识别莫西菌素的磁性荧光分子印迹材料及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种识别莫西菌素的磁性荧光分子印迹材料及其制备方法。本发明专利技术的制备方法包括：步骤A)、制备磁性明胶；步骤B)、修饰异硫氰酸荧光素；以及步骤C)、制备分子印迹膜。本发明专利技术制备的磁性荧光分子印迹材料可以直接萃取和分析复杂样本中的莫西菌素，具有选择性好、基质干扰小、萃取效率高、灵敏度好、分析时间短、价格低廉的优点。本发明专利技术制备的磁性荧光分子印迹材料既可以满足快速检测技术中所需要的高效高选择性的净化富集，又可以不依赖大型分析仪器，进行快速灵敏的发光检测，真正实现复杂样本中痕量物质的快速检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品安全领域，具体涉及一种用于识别莫西菌素的磁性荧光分子印迹 材料及其制备方法。
技术介绍
莫西菌素（Moxidectin)是一种新型抗寄生虫药，是由链霉菌发酵产生、半合成 的、成分单一的大环内酯类药物。该药具有对害虫作用强烈、用药量少、对人畜安全、不污染 环境、只杀害虫、不伤害天敌，也不易产生抗性的特点，可作为防止该类药物产生抗性的复 配及轮换用药，是目前最有前途的广谱、高效、新型无交叉抗性的生物杀虫剂。 尽管莫西菌素具有较高的安全性，但是在我国尚未批准使用，而国外已经广泛应 用此类药物。因此，十分有必要建立动物源食品中多种米尔贝霉素的检测方法，做好相关技 术储备，以保障我国进口食品安全，同时，该方法的建立对于构建我国的技术贸易壁皇体系 具有积极的意义。 对于莫西菌素而言，目前国外建立了相应的检测标准，目前国外对米尔贝霉素类 药物，除了莫西菌素之外，均未制定残留限量标准，欧盟、美国、日本对莫西菌素在牛/羊肉 中的最高残留限量为20 μ g/kg，牛/羊肝脏中为100 μ g/kg，牛/羊肾脏中为50 μ g/kg，牛 乳中为40 μ g/kg。而我国尚无莫西菌素检测的国家标准。 对于莫西菌素的分析，常规方法是采用C18固相萃取柱进行萃取，液相色谱荧光 分析。但是，一方面由于缺乏选择性，其对复杂样本的净化效果不好，容易带来基质干扰；二 是分析时间长，需要衍生化用于荧光分析。 因此，开发一种快速、高灵敏、高通量检测技术势在必行。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术希望提供一种能够高选择性地识别莫细菌素的材料的制备 方法及相应材料。 具体而言，本专利技术提供一种识别莫西菌素的磁性荧光分子印迹材料的制备方法， 其特征在于，所述方法包括： 步骤A)、制备磁性明胶； 步骤B)、修饰异硫氰酸荧光素；以及 步骤C)、制备分子印迹膜。 进一步地，所述步骤A)包括： 步骤A1)、将第一预定量的明胶溶解于水中，获得明胶溶液； 步骤A2)、向所述明胶溶液中加入三氯化铁和硫酸铁； 步骤A3)、对所获得明胶溶液进行加热并逐步加入氨水溶液，进行机械搅拌以获得 磁性明胶； 步骤A4)对所获得的磁性明胶进行洗涤。 进一步地，所述步骤B)包括： 步骤B1)、将步骤A)中所获得的磁性明胶分散到溶剂中，获得相应溶液； 步骤B2)、在所获得溶液中加入异硫氰酸荧光素，并在常温条件下搅拌预定时间， 获得荧光磁性明胶； 步骤B3)、清洗所获得产物。 进一步地，所述步骤C)包括： 步骤C1)、将步骤B)中所获得的荧光磁性明胶分散到第二预定量的乙腈中； 步骤C2)、加入第三预定量的丙烯酸并进行抚育； 步骤C3)、加入预定摩尔比的莫西菌素和N，N-二甲基丙烯酰胺，以及第四预定量 的过硫酸铵，反应第二预定时间，获得磁性荧光分子印迹材料； 步骤C4)、对反应产物进行洗涤。 进一步地，在所述步骤A1)中，所述第一预定量的明胶为0. l-10g，所加水量为 10-100mL，在所述步骤A2)中所加入的三氯化铁和硫酸铁的质量比为1 :1至4:1，在所述步 骤A3)中所加氨水的量为3-10mL。 进一步地，在所述步骤B1)中，所使用的溶剂为乙醇/水溶液，其中，乙醇比例大于 50%，在所述步骤B2)中，所加入的异硫氰酸荧光占步骤B1)所获溶液的体积比为1-5%，搅 拌时间为12-20小时。 