一种基于光子晶体增强荧光的汞离子传感器的制备及应用制造技术

本发明专利技术一种基于光子晶体增强荧光的汞离子传感器制备及其应用，由光子晶体、核酸荧光分子探针和DNA辅助探针构成。光子晶体作为基底，利用DNA的胸腺嘧啶（T）与Hg2+间强的亲和作用，使标记有荧光基团ROX的核酸适体与互补序列构成荧光检测体系。光子晶体薄膜是用制得的PS小球，采用垂直沉积自组装的方法，在玻璃片基底上形成的。光子晶体表面喷金，基于Au-S键合作用，在光子晶体表面自组装巯基修饰的标记有荧光基团ROX的核酸适体，其中ROX的发射波长与光子晶体的禁带相符，以达到增强荧光的效果。本发明专利技术通过利用光子晶体增强荧光的原理，提高了核酸荧光分子的荧光信号强度，从而提高了传感器检测的灵敏度和准确性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于材料制备和分析
，涉及PS小球溶剂挥发自组装制备蛋白石 结构光子晶体的方法，尤其涉及一种基于光子晶体增强荧光的汞离子传感器的制备及应 用。
技术介绍
光子带隙是光子晶体最重要的特征。光子晶体具有和半导体相似的结构，只是将 半导体中周期变化的原子变成了周期变化的两种不同介电常数的介质材料。和半导体材料 一样，介电常数的周期性排列产生了一定的"势场"，当两种材料的介电常数相差足够大时， 在电介质界面上会出现布拉格散射，产生光子带隙，能量落在带隙重的光将不能传播。两种 介质材料的介电常数比（或折射率比）越大，布拉格散射越强烈，就越有可能出现光子带 隙。 重金属汞离子在水体中的污染日益引起人们的关注，其经过食物链的生物放大作 用，进入人体积累在脑、肝和其他器官中，产生慢性中毒，损害肾、脑、胃和肠道，而且能够引 起神经紊乱，甚至引起死亡。另外，Hg2+能与酶中的氨基、二巯基、羧基、羟基以及细胞膜内的 磷酰基结合，使酶失活，造成功能和结构损伤，从而阻碍细胞的生物活性和正常代谢。传统 的痕量Hg2+检测方法主要有原子吸收、电感耦合等离子体发射光谱、化学法（沉淀滴定及元 素分析等）、电导检测法（电导率测定及电位滴定法）、光谱检测法（荧光及紫外-可见光 吸收检测法）和等离子体质谱等技术。然而，这些方法普遍存在检测过程繁琐、仪器昂贵、 运行费用高、复杂的样品预处理、需要专业操作人员等缺点，并不适合现场快速监测和连续 在线分析。 以光子晶体作为布拉格反射镜面实现荧光材料的固态荧光增强。通过共聚物乳胶 微球的竖直沉积自组装，在玻璃基底上制备了具有不同光子禁带的蛋白石（Opal)型光子 晶体，选择发射波长在光子禁带范围内的有机荧光染料，由于有机染料的发射波长在光子 禁带范围内，当其受到激发时发射的荧光会被光子晶体沿禁带方向反射而不能透过光子 晶体，因而有机染料在光晶表面的荧光要比无光晶结构的玻璃表面明显的增强。研究表明， Hg2+能介导胸腺啼啶（T)配对，形成T-Hg 2+-T复合物，其稳定性比正常的Watson-Crick碱 基对还要稳定。基于此特性，通过设计特殊的结构，结合荧光猝灭、纳米金凝聚比色、荧光能 量转移、电化学开关等信号传导模式，近年来发展了一系列简单快速的均相检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是：针对检测分析的高灵敏度、高选择性需求，提供了一种基于光子 晶体增强荧光的汞离子传感器的制备方法。 本专利技术的主要目标是构建一个基于光子晶体增强荧光的检测平台，与传统的核酸 探针传感器相比，通过信号的放大而实现提高传感器的灵敏度。 本专利技术是通过以下技术方案实现的： -种基于光子晶体增强荧光的汞离子传感器，由光子晶体、核酸荧光分子探针和 互补核酸序列构成。首先合成聚苯乙烯微球或者采用改进的StOber法制备Si02球形颗 粒，再采用垂直沉积自组装法合成Opal光子晶体，喷金后修饰核酸荧光分子探针，通过 T-Hg2+_T的键合作用于互补序列配对，进而达到检测Hg2+的目的。包括如下步骤： 1、聚苯乙烯微球的合成 将一定量纯化后的苯乙烯倒入分液漏斗中，依次用NaOH溶液和超纯水洗涤，再用 无水氯化钙将残留少量水除去，最后减压蒸馏得到纯化的苯乙烯。室温下，将苯乙烯单体、 甲基丙烯酸甲酯溶液、丙烯酸、超纯水和十二烷基苯磺酸钠一起加入三口烧瓶，搅拌，水浴 加热后滴加过硫酸铵，恒温反应12h，最后用冰浴冷却至室温，结束反应得到乳白色聚苯乙 烯微球乳液。 将苯乙烯单体、甲基丙烯酸甲酯溶液、丙烯酸和十二烷基苯磺酸钠加入三口瓶后， 调整搅拌转速为650r/min。