一种总25-羟基维生素D检测试剂盒，其特征在于:包含试剂1，试剂2和试剂3；其中，试剂1是含有表面活性剂的解离液，试剂2由含有抗人25-羟基维生素D2和D3的抗体置于适当的缓冲液中构成,试剂3由表面标记有人25-羟基维生素D2和D3的聚苯乙烯胶乳颗粒置于适当的缓冲液中构成。本发明专利技术试剂盒具有检测的灵敏度和准确度高、精密度好、检测线性宽、稳定性好、检测时间短且生产成本低的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种医学检测试剂盒，具体讲是一种总25-羟基维生素D检测试剂盒。
技术介绍
25-羟基维生素D (25羟基维生素D)是一种类固醇激素在促进肠道中钙的吸收及 维持其动态平衡具有重要的意义，对人体骨骼的生长，健康起到关键的作用。近年来研究表 明，维生素D除了具有骨骼效应外，还与自身免疫性疾病，糖尿病，心血管病，细胞生长分化 等有关的非骨骼效应。维生素D有维生素D2和D3两种形式。人体中维生素D来源于饮 食，而维生素D3则可由暴露在紫外线下的皮肤组织合成。在肝脏中，维生素D经过25-羟 化酶作用，可形成25-羟基维生素D。被运送到肾脏后，经过1-羟化酶作用，形成1，25-双 羟基维生素D。1，25-双羟基维生素D是活性最高的维生素D代谢物，但在人体血液中含量 很低。在血液中的维生素D主要以25-羟基维生素D形式存在，因此被认为是个体中维生 素D状态的准确指标。维生素D缺乏已被证实与许多疾病有关，包括骨质疏松，佝偻病，骨 软化症和恶性肿瘤，而过量服食或者注射维生素D，会引起维生素D中毒。 目前市场上，通过酶联免疫法和化学发光免疫法来检测人体血清中总25-羟基维 生素D (总25-羟基维生素D包括25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3)，其中有代表 性的检测产品由英国的IDS和德国的Roche Diagnostics公司推出。使用酶联免疫法检 测25-羟基维生素D反应时间比较长、通常需要2-3个小时，还需要配套专用的仪器，因此 不能实现大批量的检测。使用化学发光法检测25-羟基维生素D，虽然检测灵敏度高，但是 反应速度相对较慢，检测一般需要30分钟，也需要配套价格昂贵的封闭式免疫发光仪来检 测，而且进口试剂盒价格高。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的上述不足，提供一种检测的灵敏度和准确度高、精密度好、 检测线性宽、稳定性好、检测时间短且生产成本低的总25-羟基维生素D检测试剂盒。 为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术解决方案为：一种总25-羟基维生素D 检测试剂盒，包括试剂1、试剂2和试剂3,所述试剂1是含有表面活性剂的酸性解离液；所 述试剂2由含有抗人25-羟基维生素D2和D3抗体置于适当的缓冲液中构成；所述试剂3 是表面标记有25-羟基维生素D2和D3的聚苯乙烯胶乳颗粒置于适当的缓冲液中构成。 本专利技术试剂1中的表面活性剂选自TWeen-20(聚氧乙烯失水山梨醇月桂酸酯，吐 温20)，TritonX-100 (聚乙二醇辛基苯基醚），Bri j-35 (聚氧乙烯月桂醚，布里杰-35)中的 一种或几种，优选Tween-20。缓冲液选自HEPES缓冲液、PEPES缓冲液、MOPS缓冲液、磷酸 盐缓冲液、柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液中的一种或几种，优选柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液。 本专利技术所述的试剂1由以下组分组成：10-100mM (mmoL/L)、pH4. 0-6. 0的柠檬 酸-柠檬酸三钠缓冲液，〇. 05-0. 5% (v/v) (Tween-20本身就是液体，V/V是指0. 05-0. 5ml Tween-20 对应 99. 95-99. 5ml 试剂 1) Tween 20, lmg/mL Procl in-300 (Procl in-300 防腐剂， 构成完整酸性解离液的试剂1的一个添加组分）。 作为优选，所述的梓檬酸-梓檬酸三钠缓冲液的浓度为20_50mM，pH为4. 5-5. 5， Tween-20 含量为 0· 1-0. 