一种麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，该方法采用三维液相色谱技术，以正己烷－乙醇为流动相，以正相硅胶色谱柱为一维制备色谱柱，对甘遂提取物进行组分切割，收集目标组分为一维分离组分；再以Silica(250mm×20mm)色谱柱为二维制备色谱柱，对一维分离组分进行组分切割，收集，旋转蒸发浓缩，得到二维分离组分；再以X-Amide(250mm×10mm)色谱柱为三维制备色谱柱，得到高纯度的kansuinin G，纯度可以达到98％以上；本发明专利技术制备过程重复性高，可操作性好，同时甘遂资源丰富，容易获取，适合大规模生产的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化合物生产领域，尤其是一种麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方 法。
技术介绍
萜类化合物（Terpenoids)是一类骨架多样、数量庞大、生物活性广泛的一类重要 的天然药物化学成分。中药甘遂的主要成分就是此类化合物，包括三萜类和二萜类化合物， 而麻风树烷型二萜类化合物是甘遂二萜类成分之一，多为一个5元环与一个12元环骈合在 一起而形成，同时某些位置的羟基形成醚或酯桥。kansuininG就是其中一种，具有广泛的 生物活性，其结构如下： 研究表明，kansuininG存在于甘遂中。现行《中国药典》收录的甘遂为大戟科大 戟属植物甘遂的干燥块根。性寒，味苦；有毒。现代研究表明，甘遂化学成分具有抗氧化、 抗肿瘤、抗生育、抗病毒、泻下和免疫抑制等作用。 但是关于甘遂的化学成分，传统提取方法都是通过液液萃取的方式进行，该种方 法存在许多缺陷，如批次之间不具有重复性，整个提取过程的时间周期长，试剂耗费量大 等。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种麻风树烷型二萜类单体化合物的制备 方法。 为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是： -种麻风树烧型二砲类单体化合物（kansuininG)的制备方法，具体步骤如下： (1)制备甘遂粗提物：以甘遂为原料，磨成粉末状得到干燥的甘遂粗粉，甘遂粗粉 与乙酸乙酯的料液比按kg/L计1: (8-10)将甘遂粗粉用乙酸乙酯常温下浸泡5h，间歇搅拌， 提取1-3次，静置过夜，取上清，过滤，所得滤液进行减压浓缩至干，溶于正己烷-乙醇溶液 中，进行减压抽滤，得到甘遂浓度为50-500mg/mL的提取液； (2)对所得到的提取液进行一维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机 相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；进样量为50-300mL/针；流动相流速为600mL/min;检 测器为紫外检测器，检测波长200-260nm;梯度洗脱；根据紫外吸收光谱收集目的组分，减 压浓缩至干，得到一维液相组分； (3)用乙醇体积分数为30-70 %的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解一维液相组分， 溶解至浓度为50-100mg/mL; (4)进行二维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正 己烷，B相是乙醇；进样量为0. 3-1.OmL/针；流动相流速为10-18mL/min;检测器为紫外 检测器，检测波长200-260nm;等度洗脱；根据紫外吸收光谱收集目的组分（GS-7-5峰 (35. 0-41. 5min)作为目的组分），减压浓缩至干，得到二维液相组分； (5)用乙醇体积分数为10-50 %的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解二维液相组分， 溶解至浓度为50-200μg/mL; (6)进行三维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己 烷，B相是乙醇；进样量为10-100μL/针；流动相流速为3-5mL/min;检测器为紫外检测器， 检测波长200-260nm;等度洗脱；根据紫外吸收光谱收集目的组分，减压浓缩至干，得到目 的产物。 优选的，上述麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，所述步骤（2)中一 维液相色谱分离采用的色谱柱为正相硅胶轴向加压色谱柱，填料为AgelaInnoval silica(250mmX150mm; 10μm，100A:)，使用时柱温为室温或 25-40°C。 优选的，上述麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，所述步骤（4)中二维液 相色谱采用的色谱柱为：HanbonSilica色谱柱（250mmX20mm;10ym，1〇〇A)，使用时柱 温为室温或25-40 °C。 优选的，上述麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，所述步骤(6)中三维液 相色谱采用的色谱柱为：AcchromX-Amide色谱柱（250mmX10mm;10ym，1〇〇/\ )，使用时 柱温为室温或25-40 °C。 优选的，上述麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，所述步骤（1) (2) (4) (6) 中减压浓缩采用旋转蒸发仪进行，工艺条件为真空度0. 05-0. 08Mpa、温度50-60°C。 