进一步地，在所述步骤C1)中，所述第二预定量的乙腈为10_70mL，在所述步骤 C2)中，所述第三预定量的丙稀酸为100-500mg，在所述步骤C3)中，所述预定摩尔比为 1:10-40,所述第四预定量的过硫酸铵为10-50mg。 进一步地，在所述步骤C3)中，所采用的反应条件为温度40~60°C，反应时间 12~24小时，所加入的莫细菌素用作模板。 另一方面，本专利技术提供一种磁性荧光分子印迹材料，其特征在于，所述磁性荧光分 子印迹材料是采用上述制备方法制备的。 本专利技术将磁性纳米颗粒、异硫氰酸荧光素、分子印迹聚合物有机结合，制备出集 磁、光、分子识别三种性能为一体的新型多功能复合材料，将该多功能复合材料作为选择性 的萃取吸附剂和特异性识别的荧光探针，制备了一种集萃取/富集/检测一体化的莫西菌 素快速检测材料，利用其进行检测，可以省略了常规样品预处理后期的浓缩蒸干及再溶解 进样的繁琐操作过程，不依赖于高成本的色谱仪器分析，具有简便、快速、经济、易于实施、 可广泛应用于基层实验室的特点，有望真正满足大量复杂样本中痕量莫西菌素快速检测的 需要。 本专利技术的磁性荧光分子印迹材料可以直接萃取和分析复杂样本中莫西菌素，具有 选择性好、基质干扰小、萃取效率高、灵敏度好、分析时间短、价格低廉的优点 此外，相对于现有的制备分子印迹材料的方法，本专利技术也进行了改进。 传统方法中，需要经过磁性材料-二氧化硅膜的修饰-荧光修饰-二氧化硅膜修 饰-乙烯基修饰-分子印迹膜，6个步骤。相比之下，本专利技术的制备方法利用明胶丰富的氨 基基团，实现磁性明胶-荧光修饰-分子印迹膜，3个步骤，无需反复二氧化硅膜的修饰。此 外，传统方法的荧光基团包裹在二氧化硅膜内，因而光强度不高，检测灵敏度不好。我们提 出方法的荧光基团插入到分子印迹膜内，因而光强度很高，检测灵敏度很好。【附图说明】 图1示意性示出了本专利技术的磁性@荧光@分子印迹材料的制备过程； 图2示出磁性@荧光@分子印迹材料（MIPs)和磁性@荧光@非分子印迹材料 (NIPs)的吸附动力学过程； 图3不出了磁性@焚光@分子印迹材料和磁性@焚光@非分子印迹材料的吸附容 量研究； 图4示出了磁性@荧光@分子印迹材料对不同浓度莫西菌素的荧光响应曲线。【具体实施方式】 下面结合附图对本专利技术的具体实施例进行详细描述。 实施例 在实施例中，介绍磁性焚光分子印迹材料的一种制备方法。 一、磁性明胶材料的制备 将3g的明胶溶解在50mL的纯水中，常温下抚育30分钟后，加热溶解明胶，随后加 入质量比为2/1的三氯化铁和硫酸铁。将溶液温度升到80°C后，逐滴加入5mL的氨水溶液， 并在此温度下机械搅拌5小时。最后用乙醇、水等溶液洗涤磁性明胶材料。磁性明胶材料 一方面可以实现复合材料的磁分离，有助于目标物的萃取和检测，另一方面能够提供大量 氨基，有助于后期荧光修饰和分子印迹膜的制备。 二、修饰异硫氰酸荧光素 将制备的磁性明胶分散到乙醇/水溶液中（乙醇比例大于50 % )，随后加入体积 比5%的异硫氰酸荧光素，并在常温条件下搅拌12小时。最后用乙醇、水等溶液洗涤磁性明 胶材料，去除未反应的异硫氰酸荧光素。 三、磁性荧光分子印迹材料的聚合 将修饰处理的产物--荧光@磁性明胶分散到50mL乙腈中，随后加入100mg的 甲基丙烯酸（功能单体）并常温抚育过夜，有助于丙烯酸的羧基和磁性明胶的氨基进行离 子间作用，随后加入摩尔比为1 :1〇的莫西菌素（模板）和二甲基丙烯酸乙二醇酯（交联 剂），以及l〇mg的偶氮二异丁腈（引发剂）。60°C条件下，反应24小时。离心收集所得 聚合物，甲酸/乙酸溶液（9:1，V/V)洗脱模板分子36h，然后用甲醇再次洗涤12h，以除去 残留的乙酸，最后将聚合物置于通风橱中干燥至恒重，得到印迹复合材料。非印迹聚合物 (Non-imprinted当前第本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种识别莫西菌素的磁性荧光分子印迹材料的制备方法，其特征在于，所述方法包括：步骤A)、制备磁性明胶；步骤B)、修饰异硫氰酸荧光素；以及步骤C)、制备分子印迹膜。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗静，王鹏，赵晓亚，荆涛，尚吟竹，
申请(专利权)人：湖北出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：湖北;42