本发明专利技术提供了一种检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、酶标记物、甲羟孕酮标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为甲羟孕酮偶联抗原，所述酶标记物为酶标记抗体。本发明专利技术还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测甲羟孕酮的方法，它包括：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明专利技术提供的酶联免疫试剂盒可用于检测鸡肉、鱼、虾样本中甲羟孕酮的含量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、酶标记物、甲羟孕酮标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为甲羟孕酮偶联抗原，所述酶标记物为酶标记抗体。本专利技术还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测甲羟孕酮的方法，它包括：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本专利技术提供的酶联免疫试剂盒可用于检测鸡肉、鱼、虾样本中甲羟孕酮的含量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。【专利说明】检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒及其应用
本专利技术涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂 盒，可定性、定量检测动物组织（鸡肉、鱼、虾等）样本中甲羟孕酮药物的残留量。
技术介绍
甲轻孕酮（Medroxyprogesterone),中文别名：甲孕酮，安宫黄体酮，为合成的黄 体酮衍生物，甲羟孕酮是一种人工合成的孕激素类药物。该药物为作用较强的孕激素，无雌 激素活性，口服和注射均有效。其孕激素活性于皮下注射时为黄体酮的20?30倍，口服时 为炔孕酮的10?15倍。肌注后局部储存在组织中缓慢释放，产生长效作用，可维持2?4 周以上，剂量较大时可达3个月之久。口服经肝代谢，1?2天内以硫酸盐和葡萄糖醛酸盐 形式主要从尿中排泄。临床上用于人的先兆性流产、习惯性流产、痛经、功能性闭经、功能性 子宫出血等；大剂量可用作长效避孕药针，也可用于一些对激素敏感肿瘤的姑息治疗。该药 物可产生不规则出血、闭经、体重改变、精神抑郁、失眠、恶心、乳胀等不良反应。近年来，欧 盟认为，食用含有雌烯二醇、黄体酮、甲羟孕酮等激素的牛肉可扰乱人体内分泌、生长发育、 免疫系统、生殖系统等方面的正常功能，还可能致癌、致畸，因而世界各国都明文禁止这类 激素在动物中使用。 目前，检测该类药物的方法主要是气相色谱-质谱联用，液相色谱-质谱联用等仪 器方法，资金、人员等投入成本较高。本专利技术运用残留物的免疫学检测方法，测定动物组织 中甲羟孕酮药物的含量，具有检测限低、特异性强、操作简便、检测速度快、检测成本低，非 常容易推广等优点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够检测动物组织（鸡肉、鱼、虾等）样本中甲羟孕酮 药物残留量的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、 定量检测方法。 本专利技术试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、酶标记物、甲羟孕酮标准品溶液、 底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为甲羟孕酮偶联抗原，所述酶标记物为酶 标记抗体。 所述甲羟孕酮偶联抗原是由甲羟孕酮半抗原与载体蛋白偶联得到，所述甲羟孕酮 半抗原是由还原氨化反应得到，所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋 白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。 所述甲羟孕酮特异性抗体是以甲羟孕酮偶联抗原作为免疫原制备获得，所述甲羟 孕酮特异性抗体可为甲羟孕酮单克隆抗体或甲羟孕酮多克隆抗体，其中优选甲羟孕酮单克 隆抗体。 所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣 根过氧化物酶；酶标记抗体是采用改良后的过碘酸钠法进行偶联得到的。 为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括甲羟孕酮标准品溶液、 底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液。 所述甲羟孕酮标准品溶液6瓶，浓度分别为(^g/L、0. 03Pg/L、0. 06Pg/L、0. 12Pg/ L、0.24Kg/L、0. 48Kg/L。 当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成， A液为过氧化氢或过氧化脲，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为l~2mol/L的硫 酸或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐 缓冲液，所述终止液为l~2mol/L氢氧化钠溶液。 所述洗涤液优选为pH值为L 4,含有0· 59TL 0%吐温-20、0· 01%。、· 03%。叠氮化 钠防腐剂、〇. 1、. 3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。 所述复溶液优选为pH值为7. 0、0. 02mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体 积百分比。 其中在酶标板制备过程中所用到的包被缓冲液为pH值为9. 6,0. 05mol/L的碳酸 盐缓冲液，封闭液为pH值为7. 1~7. 5,含有19Γ3%酪蛋白、0. 1~0. 3mol/L的磷酸盐缓冲液， 所述百分比为重量体积百分比。 本专利技术中酶标板的制备过程为：用包被缓冲液将包被原稀释成20 μ g/ml，每孔加 入100 μ 1，37°C避光孵育2h或4°C过夜，倾去孔中液体，用洗涤液洗涤2次，每次30s，拍干， 然后在每孔中加入15(Γ200μ 1封闭液，37°C避光孵育l~2h，倾去孔内液体拍干，干燥后用 铝膜真空密封保存。 本专利技术的检测原理为： 本试剂盒采用ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的甲 羟孕酮和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗甲羟孕酮的酶标记抗体，用显色液显 色，样本吸光度值与其所含残留甲羟孕酮的含量成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应 的稀释倍数，即可得出样本中甲羟孕酮的残留量。 本专利技术还提供了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测甲羟孕酮的方法，它包括步 骤： (1)样品前处理； (2)用试剂盒进行检测； (3)分析检测结果。 本专利技术检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒主要采用ELISA方法定性或定量检测样 品中甲羟孕酮的含量；对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批 量样品；主要试剂以工作液的形式提供，检验方法方便易行，具有特异性高、灵敏度高、精确 度高、准确度高等特点。本专利技术的酶联免疫试剂盒，结构简单、使用方便、价格便宜、携带便 利、检测方法高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量。 【专利附图】【附图说明】 图1 :甲羟孕酮半抗原合成路线图 图2 :甲羟孕酮半抗原核磁共振氢谱图 图3:试剂盒标准曲线图 【具体实施方式】 下面结合具体的实施例来进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本 专利技术，而不用来限制本专利技术的范围。 实施例1试剂盒组分的制备 1、甲羟孕酮半抗原的制备 0. 70 g甲羟孕酮在5 ml二甲基亚砜（DMS0)中的混合物，40°C下缓慢滴加入0. 5 mil, 3-丙二胺和0.5 ml吡啶在10 ml DMS0的混合液中，滴加完毕后，继续反应12h，旋蒸 除去溶剂和未反应的丙二胺，定量得到甲羟孕酮-3-氨丙基肟。 取上述产物经核磁共振氢谱测定，如图2所示，1. 0-2. 5之间增加的亚甲基峰说明 目标半抗原合成成功。 2、抗原的制备 免疫原制备--甲羟孕酮半抗原与牛血清白蛋白（BSA)偶联得到免疫原。 取甲羟孕酮-3-氨丙基肟30mg，用1. 5ml水溶解，得到溶液1 ;取50%的GAlOy 1加 入溶液1中，室温下搅拌反应18h ;取BSAlOOmg用1. 5ml水稀释后加入溶液1中，反本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测甲羟孕酮的酶联免疫试剂盒，其特征在于包括：包被有包被原的酶标板、酶标记物、甲羟孕酮标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为甲羟孕酮偶联抗原，所述酶标记物为酶标记抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，扶胜，崔海峰，冯静，聂雯莹，陶光灿，贾芳芳，徐念琴，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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