优选的，上述麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，具体步骤如下： (1)制备甘遂粗提物：以甘遂为原料，磨成粉末状得到干燥的甘遂粗粉，甘遂粗粉 与乙酸乙酯的料液比按kg/L计1:9将甘遂粗粉用乙酸乙酯常温下浸泡5h，间歇搅拌，提取 3次，静置过夜，取上清，过滤，所得滤液进行旋转蒸发至干，溶于正己烷-乙醇溶液中，进行 减压抽滤，得到甘遂浓度为94mg/mL的提取液； (2)对所得到的提取液进行一维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机 相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；进样量为150mL/针；流动相流速为600mL/min;检测器 为紫外检测器，检测波长210nm;梯度洗脱--0-20%B洗脱25min，100%B洗脱8min;根 据紫外吸收光谱收集目的组分，旋转蒸发浓缩至干，得到一维液相组分； (3)用乙醇体积分数为60 %的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶 解至浓度为73mg/mL; (4)进行二维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己 烧，B相是乙醇；进样量为0. 7mL/针；流动相流速为13mL/min;检测器为紫外检测器，检测 波长210nm;等度洗脱一一5%B等度洗脱60min;根据紫外吸收光谱收集目的组分（GS-7-5 峰（35. 0-41. 5min)作为目的组分），旋转蒸发浓缩至干，得到二维液相组分； (5)用乙醇体积分数为50%的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解二维液相组分，溶 解至浓度为84 μ g/mL ; (6)进行三维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己 烷，B相是乙醇；进样量为20μL/针；流动相流速为4mL/min;检测器为紫外检测器，检测波 长210nm;等度洗脱一一10%B等度洗脱16min;根据紫外吸收光谱收集目的组分，旋转蒸 发浓缩至干，得到目的产物。 本专利技术的有益效果是： 上述麻风树烧型二砲类单体化合物，采用三维液相色谱技术提取kansuininG，将 提取物直接溶解，通过制备型高效液相色谱技术进行分离，大大减少了提取分离的工作量， 具有分离效率高，产品纯度高达98%以上，重复性好，仪器自动化程度高，得到的物质组分 批次之间一致性高，可操作性好，经工艺放大后可以运用于工业生产等优点，所得单体化合 物容易积累到一定量，为进一步探索单体化合物的药效学奠定基础，适合大规模生产的要 求。【附图说明】 图1是从甘遂中分离纯化kansuininG的一维高效制备液相色谱图； 图2是从甘遂中分离纯化kansuininG的二维高效制备液相色谱图； 图3是从甘遂中分离纯化kansuininG的三维高效制备液相色谱图； 图4是本专利技术所得到的目的组分kansuininG的分析型高效液相色谱图。【具体实施方式】 为了使本领域的技术人员更好的理解本专利技术的技术方案，下面结合附图及具体实 施方式对本专利技术所述技术方案作进一步的详细说明。除非另有说明，本专利技术使用的所有科 学和技术术语具有与本专利技术所属
人员通常理解的相同含义。 实施例1 以甘遂为原料，磨成粉末状后用乙酸乙酯在室温下浸泡5当本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种麻风树烷型二萜类单体化合物的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)制备甘遂粗提物：以甘遂为原料，磨成粉末状得到干燥的甘遂粗粉，甘遂粗粉与乙酸乙酯的料液比按kg/L计1:(8‑10)将甘遂粗粉用乙酸乙酯常温下浸泡5h，间歇搅拌，提取1‑3次，静置过夜，取上清，过滤，所得滤液进行减压浓缩至干，溶于正己烷‑乙醇溶液中，进行减压抽滤，得到甘遂浓度为50‑500mg/mL的提取液；(2)对所得到的提取液进行一维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；进样量为50‑300mL/针；流动相流速为600mL/mi n；检测器为紫外检测器，检测波长200‑260nm；梯度洗脱；根据紫外吸收光谱收集目的组分，减压浓缩至干，得到一维液相组分；(3)用乙醇体积分数为30‑70％的乙醇‑正己烷二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至浓度为50‑100mg/mL；(4)进行二维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；进样量为0.3‑1.0mL/针；流动相流速为10‑18mL/mi n；检测器为紫外检测器，检测波长200‑260nm；等度洗脱；根据紫外吸收光谱收集目的组分，减压浓缩至干，得到二维液相组分；(5)用乙醇体积分数为10‑50％的乙醇‑正己烷二元混合溶剂溶解二维液相组分，溶解至浓度为50‑200μg/mL；(6)进行三维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；进样量为10‑100μL/针；流动相流速为3‑5mL/mi n；检测器为紫外检测器，检测波长200‑260nm；等度洗脱；根据紫外吸收光谱收集目的组分，减压浓缩至干，得到目的产物。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：张耀洲，马红，杨珊珊，陆洪，庞莉，王欢欢，韩朝，李上文，盖其静，杜思邈，
申请(专利权)人：天津耀宇生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12