本发明专利技术公开了一株嗜线虫沙雷氏菌及其应用。该菌株分类命名为嗜线虫沙雷氏菌(Serratia nematodiphila)PR4，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年8月28日，保藏编号：CGMCC No.9614。本发明专利技术菌株对蛋白质具有很好的降解效果。福林芬法测得该菌株所产蛋白酶酶活力为3.03IU。用钼蓝比色法测得该菌株具有很好的溶磷效果。表明PR4菌株对促进烟草生长具有潜在的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物根际促生菌及其应用
，具体涉及一株促进烟草生长的具 有降解蛋白质和解磷功能的嗜线虫沙雷氏菌及其促生特性的应用。
技术介绍
烟草是前科（Solanaceae)烟草属（Nicotiana) -年生草本植物。喜温、喜光、耐 旱、怕涝、耐瘠、需钾较多。烟草叶、茎、花萼和果都有多细胞的毛，其中腺毛细胞中含有叶绿 素，能综合含有树胶和树脂的渗出物，与烟草的香气有一定关系。烟草叶柄不明显或成翅状 柄，其圆锥花序顶生，花萼筒状，花冠漏斗状，末端粉红色。蒴果，种子黄褐色。烟草原产于南 美洲，因其叶片含烟碱（尼古丁），采收后经过调制、分级和加工处理，可制卷烟、雪茄烟、旱 烟等，是烟草工业重要的原料。近年来我国烟田施肥出现很大的问题，具体表现为：（1)肥 料利用率不高，有资料表明我国烤烟肥料利用率较低，南方一些省份肥料利用率仅20%左 右。其原因是对肥料利用率的相关性技术缺乏深入研究，特别是对南方烟区肥料流失的控 制和北方烟区的营养吸收障碍等没有从根本上研究解决；(2)烟田土壤肥力不同程度出现 下降趋势，由于缺乏良好的培肥地力措施，加之轮作条件差，烟田常年连作，土壤主要营养 元素都不同程度出现下降趋势，同时土壤物理性状变劣；（3)营养不平衡，重氮轻磷缺钾； (4)对旱作烟草的施肥技术缺乏研究。 研究发现植物根际土壤中含有一些可以促进植物生长的微生物，一般有固氮、解 磷、释钾、产生植物激素和分泌抗生素等能力或至少具有其中之一能力的细菌、蓝细菌等。 统称为植物根际促生菌（PGPR)，其促生作用机制主要有以下几大类：提供植物营养物质、 产生植物生长调节物质、植物根际生物修复剂和环境胁迫调节剂等。但筛选出具有多种功 能且高效的微生物菌株一直是本领域追寻的目标。蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶。蛋白酶种类的多样性和水解活性的专一性， 使其在食品、皮革、洗涤剂等工业生产领域成为具有重要商业价值的工业酶。土壤中含有 大量有机物，可以利用PGPR产生蛋白酶将土壤中的含氮的有机物分解，产生可以供给烟草 使用的氮，这样就可以减少化肥的使用，避免了对土壤及环境的破坏。现在报道的降解角 蛋白的有苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis)，降解骨胶原蛋白的有活泼微球菌 (Micrococcusaqilis)。但目前还未见同时具有高效降解蛋白质和解磷功能的嗜线虫沙雷 氏菌及其促进烟草生长的应用报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株嗜线虫沙雷氏菌及其促进烟草生长的应用，该菌株具有 降解蛋白质和解磷功能。 一株嗜线虫沙雷氏菌（Serratianematodiphila)PR4,该菌株保藏编号：CGMCC No. 9614。保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，地址：北京 市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年8月28日。 所述的嗜线虫沙雷氏菌的最适培养条件，采用的LB培养基：蛋白胨10g，酵母浸膏 5g，NaCl10g，蒸馏水 1000ml，121°C灭菌 20min，培养温度 37°C，pH7.0。 所述嗜线虫沙雷氏菌的应用，用于降解蛋白质和/或解磷，从而促进植物的生长。 所述的的植物包括烟草。 本专利技术菌株培养后得到菌悬液作为液态菌剂使用，菌悬液的菌数浓度cfu多10s 个/mL。菌剂的使用方法：缓苗后灌根，每株烟苗加菌剂lmL。 