水浴加热到60°C，20min后将过硫酸铵滴加完毕并调整水浴加 热到80°C，恒温反应12h，最后用冰浴冷却至室温。整个反应始终在匀速搅拌下进行，温度 控制在（80 ±2) °C。 Opal光子晶体的组装也可以是不同粒径的Si02小球，采用改进的StOber法制备 Si0#_形颗粒，通过调整氨水和无水乙醇的比制备不同粒径的Si02，进一步组装成不同禁 带的光子晶体，选取相应的荧光染料。 2、垂直沉积自组装法合成Opal光子晶体 用制得的聚苯乙烯微球乳液，在恒温恒湿箱中于温度50°C -70°C，湿度50-70%的 条件下，采用垂直沉积自组装的方法，将乳胶球沉积在处理好的玻璃片基底上形成规整的 蛋白石光子晶体薄膜。 玻璃片是通过将载玻片切割成1X3. 5cm2的玻璃片，然后配制体积比为3:1的浓 硫酸（97% )双氧水（30% )混合溶液，将玻璃片浸泡其中10分钟以充分清洗玻璃片表面 的污染物（应该向双氧水中注入浓硫酸，此反应非常剧烈，应在通风厨中操作，并戴好防护 用具）。之后将酸液回收，用大量去离子水冲洗玻璃片，再分别用无水乙醇、丙酮、无水乙醇 超声清洗10分钟，最后用氮气吹干，放置于干燥、温暖、避光的环境中。 3、利用磁控派射仪在光子晶体薄膜表面喷射金，将喷有金的光子晶体浸泡在含有 DNA适配体的溶液中lh,然后用去离子水洗涤N2干燥。 将100uM的DNA适配体溶液稀释为10nM的DNA，具体做法是：取luL 100uM的DNA 适配体溶液加10mL无菌水即得10nM的DNA。 4、将上述光子晶体浸泡在含有Hg2+和互补核酸的溶液中40min,然后用去离子水 洗涤N2干燥。 含有Hg2+和互补核酸的溶液的配置： 首先将ImM的Hg2+溶液稀释为luM的Hg 2+溶液，具体做法是：称取固体 HgCl22. 715g,加10mL无菌水即配成ImM Hg2+溶液，然后取10uL ImM Hg2+溶液，加10mL无 菌水即配成luM Hg2+溶液，取luL 100uM互补核酸序列溶液加入已配好luM Hg2+溶液中，最 终得到10nM的互补核酸序列一一Hg2+溶液。 本专利技术的还提供另一种基于光子晶体增强荧光的汞离子传感的制备方法，具体包 括以下步骤： 步骤1. Si02微球的合成： 1. 1将一定量的TE0S与无水乙醇混合，超声得到均匀的TE0S溶液，备用； 1. 2将步骤1. 1得到的TE0S溶液加入到一定量的氨水和的无水乙醇和水混合的 溶液中，磁力搅拌2h，离心洗涤，水洗、乙醇洗各2次，60°C在真空干燥箱中干燥24h~48h 即得到Si02微球； 步骤2.垂直沉积自组装法合成Opal光子晶体： 将步骤1制备的聚苯乙烯微球乳液，置于恒温恒湿箱中在温度为50°C _70°C，湿度 50-70%的条件下，采用垂直沉积自组装的方法，将聚苯乙烯微球乳沉积在基底上形成规整 的蛋白石光子晶体薄膜； 步骤3.利用磁控溅射仪在步骤2制备得到的光子晶体薄膜表面喷射金，将喷有 金的光子晶体浸泡在含有核酸荧光分子探针的溶液中，静置〇. 8-1. 2h，然后用去离子水洗 涤，N2干燥，得到连接有核酸荧光分子探针的光子晶体； 步骤4.将步骤3所得光子晶体浸泡在含有Hg2+和互补核酸的溶液中35_50min， 然后用去离子水洗涤N2干燥，基于光子晶体增强荧光的汞离子传感器。 进一步，所述的基底为玻璃、石英或云母中的一种。 进一步，所述步骤3中，所述核酸荧光分子探针通过5 '端修饰的巯基（SH)连接 在喷有金的光子晶体表面。 进一步，所述步骤4中，所述光子晶体上的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于光子晶体增强荧光的汞离子传感器的制备方法，其特征在于：该传感器由光子晶体(1)、核酸荧光分子探针(2)和DNA辅助探针(3)构成，基于Au‑S键合作用，在喷有金的光子晶体表面自组装巯基修饰的标记有荧光基团ROX的核酸适体，由于金对荧光的猝灭作用，起初ROX处于猝灭状态，利用DNA的胸腺嘧啶（T）与Hg2+间强的亲和作用，核酸适体与互补序列配对后，荧光基团ROX远离金表面，荧光猝灭作用减弱，利用光子晶体布拉格反射性能，提高荧光检测的灵敏度的基于光子晶体增强荧光的汞离子传感器,所述DNA辅助探针(3)包括汞离子和互补核酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：温永强，杨志林，焦翔宇，王文谦，庞铎，雷霞，张学记，
申请(专利权)人：北京科技大学，
类型：发明
国别省市：北京;11