大豆黄色相关基因分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种大豆黄色相关基因分子标记及其应用。本发明专利技术提供了大豆基因组中Glyma13g30560基因的第1727位核苷酸的单核苷酸多态性在鉴定大豆黄色突变体中的应用；所述单核苷酸多态性是指所述大豆基因组中Glyma13g30560基因的第1727位核苷酸为G或A。本发明专利技术提供的功能标记可以准确用于本发明专利技术所示的大豆黄色突变体与野生型组配后代真伪性鉴定及其它相关研究工作。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及一种大豆黄色相关基因分子标记开发及其应用。
技术介绍
叶色变异是比较常见的突变性状，一般在苗期表达，但少数突变体直到生育后期 才发生叶色突变。由于突变基因往往是直接或间接影响叶绿素的合成和降解，改变叶绿素 含量，所以叶色突变体也称为叶绿素突变体。叶色变异通常影响突变体光合效率，造成作物 减产，严重时甚至导致植株死亡，因此过去常被认为是无意义的突变。近年来，叶色突变体 的利用价值受到越来越多关注。在育种工作中，叶色变异可作为标记性状，简化良种繁育和 杂交种生产；植株可为作物遗传育种提供优良种质资源。 在基础研究中，颜色改变是研究植物光合作用、光形态建成、激素生理以及抗病机 制等一系列生理代谢过程的理想材料；同时颜色突变体可用于分析鉴定基因功能，了解基 因互作。因而，研究大豆黄化突变体不仅有理论意义，同时还有重要的实际应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种大豆黄色相关基因分子标记的开发及其应用。 本专利技术所提供的应用具体为大豆基因组中Glymal3g30560基因（Glycinemax Wm82.a2.vl，下同）第1727位核苷酸的单核苷酸多态性在鉴定大豆黄色突变体中的应用； 所述单核苷酸多态性是指所述大豆基因组中Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸为G 或A。 当然，用于鉴定大豆基因组中Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸为G还是A 的物质在鉴定大豆黄色突变体的应用也属于本专利技术的保护范围。 在所述应用中，所述用于鉴定大豆基因组中Glymal3g30560基因的第1727位核苷 酸为G还是A的物质包括且不限于本专利技术的引物对；所述引物对中的上游引物根据所述大 豆基因组中Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸的上游序列进行设计，所述引物对中的 下游引物根据所述大豆基因组中Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸的下游序列进行 设计。 所述用于鉴定大豆基因组中Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸为G还是A 的物质除了包括且不限于本专利技术的引物对外，还包括与所述引物对相互配合使用的限制性 内切酶以及其它检测方法。 在本专利技术中，所述用于鉴定大豆基因组中Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸 为G还是A的物质为如下（a)或（b)或（c): (a)引物对A; (b)所述引物对A和引物对B; (c)所述引物对A、所述引物对B和限制性内切酶MboII; 所述引物对A为由序列表中序列4所示的单链DNA和序列5所示的单链DNA组成 的引物对；所述引物对B为由序列表中序列6所示的单链DNA和序列7所示的单链DNA组 成的引物对。 本专利技术还提供了用于鉴定大豆黄化突变体和/或鉴定待测大豆基因组中 Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸为G还是A的引物对、成套引物以及试剂盒。 本专利技术所提供的用于鉴定大豆黄色突变体的引物对，具体为序列表中序列4和序 列5所示单链DNA组成的引物对。 在实际应用中，所述引物对中的两条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比可为1 : 1〇 本专利技术所提供的用于鉴定大豆黄色突变体的成套引物对，具体由如下引物对A和 引物对B组成：所述引物对A为由序列表中序列4所示的单链DNA和序列5所示的单链DNA 组成的引物对；所述引物对B为由序列表中序列6所示的单链DNA和序列7所示的单链DNA 组成的引物对。 