本专利技术菌株的菌落及菌体特征为：该菌株在LB培养基（酵母浸膏5g，蛋白胨10g， 氯化钠l〇g，蒸馏水l〇〇〇mL，琼脂15~20g，121°C灭菌20min，ρΗ7· 0,37°C)上培养48h后 菌落呈圆形，不透明，表面光滑湿润，乳白色，边缘整齐，菌落稍凸起。菌体呈杆状，产芽孢， 革兰氏染色阴性。 该菌株的生理生化特征为：甲基红试验阴性、v-ρ试验阳性、淀粉水解试验阴性、 硝酸盐还原试验阳性、吲哚试验阴性、硫化氢试验阳性、柠檬酸盐利用试验阳性、葡萄糖发 酵试验阳性、蔗糖发酵试验阳性、麦芽糖发酵试验阳性、乳糖发酵试验阳性、甘露醇发酵试 验阳性、葡萄糖碳源利用试验阳性、乳糖碳源利用试验阳性、甘露醇碳源利用试验阳性、蔗 糖碳源利用试验阳性、麦芽糖碳源利用试验阳性、柠檬酸碳源利用试验阴性、2 %NaCl耐盐 试验阳性、5 %NaCl耐盐试验阳性、7 %NaCl耐盐试验阳性、10 %NaCl耐盐试验阳性、产氨 试验阳性。 该菌株的最适培养条件为：LB培养基：蛋白胨10g，酵母浸膏5g，NaCl10g，蒸馏水 1000ml，温度 37 °C，pH7. 0。 该菌株可以用于制备微生物菌剂；应用时用LB培养基培养得菌悬液（菌悬液的菌 数浓度cfu多10s个/mL)，作为液态菌剂。 菌剂的使用方法：缓苗后灌根，每株烟苗加菌剂lmL。 对本专利技术的菌株的功能测定结果如下：在脱脂奶粉的培养基（脱脂奶粉3. 0g，琼 脂3. 0g，去离子水200mL，ρΗ7· 0~7. 2,108°C灭菌20min)中培养24h(37°C)后测得其菌落 半径为〇. 2cm，透明圈半径为1. 4cm，透明圈半径与菌落半径之比为7 ;用国标法以酪蛋白为 底物测得PR4的蛋白酶酶活为3. 03IU。在蒙金娜固体培养基（葡萄糖10g，（NH4)2S04 0 . 5g， NaCl0· 3g，MgS04 · 7H20 0· 3g，FeS04 0· 03g，MnS04 ·H20 0· 03g;CaC03 5. 0g，KC1 0· 3g， Ca3 (P04) 2 25. 0g，卵磷脂0· 3g，琼脂18~20g，pH值7. 2~7. 4)上培养一周，测得第一天 其菌落直径d为2mm，溶磷圈直径D为5mm，D/d为2. 5,第三天其菌落直径d为3mm，溶磷 圈直径D为12. 5mm，D/d为4. 2,第七天其菌落直径d为3mm，溶磷圈直径D为18mm，D/d为 6 ;在无机磷液体培养基（C6H1206 10. 0g，（NH4)2S04 0· 5g，NaCl0· 3g，KC1 0· 3g，MgS04 · 7H20 0· 3g，FeS04 · 7H20 0· 03g，MnS04 · 4H20 0· 03g，Ca3(P04)2 25. 0g，水 1000mL，pH7. 0-7. 5。） 培养4天后，用钼蓝比色法测定培养液中速效磷的含量变化，从而反应细菌的解磷能力，测 得PR4培养液中速效磷含量为42. 4mg/L。盆栽30天时经PR4处理的烟株叶片数、最大叶片 表面积均大于对照，但是没有达到显著差异，60天时经PR4处理的烟株茎围、叶片数均高于 对照，而株高和表面积略低于对照，茎围在0. 05水平上达到显著水平，90天时经PR4处理 的烟株株高和叶片数要优于对照，经PR4处理的烟草植株的根、茎、叶、植株总鲜重均好于 对照处理，但是只有根达到显著差异，在采收后对生物量的统计中可以看出植株的根、茎、 叶干重以及植株总干重均要优于对照，与对照相比，根干重增幅为26. 58%，茎干重增幅为 16. 83%，叶干重增幅为2. 53%，植株总干重增幅为7. 86%。以上研究结果表明，PR4菌株 可以很好的促进烟草生长，在促进烟草生长方面具有潜在的应用价值。 本专利技术嗜线虫沙雷氏菌（Serr本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株嗜线虫沙雷氏菌(Serratia nematodiphila)PR4，该菌株保藏编号：CGMCC No.9614。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：易建华，周东波，周曙光，彭宇，王东，蒲文宣，汪耀富，孙在军，简永兴，杜秉海，丁延芹，姚良同，
申请(专利权)人：湖南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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