放疗增敏融合多肽的构建及应用，选取健康裸鼠，在皮下注射人宫颈癌Hela细胞，建立裸鼠移植瘤模型作为造模裸鼠，将造模裸鼠随机分组，分别给予仅注射R9、R9-Ap(82-121)乱序、R9-Ap(100-109)乱序、R9-Ap(100-109)以及R9-Ap(82-121)融合多肽，仅进行IR处理和R9-Ap(100-109)+IR、R9-Ap(82-121)+IR处理，实验过程中，用游标卡尺测量移植瘤体积并比较大小，评价放射治疗增敏效果，本发明专利技术能够在有效靶向肿瘤细胞的同时显著增加放疗敏感性而对正常组织无任何毒副作用，具有安全可靠、效果明显的特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤的临床医学
，特别涉及。
技术介绍
恶性肿瘤的发病率逐年增高，严重威胁人类健康。目前，手术、放射治疗、化学药物治疗仍是肿瘤治疗的主要手段。其中，65-70%肿瘤需要放射治疗，提高其疗效是关键。但由于肿瘤对放射线抗拒，而正常组织又限制放疗剂量的增加，严重影响放射治疗的疗效；并且单独应用放疗技术时，毒副作用大、肿瘤易复发，从而无法达到理想的疗效。射线照射后DNA双链损伤修复是肿瘤细胞对放射治疗抵抗的重要原因，寻找能有效抑制DNA损伤修复的因子，增加放射治疗的敏感性是研究热点之一。目前，临床实际应用的放射治疗存在如下缺点。实体瘤中存在10%-50%的乏氧细胞，对射线有明显的抵抗作用，是各种肿瘤放射治疗失败甚至是复发、转移的主要原因，克服乏氧细胞对射线的抵抗成为研究热点之一。但是，目前存在的肿瘤乏氧增敏剂，虽然体外试验都显示出较好的增敏作用，但是并未得到十分可靠的临床数据。这可能是由于其对正常组织的细胞毒性、较短的生物有效期以及细胞膜透性较差所致。因此，在临床实验中无法达到预期的理想效果。在放射治疗中，最大限度减少正常组织的放射毒性，最大程度提高对肿瘤组织的靶向增敏作用显得尤为重要。但能同时靶向肿瘤细胞而对正常组织无杀伤作用的放射增敏剂还较为甚缺。一些抗肿瘤药物作为放射增敏剂使用的理论研究进展很快，然而这些药物对组织的毒性作用仍是限制其使用的一个主要因素，而且其作用机制仍不十分明确。放射治疗增敏剂的应用是综合治疗的一部分，目前针对放疗增敏剂的临床实验性研究已取得较大成果，但取得临床公认的低毒有效的增敏剂尚需进一步研究。【专利技术内容】为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供，能够在有效靶向肿瘤细胞的同时显著增加放疗敏感性而对正常组织无任何毒副作用，具有安全可靠、效果明显的特点。为了达到上述目的，本专利技术采取的技术方案为:放疗增敏融合多肽R9-Ap (100-109)，所述多肽的氨基酸序列包括:序列RKKRRQRRR 和 LKESLIITTP 两部分；放疗增敏融合多肽R9-Ap (82-121)，所述多肽的氨基酸序列包括:序列RKKRRQRRR和 KPPSKKRSCDPSEYRVSELKESLITTTPSRPRTAKRRIRL 两部分。放疗增敏融合多肽的应用，其步骤为:S1、选取5周龄体重约18g的健康裸鼠，在无菌条件下于裸鼠右后肢根部皮下注射PBS稀释的人宫颈癌Hela细胞，建立人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤模型，饲养裸鼠至肿瘤体积至约10mm3时，作为造模裸鼠；S2、将造模裸鼠随机分成8组，其中5组分别给予R9、R9_Ap (82-121)乱序、R9-Ap (100-109)乱序、R9_Ap (100-109)以及R9_Ap (82-121)融合多肽注射，其中I组仅进行4M-X射线照射，另外两组分别给予既注射R9-Ap (100-109)融合多肽又进行4M-X射线照射以及既注射R9-Ap (82-121)融合多肽又进行4M-X射线照射处理，其中采用仅注射R9融合多肽的分组做阴性对照，采用仅注射R9_Ap (100-109)乱序和R9_Ap (82-121)乱序融合多肽的分组做阳性对照；S3、对仅注射R9-Ap (100-109)和R9_Ap (82-121)融合多肽的两组中的造模裸鼠分别在注射后的第0、1、2、3天处死裸鼠样本，收集裸鼠肿瘤组织、瘤旁正常组织和全血、心、肾、胰腺、脑、肝、肺、脾等，分别采用流式细胞仪检测R9-Ap (100-109)，R9_Ap (82-121)体内分布情况，获得R9_Ap (100-109)和R9_Ap (82-121)在人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤达到的最佳分布水平作用时间；S4、在注射药物和照射处理的过程中，若造模裸鼠出现以下情况之一，则及时处死并收集:1.