本发明专利技术公开了一种制备恒河猴肝癌模型的方法，它是将二乙基亚硝胺施用于灵长类动物，二乙基亚硝胺的施用剂量为：40mg/Kg/次。本发明专利技术还提供了一种恒河猴肝癌细胞株及其用途。本发明专利技术动物模型可以用于啮齿类动物模型无法完成的肝癌预防因素、抗肝癌新药、肝癌放射治疗、肝癌外科手术治疗、影像学诊断等新技术的评价。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及一种恒河猴肝癌模型、恒河猴肝癌细胞株及其用途。
技术介绍
肝癌，即肝细胞癌化patocellularcarcinoma,肥C，是肝脏常见的恶性肿瘤，每年 新诊病例达70万，仅2012年全球肝癌新发病例为78. 2万，死亡病例为74. 6万，目前因其 治疗措施十分有限，肝癌严重威胁着人类健康和生命。目前中国内地肝癌发病已位居消化 道恶性肿瘤死亡率之首，发病人数占全球的55 %，死亡人数为全球的45%。如何提升肝癌 的诊治水平、提高患者的生活质量是肝癌防治研究中急需解决的根本问题。肝癌动物模型， 尤其是能更好预测临床疗效的肝癌动物模型是肝癌诊断、治疗新措施、新技术及抗癌新药 的研发成功的关键。迄今，有关肿瘤基础研究和抗肿瘤新药疗效评价的体内试验研究都是 用晒齿动物模型，包括免疫健全小鼠的可移植性同种动物模型和免疫缺陷或基因工程小鼠 人体肿瘤可移植异种动物模型。虽然晒齿动物肿瘤模型为肿瘤基础研究和抗肿瘤新药疗 效评价付出了巨大贡献，在相关研究领域广泛应用，但仍然存在许多缺陷，如：荷瘤动物存 活时间短，不适用于长时观察；小动物对外科手术、放疗等耐受差，不适用于连续动态观察； 所荷肿瘤组织小，不适宜活检动态观察等。Smith等总结了雜猴、其他灵长类动物、狗和大鼠 药物代谢和人的相关性，发现恒河猴中有71%经研究的化合物与人类相关性较好，狗的实 验结果有19%、而大鼠仅有14%与人类近似。可见，利用晒齿动物模型研究疾病机制及研 发药物，所获结果与人类临床疗效相关性很低，致使大多数新药在临床试验中被淘汰。晒齿 动物在解剖学、病理生理和药物代谢反应等方面与人类差异较大，其试验结果与临床相关 性或疗效可预测性存在很大差距，因此建立新的、更为有效的非人灵长目大动物肝癌动物 模型势在必行。 恒河猴在解剖学、病理生理、免疫和药物代谢反应等方面与人类高度相似， 其基因序列与人类疾病直系同源基因和药物祀点具有高度相似性。化学致癌剂，如： N-Nitrosodiethylamine(DENA)，2-amin〇-3-methylimidazoquinoline (IQ),aflatoxin BI, sterimatocysti,皿V等可诱发恒河猴肝癌，其中W DENA对恒河猴致癌性较强，较稳定， 皿V+DENA诱发的恒河猴肝细胞癌，其病理学发现与人肝癌相似。研究结果提示，DENA等可 用于建立化学诱导恒河猴肝肿瘤模型。但既往研究主要关注化学致癌剂的致癌作用，并未 提出通过化学致癌剂诱发恒河猴肝肝细胞癌，建立恒河猴肝癌模型、可移植性猴肝细胞癌 细胞株、体内异种异位和原位或同种异位和原位可移植性肝癌模型，W期用于临床前肝癌 诊断、治疗新措施、新技术及抗癌新药的研发。 目前世界上尚无可重复性建立的恒河猴肝癌模型和可移植性恒河猴肝细胞癌细 胞株。
技术实现思路
阳〇化]本专利技术的技术方案是提供了二乙基亚硝胺在制备用于筛选治疗肝癌药物的动物 模型中的用途。本专利技术的另一技术方案是提供了恒河猴肝癌模型的建立。 本专利技术提供了一种制备肝癌动物模型的方法，它是将二乙基亚硝胺施用于灵长类 动物，二乙基亚硝胺的施用方法和剂量为：40mg/Kg/次。 优选地，所述灵长类动物为恒河猴。 优选地，所述的二乙基亚硝胺的施用方法和剂量为：腹腔注射给药，每次40mg/ Kg，每周一次，共施用20次。 本专利技术还提供了该方法制备得到的肝癌动物模型。 本专利技术还提供了一种恒河猴肝癌细胞株，它中国典型培养物保藏中屯、保藏的保藏 号：CCTCCNO:C2015142的恒河猴肝癌细胞株M12353。 本专利技术恒河猴肝癌细胞株M12353,于2015年9月9日保藏在中国典型培养物 保藏中屯、，其简称为CCTCC，其地址为：中国.武汉.