本发明专利技术由室内尘螨的主要过敏原Der p 1和Der p 2的序列提供了用于通过特异性免疫治疗(SIT)治疗过敏患者的连续重叠肽(COP)。这些肽虽然提供了所有潜在的T细胞表位，但是缺乏原始过敏原的三维结构，因此降低了它们结合IgE的能力。因此，可以每次注射施用增加量的COP，从而减少注射次数和免疫疗法治疗的时间长度这两者。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 对相关申请的交叉引用 本申请是基于2013年6月6日提交的美国临时申请序列号61/831，961，该美国临 时申请的公开内容以引用的方式整体并入本文。 以引用的方式并入以电子方式递交的材料 以引用方式整体并入的是同时随本文递交并且被如下标识的计算机可读的氨基 酸序列表：ASCII文本文件，所命名的文件名：47712A_SeqListing. txt ;大小：20, 103个字 节；创建：2014年6月5日。
本专利技术涉及源自于Der p 1和Der p 2室内尘螨主要过敏原的连续重叠肽（C0P) 以及这些化合物在医疗中的用途。本专利技术的化合物和治疗方法预期可用于治疗室内尘螨过 敏以及广泛地促进对它的治疗。
技术介绍
IgE介导的过敏性疾病似乎是非常常见的，特别是在工业化国家中，其中高达四分 之一的人群患有过敏性鼻炎。此外，患有过敏性鼻炎的人与健康人相比显示出更低的生 活质量，只有少数人自发地进入缓解期。 室内尘螨过敏在世界范围内广泛分布并且美国和欧洲的过敏人群的约50%患 有室内尘螨过敏，关于综述，参见。室内尘螨（HDM)主要属于两种物种，即屋尘螨 (Dermatophagoides pteronyssinus)和粉尘螨（Dermatophagoides farinae)。针对 HDM过 敏的治疗可以基于这两种物种之一的主要过敏原，这是因为屋尘螨和粉尘螨的主要HDM过 敏原〇61口1/1)61；1^1和〇61口2/1)61€2共有超过80%的序列同一性。Der p 1与Der f 1共有83%的序列同一性，从而在这两种物种之间产生高交叉反应性人类IgE抗体和T 细胞应答。具体来说，已经发现将过敏患者的血清与Der f 1-起预孵育阻止了Der ρ 1与 HDM IgE抗体的结合，尽管报道了不同的结合亲和力。已经发现Der p 2和Der f 2(88%的 序列同一性）非常有效地阻止它们的对应物的结合。还发现屋尘螨肽和粉尘螨肽同样地诱 导T细胞增殖。然而，来自这两种物种的过敏原并不是完全可互换的，这是因为与来自Der P 1的肽相比，更少的来自Der f 1的肽能够例如刺激T细胞增殖。 来自不同物种的过敏原的可能可互换的使用已经通过在其中致敏物种是粉尘螨 的意大利地区使用屋尘螨进行的研究的免疫治疗结果所表明，所述结果与在英国使用屋 尘螨针对屋尘螨致敏所进行的研究结果或在南韩使用粉尘螨针对粉尘螨所进行的研究结 果没有显著差异。意大利的结果还与使用提取物混合物进行的研究结果没有差异，如由 Thomas所综述。因此，来自屋尘螨的主要过敏原可以被认为是至少针对屋尘螨、粉尘螨 这两者以及可能的其它室内尘蜗物种的有效广品的基础。 已经在HDM过敏中描述了多个过敏原序列，如在NCBI核苷酸和蛋白质数据库中所 见。过敏原可以被分配成在序列上与已知蛋白质相关的至少7组，即： Der p 1，半胱氨酸蛋白酶（肽酶C1A家族） Der p 2，MD2样脂质结合蛋白，TLR 4结合 Der p 3,胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶 Der p 4，α-淀粉酶 Der ρ 5, Bio t 5 (热带无爪螨（Blomia tropicalis)，一种仓储螨） Der ρ 6,胰凝乳蛋白酶样（S1肽酶结构域） Der ρ 7,分泌的糖蛋白 在欧洲，对HDM过敏的受试者中有97 %可以使用Der ρ 1和Der ρ 2的混合物来 诊断，而这些患者中有50%还对Der ρ家族的另外的过敏原反应。在巴西，发现患有过 敏性鼻炎的HDM点刺阳性患者中有约87%含有识别Der ρ 1、Der ρ 2或这两种过敏原的 IgE。在澳大利亚进行的研究证实约50%的抗HDMIgE抗体与Derpl和Derp2 结合并且另外的30%由Der ρ 4、5以及7同等地促成。因此，对Der ρ 1和Der ρ 2的反 应性在过敏人群中明显占优势，这表明基于Der ρ 1和Der ρ 2过敏原的产品可以治疗大 多数的患者。 Der ρ 1序列和IgE表位 Der ρ 1变体已经被描述表现出一定的多态性。使用Swiss-Prot序列 P08176. 2进行的BLAST搜索揭示了 NCBI数据库内许多的蛋白质序列。大多数的变异存在 于Der f 1序列中并且被定位到5个主要的位置，即123、132、150、152以及204 (坐标参照 Swiss-Prot P08176. 2)。还使用RT-PCR，关于一组来自在曼谷从家中分离的屋尘螨和粉尘 螨这两者的组1和组2过敏原的序列描述了多态性。