本发明专利技术一种抗细胞凋亡Mcl-1蛋白抑制剂及其应用属医药技术领域，所述的抑制剂为6,7-二羟基香豆素衍生物，其结构如通式如(1)所示，其中，R1，R2为H或(C1-C6)烷基；R3为H或CH2NR5R6；NR5R6为二甲胺、二乙胺、二丙胺、二异丙胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪或其结构衍生物中的任意一种；R4为H、(C1-C6)烷基、CF3、OH-(C1-C6)烷基、卤代-(C1-C6)烷基中的任意一种。其通过竞争性结合和拮抗Mcl-1蛋白，进而诱导细胞凋亡，发挥杀死肿瘤细胞作用，实现其作为抗癌药物的应用。此外，该类化合物还具有分子量小、透膜能力好以及安全性好等优良属性，具有良好的开发成药前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，具体涉及一种抗细胞凋亡Mcl-1蛋白抑制剂及其应 用。
技术介绍
癌症发生发展的本质和基本过程正被逐步揭示，针对其发生发展机理的分子靶向 新型抗肿瘤药物已成为抗肿瘤药物研究的主导方向。近几年来，一些以肿瘤细胞分化凋亡 相关的关键蛋白作为药物筛选靶点，发现选择性作用于靶位点的高效，低毒，特异性强的新 型抗癌药物已成为当前抗肿瘤药物研究开发的又一新方向。Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡的调控中起着非常重要的作用。该家族蛋白包含两 类功能相反的蛋白：一类是抗凋亡蛋白，包括Bcl-2、Mcl-1、Bcl-xl以及Bcl-w等十余 个成员；另一类是促凋亡蛋白，包括Bax、Bak、Bad和Bim等。Mcl-1等蛋白存在着一个名 为BH3的表面结合口袋，可与许多促凋亡因子，如Bax,Bad,Bim和Bak等结合形成异二聚 体，抑制它们的促凋亡功能，造成细胞凋亡的损害。研 究发现，细胞内Mcl-l/Bcl-2蛋白表达异常与多种癌症的发生有关，几乎所有的恶性肿瘤 细胞都高表达Mcl-l/Bcl-2蛋白，而正常组织细胞Mcl-l/Bcl-2表达水平很低。Mcl-l/Bcl-2 蛋白已经是国际 上开发抗癌药物的一个新的药物作用靶点，其研发主要集中在如何抑制Mcl-l/Bcl-2蛋白 活性或降低其表达水平，来诱导癌症细胞的凋亡。目前，以Bcl-2家族蛋白为靶点的抗肿瘤药物尚无上市产品，有三个效果最优的 分别处于临床I，II，III期，分别是：由美国伊利诺州阿伯特实验室研发的AB-737,Gemin X公司研发的GX15-070 (与Bcl-2蛋白结合的& = 0. 22μΜ)和美国Ascenta公司的 AT-101 (与Mcl-1蛋白结合的& = 0. 18μΜ)。但是它们都存在不足，如GX15-070具有不 依赖Bax/Bak的细胞毒性，正因此面临淘汰。此外，还存在体内的抑制活性偏低、代谢半衰 期短、连续使用易引发肝、肾毒性等诸多缺陷。因此，探索和开发安全、高效的特异性拮抗 Mcl-l/Bcl-2蛋白的药物，特异性抑制肿瘤细胞生长，而对正常组织细胞的伤害很小，最终 实现安全、高效、低痛苦抗癌的目标。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供了。 -种抗细胞凋亡Mcl-1蛋白抑制剂及应用，其特征在于所述的抑制剂为6, 7-二羟 基香豆素衍生物，其结构如通式为： 其中，RpR2 为Η或（C「C6)烷基； R3 为H或CH2NR5R6 ; NR5R6为二甲胺、二乙胺、二丙胺、二异丙胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪或其结构衍生 物中的任意一种； R4为H、（c「c6)烷基、cf3、oh-(c「c6)烷基、卤代-(Q-Q)烷基中的任意一种。 所述的抑制剂6, 7-二羟基香豆素衍生物的任意一种或几种化合物均可竞争性结 合和拮抗Mcl-1蛋白，而诱导细胞凋亡，实现其作为抗癌化合物的应用抑制常数&值介于 0· 2 ~15μM〇 -种抗细胞凋亡Mcl-1蛋白抑制剂的应用，将6, 7-二羟基香豆素衍生物任意一种 或几种化合物与化疗药物按混合后做成药物组合物并用于癌症的治疗。 所述6, 7-二羟基香豆素衍生物与紫杉醇做成药物组合物并用于非小细胞肺癌的 治疗，其合用的摩尔比为1:5~10:1,优选摩尔比为1~5:1。 本专利技术所涉及的新型Mcl-1蛋白抑制剂，是以植物来源的6, 7-二羟基香豆素为 基本结构骨架，通过系列化合物的结构-药效、结构-安全性、结构-ADME属性的多维属性 评估及优化，研发了上述新型Mcl-1蛋白抑制剂，该类抑制剂与Mcl-1蛋白结合的&达到 0.204μM，其抑制活性与市售Mcl-1抑制剂AT-ΙΟ?