巧pithelial-Mesenchymal -Transition,EMT)在癌细胞的远端转移过程中起着非常重要的作用2 3。在肿瘤的转移过 程中，肿瘤细胞利用EMT转化为间充质细胞获得迁移和侵染能力，侵入到附近的血管中，在 体内移动，从而到达身体的其他部位并最终形成新的病灶 4'5。EMT过程受到Slug、Snail、 Zebl、Zeb2、Twist等多个转录因子的调控，并且运些参与EMT过程的调节因子可W非常明 显的影响肿瘤的形成和转移6 1°。Slug作为E-box结合转录抑制子家族成员之一，可W通过 其N端的SNAG结构域与染色质调节蛋白LSD1结合，两者共同发挥作用来抑制EMT标记分 子E-ca化erin的表达，进而促进EMT过程11。 蛋白质N端α-乙酷化在真核细胞中是一种非常普遍的蛋白修饰方式。在人的细 胞中，Ν端α-乙酷化的蛋白高达80%W上，并且运种修饰方式在进化上是保守的izM。蛋 白N端α-乙酷化是由N-α-乙酷基转移酶（NAT)家族来催化的IS。NATO是NAT家族的第 四个成员，主要负责组蛋白H4和肥A的N端α-乙酷化1S1S。先前关于NATD的研究主要 集中在酵母中16,但是其在人类肿瘤发生发展过程中的作用还不清楚。迄今，尚未见有关W NATD作为标志物用于人类癌症的检测和祀点治疗的报道。
技术实现思路
本专利技术第一方面设及Ν- α -乙酷基转移酶D (NATD)或其片段、单独或和Slug蛋白 联合用于检测病人是否患有非小细胞肺癌或对患有非小细胞肺癌患者进行预后的制剂中 的应用。通过测定来源于受试者的生物学样品诸如肿瘤组织样品中的NATD和Slug基因表 达水平或蛋白水平来实现，可使用获自非癌性组织的正常细胞来作为对照样本。基因水平 或/和蛋白表达水平与正常对照水平相比的升高表明该受试者患有非小细胞肺癌或有风 险发生非小细胞肺癌。统计结果还发现，NATD在肺癌患者肿瘤组织中的水平与肺癌病人存 活率负相关，可用作肺癌预后的指标。因此，本专利技术者利用实时定量PCR技术或/和免疫组 化技术，通过对NATD单独或和Slug联合进行定量及生物活性测量，实现了对对象是否患有 非小细胞肺癌的检测W及对患有非小细胞肺癌患者进行预后。 本专利技术另一方面设及筛选可抑制Ν-α -乙酷基转移酶D(NATD)和Slug活性、作 用、及表达量的抑制物，可鉴定能抑制非小细胞肺癌侵袭和转移的药物，为非小细胞肺癌的 诊断和治疗提供参考依据。 本专利技术的目的可W通过W下技术方案实现： 一种与癌细胞或肿瘤辅助诊断相关的标志物，该标志物为NATD或者NATD和Slug 的组合，所述的NATD为NATD基因或蛋白，所述的Slug为Slug基因或蛋白；该标志物优选 为NATD基因、NATD蛋白、NATD基因和Slug基因的组合或者NATD蛋白和Slug蛋白的组 合。该标志物进一步有选为NATD基因和Slug基因的组合或者NATD蛋白和Slug蛋白的组 合；更进一步优选为NATD蛋白和Slug蛋白的组合。 上述的标志物在制备癌细胞或肿瘤辅助诊断试剂盒或生物忍片中的应用。 上述标志物的引物或特异性抗体，该引物为所述NATD基因的实时巧光定量PCR引 物和所述Slug基因的实时巧光定量PCR引物；所述NATD基因的实时巧光定量PCR引物： 正向引物：5' -TACCTCATCGCGTGGGAAAAC-3'；反向引物：5' -GGATCTGTATGAGGAACTTCC-3,； 所述Slug基因的实时巧光定量PCR引物：正向引物：ATACCACAACCAGAGATCCTCA ;反向引物： GACTCACTCGCCCCAAAGATG； 该特异性抗体为用于检测NATD蛋白的表达水平和生物活性的anti-NATD和 anti-N-a -ac-H4,W及Slug蛋白的特异性抗体。 上述标志物的引物或特异性抗体在制备癌细胞或肿瘤辅助诊断试剂盒或生物忍 片中的应用。 一种癌细胞或肿瘤辅助诊断试剂盒或生物忍片，该试剂盒或生物忍片中包含用于 检测血液或肿瘤组织中NATD基因表达水平或者NATD和Slug基因双表达水平的特异性引 物；或者包含用于检测血液或肿瘤组织中的NATD蛋白表达水平或者NATD和Slug蛋白双表 达水平的特异性抗体。 上述的癌细胞或肿瘤辅助诊断试剂盒或生物忍片，所述的引物为上述的引物，所 述的抗体为上述的抗体。 上述的试剂盒或生物忍片中还包括PCR技术常用的试剂和免疫组化技术常用的 试剂。 一种癌细胞或肿瘤侵袭和转移的抑制物，该抑制物为NATD基因或蛋白的活性、作 用、及表达量的抑制物；优选的该抑制物为NATD基因、NATD蛋白产物及其乙酷化催化活性 的抑制物；进一步优选的该抑制物为包括抗体、化学抑制物、shRNA和miRNA抑制物W及 类似物中的至少一种；更进一步优选的该抑制物特异性阻断NATD的乙酷辅酶A结合位点 (RRKGLG)〇 -种^ug蛋白的活性、作用、及表达量的抑制物，该抑制物为^ug基因、別ug蛋 白产物及其生物活性的抑制物。优选的所述的抑制物特异性阻断NATD和其在本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种与癌细胞或肿瘤辅助诊断相关的标志物，其特征在于：该标志物为NATD或者NATD和Slug的组合，所述的NATD为NATD基因或蛋白，所述的Slug为Slug基因或蛋白；该标志物优选为NATD基因、NATD蛋白、NATD基因和Slug基因的组合或者NATD蛋白和Slug蛋白的组合。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵权，魏继武，曾长江，鞠君毅，陈爱萍，
申请(专利权)人：成都山权江生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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