综上所述，这些结果表明最主要的 Der ρ 1是Swiss-Prot P08176. 2中所提到的还与Der ρ 1.0105具有同一性的序列。 Der ρ 1蛋白质是具有320个氨基酸的半胱氨酸蛋白酶（C1超家族的肽酶）。前 18个氨基酸具有信号肽的特性，而随后的从R19到E98的氨基酸存在于原蛋白中并且的确 含有蛋白酶抑制因子结构域129。成熟的Der ρ 1由222个氨基酸（T99到L320)构成并且 已经确定了三种晶体结构（PDB 1XKG、2AS8以及3F5V)。 在针对Der ρ 1搜索免疫表位数据库（IEDB)时，发现35个表位。描述了 24个B 细胞表位，这些表位是通过抗原竞争、蛋白质印迹、ELISA、Ig组胺释放或放射免疫测定来确 定的 ; ; ; 。将这些潜在的表位组合允许界定四个主要的区域，所述区域所 具有的边界位于 N150 至 H170 ;V187 至 R202 ;C215 至 Q231 ;Y263 至 Y299。 IgE表位主要是构象表位，并且因此难以定位。针对Der ρ 1或Der f 1所产生 的单克隆抗体大多是具有物种特异性的。然而，针对Der f 1的抗体4C1还结合Der ρ 1 并且发现单克隆抗体（mAb)和人类IgE抗体的表位重叠，如通过复合体的晶体结构所确定。4C1 与 Der ρ 1 和Der f 1 的共结晶表明残基 D113、R115、Q116、R118、R154、I156、 Q279、Y283、D296、Y299、Y301 可能参与 IgE 结合。 mAb W108不仅抑制Der ρ 1与IgE抗体的结合，而且还抑制它的半胱氨酸蛋白 酶活性。在对W108/Der ρ 1复合体进行蛋白酶消化之后通过LC-MS鉴定出三个肽 (aa209-224 ;227-243以及260-287)，这些肽没有与Der ρ 1的被发现最直接与mAb W108 结合的两个肽段（aa 151-197和286-320)重叠。这些结果证实了甚至在使用单克隆抗体 时定位IgE表位的复杂性。 从文献中汇总数据允许鉴定出Der pi的具有与IgE结合的潜能的四个区域，即 N150-H170、V187-R202、C215-Q231 以及 G274-D291。所报道的实验证实分开 Der pi 的这 四个结构域是不够的，这是因为R149至R254之间的另外的区域必须被中断以去除残留的 IgE结合。 Der p 2序列和IgE表位 Der p 2似乎是非常多态的，具有15种所述的变体，包括被最佳表征的型式Der p2.0101、Der p2.0本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种组合物，所述组合物包含多个肽片段，所述肽片段包括：第一多肽，所述第一多肽由与SEQ ID NO:27具有90％序列同一性的多肽的氨基酸99‑104至氨基酸157‑177的序列组成，其中所述肽对于对室内尘螨过敏的受试者的IgE抗体的反应性被消除，而与来自对室内尘螨过敏的受试者的T淋巴细胞的反应性被保留；第二肽，所述第二肽由与SEQ ID NO:27具有90％序列同一性的多肽的氨基酸154‑174至氨基酸190‑210的序列组成，其中所述肽对于对室内尘螨过敏的受试者的IgE抗体的反应性被消除，而与来自对室内尘螨过敏的受试者的T淋巴细胞的反应性被保留；第三肽，所述第三肽由与SEQ ID NO:27具有90％序列同一性的多肽的氨基酸183‑203至氨基酸217‑237的序列组成，其中所述肽对于对室内尘螨过敏的受试者的IgE抗体的反应性被消除，而与来自对室内尘螨过敏的受试者的T淋巴细胞的反应性被保留；第四肽，所述第四肽由与SEQ ID NO:27具有90％序列同一性的多肽的氨基酸210‑230至氨基酸244‑264的序列组成，其中所述肽对于对室内尘螨过敏的受试者的IgE抗体的反应性被消除，而与来自对室内尘螨过敏的受试者的T淋巴细胞的反应性被保留；第五肽，所述第五肽由与SEQ ID NO:27具有90％序列同一性的多肽的氨基酸239‑259至氨基酸272‑292的序列组成，其中所述肽对于对室内尘螨过敏的受试者的IgE抗体的反应性被消除，而与来自对室内尘螨过敏的受试者的T淋巴细胞的反应性被保留；以及第六肽，所述第六肽由与SEQ ID NO:27具有90％序列同一性的多肽的氨基酸268‑288至氨基酸310‑320的序列组成，其中所述肽对于对室内尘螨过敏的受试者的IgE抗体的反应性被消除，而与来自对室内尘螨过敏的受试者的T淋巴细胞的反应性被保留。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：亚历山大·谢特纳，克里斯托弗·雷蒙，
申请(专利权)人：阿尼尔吉斯股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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