4 % (v/v) 〇 本专利技术试剂2中所述的抗人25-羟基维生素D2和D3抗体为单克隆抗体或多克隆 抗体，其中多克隆抗体源自兔、羊或鸡，单克隆抗体源自鼠或兔；作为优选，所述抗人25-羟 基维生素D2和D3抗体为单克隆抗体；作为进一步优选，所述抗人25-羟基维生素D2和D3 抗体为鼠源性单克隆抗体。 本专利技术试剂2中所述的抗人25-羟基维生素D2和D3抗体在试剂2中的终浓度 为0. 1-lmg/ml ;作为优选，所述抗人25-羟基维生素D2和D3抗体在试剂2中的终浓度为 0. 2-0. 8mg/ml ;作为进一步优选，所述抗人25-羟基维生素D2和D3抗体在试剂2中的终浓 度为 0. 5mg/ml。 本专利技术试剂2中的缓冲液为磷酸盐缓冲液，HEPES缓冲液，Tris-HCl缓冲液，MOPS 缓冲液中的一种或者几种，优选磷酸盐缓冲液；缓冲液在试剂2中的含量为10-100mM，优选 缓冲液的含量为20-60mM。 本专利技术所述试剂3中的表面标记有25-羟基维生素D2和D3的聚苯乙烯胶乳颗粒 的粒径为50-150nm，在试剂3中的终浓度为2mg/ml-10mg/ml ;作为优选，所述试剂3中的聚 苯乙稀胶乳颗粒的粒径为100-150nm，终浓度为2mg/ml-8mg/ml ;作为进一步优选，所述试 剂3中表面标记有25-羟基维生素D2和D3的聚苯乙烯胶乳颗粒的粒径为130nm，终浓度为 4mg/ml〇 本专利技术所述试剂3中的缓冲液为磷酸盐缓冲液，MES缓冲液，HEPES缓冲液， Tris-HCl缓冲液，MOPS缓冲液中的一种或者几种。 本专利技术试剂3是将表面标记有25-羟基维生素D2和D3的聚苯乙烯胶乳颗粒置于 适当的缓冲液中，通过化学交联把25-羟基维生素D2和D3标记在带有羧基的聚苯乙烯胶 乳颗粒表面；具体为：（1)活化25-羟基维生素D2和D3分子；（2)活化表面带有羧基的聚 苯乙烯胶乳颗粒；（3)通过化学交联，把活化后的25-羟基维生素D2和D3标记在活化后的 聚苯乙烯胶乳颗粒表面；25-羟基维生素D2和D3标记量为2. 5 μ g-25 μ g/mg胶乳颗粒；作 为优选，所述25-羟基维生素D2和D3标记量为2. 5 μ g-15 μ g/mg胶乳颗粒。 本专利技术所述活化带有羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒和活化25-羟基维生素D2和D3的 试剂选自1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺、2-吗啉乙磺酸 中，半胱胺、溴代乙酸酐中的一种或多种。 本专利技术试剂盒中试剂1与试剂2和试剂3的容积比为1 :1 :1。 作为试剂盒的一部分，本专利技术中总25-羟维生素D检测试剂盒还包括校准品和质 控品。校准品主要用于对本专利技术试剂盒的检测进行校准，质控品主要用于对本专利技术试剂盒 检测准确度的确认。本专利技术试剂盒中包含的校准品和质控品为已知浓度的总25-羟基维生 素D (包含25-羟基维生素D2和D3)，总25-羟基维生素D从人体中提取或化学合成。本领 域技术人员根据国际参考物对本试剂盒的校准品和质控品进行赋值，并且采用本领域常用 的方法自行制备适当浓度的校准品和质控品。 本专利技术总25-羟基维生素D检测试剂盒中包含的校准品分为已知总25-羟基维 生素D浓度的缓冲液，总25-羟基维生素D的浓度分别为0ng/ml、8. 75ng/ml、17. 5ng/ml、 35ng/ml、70ng/ml和140ng/ml。质控品为已知2个总25-羟基维生素D浓度的缓冲液，2个 浓度分别为高浓度105. Ong/ml和低浓度15. Ong/ml ;质控品和校准品可以为液体或者冻干 粉末。 本专利技术试剂1为含有表面活性剂Tween-20的酸性缓冲液。由于25-羟基维生素 D在人体血液本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种总25‑羟基维生素D检测试剂盒，其特征在于:包括试剂1、试剂2和试剂3，所述试剂1是含有表面活性剂的酸性解离液；所述试剂2由含有抗人25‑羟基维生素D2和D3抗体置于适当的缓冲液中构成；所述试剂3是表面标记有25‑羟基维生素D2和D3的聚苯乙烯胶乳颗粒置于适当的缓冲液中构成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：方亮，邹炳德，邹继华，
申请(专利权)人：宁波美康生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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