移植瘤表面皮肤破溃；2.肿瘤体积超过1000mm3;3.射线照射结束后8周，实验过程中，每周用游标卡尺测量裸鼠皮下移植瘤体积2次，比较造模裸鼠移植瘤体积的大小评价放射治疗增敏效果。所述S2中，对于需要注射融合多肽的7组(即除仅进行4M-X射线照射以外的分组)，每组中的造模裸鼠所注射的上述融合多肽的注射量根据造模裸鼠的重量决定，每次注射体积为0.3ml/g，注射时间为每次间隔最佳分布水平的作用时间，给药途径为尾静脉注射。所述S2中，对于仅进行4M-X射线照射处理的分组，造模裸鼠则直接在无菌条件下进行分次照射处理。所述S2中，对于既注射R9-Ap (100-109)融合多肽又进行4M-X射线照射以及既注射R9-Ap (82-121)融合多肽又进行4M-X射线照射处理的两组，每组中的造模裸鼠在注射对应的融合多肽后，在无菌条件下进行分次照射处理。所述分次照射处理为:对造模裸鼠皮下移植瘤局部进行4M-X线分次照射处理，每次照射剂量为2Gy，共10次，每次间隔最佳分布水平的作用时间，总剂量为20Gy。所述S3中，R9-Ap (100-109)和R9_Ap (82-121)融合多肽在人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤达到的最佳分布水平作用时间为24小时。本专利技术的有益效果为:与现有技术相比，本专利技术的有益效果是:理想的放射治疗增敏剂必须具有肿瘤细胞特异性，即它不仅可以细胞内摄，而且可以识别特异肿瘤靶点，降低放射治疗所需剂量，在提高治疗效果同时降低毒副作用。将R9与Apoptin(100-109)和Apoptin(82-121)连接，构建放疗增敏融合多肽R9-Apoptin (100-109)和R9_Apoptin (82-121)。本专利技术为放疗增敏融合多肽R9-Apoptin(100-109)和R9-Apoptin(82-121)作为新的临床肿瘤放射治疗增敏剂提供研究基础。同时，发现并提出新的肿瘤生物靶向治疗方法。【附图说明】图1是本专利技术的技术路线图。图2是本专利技术的放疗增敏融合多肽的应用效果图。【具体实施方式】下面结合附图对本专利技术作进一步详细说明。参见附图，本专利技术为放疗增敏融合多肽，所述多肽的氨基酸序列中包括：放疗增敏融合多肽R9-Ap (100-109)，所述多肽的氨基酸序列包括：序列RKKRRQRRR 和 LKESLIITTP 两部分；放疗增敏融合多肽R9-Ap (82-121)，所述多肽的氨基酸序列包括：序列RKKRRQRRR和KPPSKKRSCDPSEYRVSELKESLITTTPSRPRTAKRRIRL 两部分。放疗增敏融合多肽的应用，其步骤为：S1、选取5周龄体重约18g的健康裸鼠，在无菌条件下于裸鼠右后肢根部皮下注射PBS稀释的人宫颈癌Hela细胞，建立人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤模型，饲养裸鼠至肿瘤体积至约100mm3时，作为造模裸鼠；S2、将造模裸鼠随机分成8组，其中5组分别给予仅注射R9、R9_Ap (82-121)乱序（sc-Ap (82-121) )、R9-Ap (100-109)乱序（sc_Ap (100-109) )、R9_Ap (100-109)以及R9-Ap (82-121)融合多肽，其中1组给予仅进行4M-X射线照射，另外两组分别给予既注射R9-Ap (100-109)融合多肽又进行4M-X射线照射以及既注射R9_Ap (82-121)融合多肽又进行4本文档来自技高网...
【技术保护点】
放疗增敏融合多肽，其特征在于:放疗增敏融合多肽R9‑Ap(100‑109)，所述多肽的氨基酸序列包括：序列RKKRRQRRR和LKESLITTTP两部分；放疗增敏融合多肽R9‑Ap(82‑121)，所述多肽的氨基酸序列包括：序列RKKRRQRRR和KPPSKKRSCDPSEYRVSELKESLITTTPSRPRTAKRRIRL两部分。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩苏夏，赵晶，朱青，马瑾璐，
申请(专利权)人：西安交通大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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