武汉大学，其保藏号为=CCTCCNO: C2015142。 其中，前述细胞株是由前述肝癌模型分离纯化制备。 本专利技术还提供了前述恒河猴肝癌细胞株在制备肝癌动物模型中的用途。 优选地，所述肝癌动物模型是恒河猴肝癌模型。 本专利技术还提供了前述肝癌动物模型、前述恒河猴肝癌细胞株在筛选治疗肝癌的药 物和/或肝癌预防因素、抗肝癌新药、肝癌放射治疗、肝癌外科手术治疗、影像学诊断的研 究中的用途。 本专利技术还提供了一种筛选治疗肝癌的药物的方法，包括如下步骤： a将候选物施用于前述肝癌动物模型、前述恒河猴肝癌细胞株； b、用前述肝癌动物模型、前述恒河猴肝癌细胞株评价潜在的治疗肝癌的药物。 本专利技术方法成功建立的恒河猴肝癌模型，可W用于晒齿类动物模型无法完成的肝 癌预防因素、抗肝癌新药、肝癌放射治疗、肝癌外科手术治疗、影像学诊断等实验研究。 另一方面，本专利技术还成功建立可W长期稳定传代的恒河猴肝癌细胞株M12353,其 可在体外长期稳定传代，目前已传代>80,已持续时间>16月，免疫缺陷动物（裸小鼠）异种 移植具有成瘤性，每点接种l-2Xl〇6细胞，成瘤率为100%，潜伏期为10-14天；可W移植 于恒河猴体内成瘤，制备同种恒河猴肝癌模型，用于肝癌预防因素、抗肝癌新药、肝癌放射 治疗、肝癌外科手术治疗、影像学诊断等实验研究，应用前景良好。 W下通过【具体实施方式】对本专利技术作进一步的详细描述，但并不限制本专利技术，本领 域技术人员可W根据本专利技术作出各种改变和变形，只要不脱离本专利技术的精神，均应属于本 专利技术所附权利要求的范围。【附图说明】 图1猴M12393多发性肝肿瘤 图2恒河猴肝癌CT照片 图3担河猴血清白aFP检测结果3A-2 -化-2为内参标准；A3-7-E3-7为不同稀 释度的荷肝癌猴血清；F3-7-册-7为正常猴血清。 阳0巧]图4M12393肝癌组织病理学形态 图5M12385肝癌组织病理学形态 图6恒河猴M12353肝癌大体形态 图7M12353肝癌组织病理学形态 图8M12353肝癌组织裸小鼠皮下接种移植成瘤 图9M12353肝癌组织裸小鼠移植成瘤组织病理学形态 图10M12353肝癌组织块体外培养形态 图11M12353肝癌细胞形态 图12M12353肝癌细胞裸小鼠移植成瘤组织病理学形态 图13猴肝癌细胞M12353生长曲线 图14化疗药物对猴肝癌细胞M12353及人肝癌细胞的生长抑制作用 图15化疗药物5-氣尿喀晚巧-Fu)对猴肝癌细胞M12353及人肝癌细胞生长抑制 作用的形态观察【具体实施方式】 实施例1本专利技术动物模型的制备 阳0測 1、材料与方法： 1. 1实验材料 W40] 出生1周内健康恒河猴，雄性，体重0. 5-0. 8kg，6只，购自成都格林豪斯生物科技 有限公司。 阳OW 1.2主要试剂 二乙基亚硝胺：购自Sigma公司。 生理盐水购自西南药业股份有限公司）。 W44] 1. 3主要溶液的配制 W45] 二乙基亚硝胺溶液的配制：取DENA原液（Sigma)25ml，加注射用生理盐水75ml，配制成20%DENA水溶液，避 光保存备用。 W47] 1. 4主要仪器 一次性医用灭菌注射器：购自四川双陆医疗器械有限公司。 1. 5造模方法 用进20%DENA水溶液腹腔注射给药，40mg/kg，每周一次，共注射20次；每2周称 体重，观察动物一般情况。 2实验结果 阳05引 2. 1 DENA诱发恒河猴肝细胞癌CT本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备恒河猴肝癌动物模型的方法，其特征在于：它是将二乙基亚硝胺施用于灵长类动物，二乙基亚硝胺的施用剂量为：40mg/Kg/次。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王修杰，钟治晖，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，四川康城生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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