^ = 0. 18μM)的活性相当，甚至高于 11-37(1 = 0.26μΜ)的抑制活性。此外，该类抑制剂与紫杉醇联用可显著增加紫杉醇对 Α549细胞的抑制活性。同时，该类抑制剂还具有安全性好、易吸收以及强效抑制P-gp等耐 药蛋白、可逆转肿瘤多药耐药等特点，具有良好的成药前景。【附图说明】 图1.化合物C-3对Mcl-1蛋白抑制的浓度依赖性抑制图； 图2. 6, 7-二羟基衍生物结构-Mcl-1蛋白抑制活性关系图； 图3.化合物C-3与紫杉醇联用对A549细胞的抑制活性图。【具体实施方式】 下面的实施例将对本专利技术予以进一步的说明，但并不因此而限制本专利技术。 主要检测仪器及其型号：GENios多功能酶标仪（TECAN公司，瑞士）、水平层流超净 工作台（上海）、HH·CP-T二氧化碳细胞培养箱（上海益恒实验仪器有限公司）、FP-6500 荧光分光光度计（Jasco公司，日本抗体（BS1220，Bi〇W〇rld生物技术公司，美国）、 辣根过氧化酶标记的二抗（34460,Qiagen生物技术公司，德国）。 实施例1 6, 7-二羟基-4-甲基香豆素（C-2)的制备 称取1，2, 4-三乙酰氧基苯1.5g置于三口瓶中，加入乙酰乙酸乙酯1ml，高氯酸 5ml，室温搅拌20分钟后，加热至80°C，反应3h，TLC检测反应结束，将反应液缓慢倒入冰水 30ml中，搅拌30min，过滤，收集滤饼，即为粗品。将粗品溶于20ml甲醇中，加热至回流，lh 后冷却至室温，过滤，收集滤饼，真空干燥后得化合物C-21.lg，乳白色固体。 其核磁共振检测结果如下所示： 4NMR(400MHz，d-DMSO)δ: 2. 31 (s，3H，CH3)，6. 09 (s，1H，C=CH)，6. 73 (s，1H，ArH )，7· 00 (s，1H，ArH)，9· 34 (s，br，1H，ArOH)，10. 19 (s，br，1H，ArOH);13CNMR(100MHz，d-DMS0)S:18.68，103.13，109.89，110.86，111.96，143.24，148· 17, 150. 58, 153. 68, 161. 08. 实施例2 6, 7-二羟基-4-三氟甲基香豆素（C-3)的制备 称取1，2, 4-三乙酰氧基苯1.5g置于三口瓶中，加入三氟乙酰乙酸乙酯1.4ml，高 氯酸5ml，室温搅拌20分钟后，加热至80°C，反应3h，TLC检测反应结束，将反应液缓慢倒入 冰水30ml中，搅拌30min，过滤，收集滤饼，即为粗品。将粗品溶于20ml甲醇中，加热至回 流，lh后冷却至室温，过滤，收集滤饼，真空干燥后得化合物C-31. 3g，浅黄色固体。其核磁 共振检测结果如下所示： 4NMR(400MHz，d-DMSO)δ:6· 71 (s，1H，C=CH)，6. 86 (s，1H，ArH)，7. 03 (s，1H，ArH ),9. 78 (s,br, 1H,ArOH),l〇· 61 (s,br, 1H,ArOH)；13CNMR(100MHz，d-DMS0)δ: 104. 01，105. 05, 108. 89, 112. 12, 120. 94, 123. 68, 144 .03, 149. 59, 152. 08, 159. 62. 实施例3 6, 7-二羟基-4-氯甲基香豆素（C-4)的制备 称取1，2, 4-三乙酰氧基苯1. 5g置于三口瓶中，加入4-氯乙酰乙酸乙酯1. 3m本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗细胞凋亡Mcl‑1蛋白抑制剂，其特征在于所述的抑制剂为6,7‑二羟基香豆素衍生物，其结构如通式为：其中，R1，R2为H或(C1‑C6)烷基；R3为H或CH2NR5R6；NR5R6为二甲胺、二乙胺、二丙胺、二异丙胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪或其结构衍生物中的任意一种；R4为H、(C1‑C6)烷基、CF3、OH‑(C1‑C6)烷基、卤代‑(C1‑C6)烷基中的任意一种。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨凌，王平，葛广波，宁静，于洋，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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