本专利技术所提供的用于鉴定大豆黄色突变体的试剂盒，含有如下引物对A、引物对B 和限制性内切酶MboII:所述引物对A为由序列表中序列4所示的单链DNA和序列5所示 的单链DNA组成的引物对；所述引物对B为由序列表中序列6所示的单链DNA和序列7所 示的单链DNA组成的引物对。 所述引物对或所述成套引物对或所述试剂盒在鉴定待测大豆基因组中 Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸为G还是A中的应用也属于本专利技术的保护范围。 本专利技术还提供了一种鉴定或辅助鉴定待测大豆是否为大豆黄色突变体的方法。 本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定待测大豆是否为大豆黄色突变体的方法，具体可 包括如下步骤：检测待测大豆的基因组中Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸为A还是 G还是A和G，根据检测结果按照如下确定所述待测大豆是否为大豆黄色突变体：若所述待 测大豆的基因组中Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸为A，则所述待测大豆为或候选 为大豆黄色突变体；若所述待测大豆的基因组中Glymal3g30560基因的第1727位核苷酸为 G或者为A和G，则所述待测大豆不为或候选不为大豆黄色突变体。 更加具体的，本专利技术所提供的方法可为如下（A)-(C)中任一种： ⑷包括： (A1)以待测大豆的基因组DNA为模板，采用所述引物对A(序列4和序列5)进行 PCR扩增，得到PCR产物； (A2)对步骤（A1)所得的PCR产物进行测序，根据测序结果按照如下方法确定所述 待测大豆的是否为大豆黄色突变体：若所述PCR产物的序列为序列表中序列2,第644位核 苷酸为A，则所述待测大豆为或候选为大豆黄色突变体；若所述PCR产物的序列为序列表中 序列2,第644位核苷酸为G或为G与A的叠加（所述G与A的叠加是由于所述待测大豆为 杂合，测序图上该位点呈现G与A的叠加峰），则所述待测大豆不为或候选不为大豆黄色突 变体（即为或候选为野生型大豆）； (B)包括： (B1)以待测大豆的基因组DNA为模板，采用所述引物对A(序列4和序列5)进行 PCR扩增，得到PCR产物1 ;再以所述PCR产物1为模板，采用所述引物对B(序列6和序列 7)进行PCR扩增，得到PCR产物2 ; (B2)对步骤（B1)所得的PCR产物2进行测序，根据测序结果按照如下方法确定所 述待测大豆的是否为大豆黄色突变体：若所述PCR产物2的序列为序列表中序列3,第242 位核苷酸为A，则所述待测大豆为或候选为大豆黄色突变体；若所述PCR产物2的序列为序 列表中序列3,第242位核苷酸为G或为G与A的叠加（所述G与A的叠加是由于所述待测 大豆为杂合，测序图上该位点呈现G与A的叠加峰），则所述待测大豆不为或候选不为大豆 黄色突变体（即为或候选为野生型大豆）； (C)包括： (C1)以待测大豆的基因组DNA为模板，采用所述引物对A(序列4和序列5)进行PCR扩增，得到PCR产物1 ;以所述PCR产物1为模板，采用所述引物对B(序列6和序列7) 进行PCR扩增，得到PCR产物2 ;再采用所述限制性内切酶MboII对所述PCR产物2进行酶 切，得到酶切产物； (C2)根据步骤（C1)所得的酶切产物，按照如下方法确定所述待测大豆的是否为 大豆黄色突变体：若所述酶切产物仅为320bp的DNA片段，则所述待测大豆为或候选为大豆 黄色突变体；若所述酶切产物为254bp和66bp的两个DNA片段，或为254bp、66bp和320bp 的三个DNA片段（由于所述待测大豆为杂合，因此所述PCR产物2既有不能被所述限制性 内切酶MboII切开的DNA片段，也有可以被所述限制性内切酶MboII切开的DNA片段），则 所述待测大豆不为或候选不为大豆黄色突变体（即为或本文档来自技高网...

【技术保护点】
大豆基因组中Glyma13g30560基因的第1727位核苷酸的单核苷酸多态性在鉴定大豆黄色突变体中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邱丽娟，李忠峰，刘章雄，洪慧龙，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11