本发明专利技术公开了一种人类免疫缺陷病毒Vpr蛋白的制备方法。制备方法包括：以SEQ ID No：3~4为引物，GenBank登录号NC_001802的序列为模板，进行PCR扩增，获得目的基因；用限制性内切酶Nde I和Xba I对PCR产物和pColdII载体进行酶切、纯化、连接，转化至大肠杆菌，培养后用诱导物诱导表达，经超声破碎后对蛋白质进行分离纯化。本发明专利技术获得的人类免疫缺陷病毒Vpr蛋白纯度高、特异性较好、产量丰富，可以应用于HIV-1 Vpr抗体检测，以及可溶性Vpr蛋白的功能研究。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及。
技术介绍
人类免疫缺陷病毒1 型(human immunodeficiency virus type 1，HIV_1)感染导致的获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)是在全球广泛流行的严重疾病。HIV-1基因组包含(编码基质蛋白、衣壳蛋白和核衣壳蛋白等)、pol (编码蛋白酶、反转录酶和整合酶等)、env (编码包膜蛋白gpl20和gp41等)三种结构基因，以及 tat、rev、nef、vpr、vpu.、Ki/六种调节 / 辅助基因 ( Frankel AD,Young JA.HIV-1: fifteen proteins and an RNA.Annual review of b1chemistry.1998,67:1-25.)，这些基因各自以不同的方式调节着HIV-1的生物学功能。病毒蛋白R (viral protein R，Vpr)是由96个氨基酸组成、分子量大小约为14kD的辅助蛋白，通过与Gag蛋白p6区域直接作用而包装于HIV-1病毒颗粒( MullerB， Tessmer U， Schubert U， Krausslich HG.Human immunodeficiency virus type 1Vpr protein is incorporated into the vir1n in significantly smaller amountsthan gag and is phosphorylated in infected cells .Journal of virology.2000, 74(20):9727-31.)D Vpr在HIV-1病毒复制与致病过程中发挥着重要作用，如促进整合前复合体的核运输 ( Vodicka MA, Koepp DM, Silver PA, Emerman M.HIV-1 Vpr interacts with the nuclear transport pathway to promote macrophageinfect1n.Genes & development.1998，12 (2): 175—85.)、加强逆转录过程的保真度⑷( Rogel ME, ffu LI, Emerman M.The human immunodeficiency virus type 1vpr gene prevents cell proliferat1n during chronic infect1n.Journal ofvirology.1995，69⑵:882-8.)、诱导细胞周期阻滞于G2/M期从而抑制细胞增殖 (Andersen JL， Le Rouzic E， Planelles V.HIV-1 Vpr: mechanisms of G2 arrest andapoptosis.Experimental and molecular pathology.2008，85(1):2-10.)、反式激活HIV-1长末端重复序列以诱导病毒基因转录和翻译等( Wang L，MukherjeeS，Jia F，Narayan 0，Zhao LJ.1nteract1n of vir1n protein Vpr of humanimmunodeficiency virus type 1 with cellular transcript1n factor Spl andtrans-activat1n of viral long terminal repeat.The Journal of b1logicalchemistry.1995，270(43):25564-9.)。目前研究发现，Vpr 蛋白在 HIV-1 感染细胞的胞楽与胞核中均有表达 ( Jacquot G，Le Rouzic E，David A，MazzoliniJ，Bouchet J，Bouaziz S， et al.Localizat1n of HIV-1 Vpr to the nuclearenvelope:1mpact on Vpr funct1ns and virus replicat1n in macrophages.Retrovirology.2007,4:84. Subbramanian RA, Kessous-Elbaz A， Lodge R， ForgetJ，Yao XJ, Bergeron D，et al.Human immunodeficiency virus type 1 Vpr is apositive regulator of viral transcript1n and infectivity in primary humanmacrophages.The Journal of experimental medicine.1998,187 (7):1103-11.)；更为重要的是，Vpr蛋白可以释放入AIDS患者的血清和脑脊液中，并被多种细胞所摄取 ( Levy DN，Refaeli Y，MacGregor RR，Weiner DB.Serum Vpr regulatesproductive infect1n and latency of human immunodeficiency virus type 1 .Proceedings of the Nat1nal Academy of Sciences of the United States ofAmerica.1994，91 (23): 10873-7. Levy DN, Refaeli Y，Weiner DB.ExtracellularVpr protein increases cellular permissiveness to human immunodeficiency virusreplicat1n and reactivates virus from latency .Journal of virology.1995,69(2):1243-52.)。在 AIDS 患者血清中，Vpr 浓度约为 1-10 ng/mL ( HoshinoS，Sun B，Konishi M，Shimura M，Segawa T，Hagiwara Y，et al.Vpr in plasma ofHIV type 1-positive patients is correlated with the HIV type 1 RNA titers.AIDS research and human retroviruses.2007，23 (3): 391-7.)D 因此 Vpr 蛋白在 HIV-1感染过程中起到的重要作用可通过多种机制实现，其中存在于体液中的Vpr蛋白能够进入并破坏未感染的细胞，并诱导正常细胞的凋亡，可作为应用于肿瘤基因治疗的潜在蛋白。既往对于Vpr的研究通常以完整病毒感染作为模型，但基于生物安全性方面的考虑，研究者们现在更倾向于通过单独表达的胞外Vpr蛋白来研究其生理作用。例如从患者血清和脑脊液中纯本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人类免疫缺陷病毒Vpr蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：以SEQ ID No：3~4为引物，GenBank 登录号NC_001802的序列为模板，进行PCR扩增，获得目的基因；用限制性内切酶Nde I和XbaI对PCR产物和pColdII载体进行酶切、纯化、连接，转化至大肠杆菌，培养后用诱导物诱导表达，经超声破碎后对蛋白质进行分离纯化。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：严沁，卢春，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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