本发明专利技术公开了一种能够缓解罗非鱼铅毒性的植物乳杆菌饲料，属于饲料技术领域。本发明专利技术的饲料是将CGMCC 5494株菌以离心浓缩或者是冷冻干燥以及微胶囊包埋获得的菌剂以饲料添加剂的形式加入到水生动物饲料预混料中进行制粒或者是预先制粒后进行以载体喷涂益生菌的方式制备含活菌数大于108cfu/g成品饲料的益生菌颗粒饲料。以该方法获得的饲料能够提高罗非鱼的生长速率；提高铅暴露罗非鱼的肠道消化酶活力；降低铅暴露罗非鱼体内铅含量；缓解铅暴露罗非鱼体内氧化应激损伤；提高铅暴露罗非鱼体内氨基乙酰丙酸脱水酶的活性；提高铅暴露罗非鱼的溶菌酶活性与髓过氧化物酶活性；缓解铅暴露罗非鱼的细胞和遗传毒性。非常具有应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种能够缓解罗非鱼铅毒性的植物乳杆菌饲料，属于饲料
技术介绍
铅是自然界中很常见的一种重金属元素，对人体有很强的毒性。1993年世界卫生 组织和联合国粮农组织（FA0/WH0)联合法典委员会推荐的人体可耐受铅摄入量为25 μ g/ (kg ·体重?周）。金属铅质地柔软，是人类最早应用的金属之一，它的主要用途是制作铅 蓄电池，在汽油抗爆剂、建筑、金属加工材料、军火、彩色电视显像管及辐射屏蔽等方面应用 广泛。因为铅酸蓄电池提供能量保存，军用和民用生产生活都离不开它。随着经济社会的 往前进步，尤其是工业化的加速前进，铅污染的问题日益突出，水环境的铅污染也越来越严 峻。有报道，进十年来，随着中国一直前进的工业化，触及铅污染的产业也越来越多，包括重 金属开采、金属冶炼、化工、印染、能源等，还有一些违规企业的滥开采、违法排污等问题突 出，铅污染事故的发生也是越来越频繁。由于铅污染的特性，大量的铅进入水产养殖水体， 对水生生物造成了毒害，并产生急性、慢性病害，对水产品的使用安全性造成威胁，严重影 响了渔业生产及水环境的生态平衡，进而对人类健康造成危害。 铅对动物的毒理学研究已经开展了几十年，研究表明铅中毒可对机体内各个系统 造成不同程度的损伤。重金属铅进入水生生物体内后，会造成蓄积，同时对其健康造成消极 的影响，几乎毒害身体中所有的器官，影响正常的生理功能，并有潜在的致畸、致突变危害， 形成慢性或者是急性中毒症状，严重时可能会导致水生生的死亡率上升。目前的研究发现 铅中毒对水生生物的毒害作用主要体现在以下几个方面:A，影响免疫系统；B，损害造血系 统；C，影响内分泌系统；D，损害生殖系统。 水生动物铅中毒的治疗研究较少，其主要思路是吸附铅或者是缓解铅造成的毒害 作用。当前研究对水生生物的铅中毒治疗方法主要是在饲料中添加一定抗氧化剂或者是铅 吸附剂。抗氧化剂主要是一些维生素及抗氧化物质包括维生素 A、维生素 C、维生素 E、硫胺 素以及矿物质硒，铅吸附剂的研究在蒙脱土、泡沸石和凹凸棒土上有所涉及。而抗氧化剂使 用成本较高，吸附剂使用可能会破坏水生生物体内的离子平衡。 鉴于当前的研究现状以及治疗方法的有限性，针对水生生物的铅蓄积和铅中毒探 索一种新的干预或治疗方法显得十分必要；而上述几种治疗方法的可行性也促使我们继续 寻找应用更广泛、潜力更巨大，同时又具有缓解铅毒性作用的手段。益生菌广泛存在于人类 肠道、自然发酵乳制品以及植物性发酵食品如泡菜、酸菜之中。长期科学研究结果表明，益 生菌是人体必不可少的且具有重要生理功能的有益菌，其主要生理功能有：防治乳糖不耐 症、恢复人体肠道内菌群平衡维护人体健康、抗肿瘤和预防癌症作用、控制人体内毒素水平 等功能。有研究者已经证实，某些特定菌株的乳酸菌能够有效的吸附重金属离子，且在缓解 氧化应激与氧化损伤有显著的作用。乳酸菌作为微生物有成本低、无环境危害、可作为饲料 添加剂等特点。而且，已经有大量学者研究了益生菌饲料对水产动物的益生作用，但在缓解 水生生物铅中毒方面未有人报道。因此探索一种能够缓解水生动物铅中毒的益生菌饲料， 其实践意义巨大。因此探索研究一种缓解铅毒性的乳酸菌饲料就可以进一步的挖掘益生菌 的功能，开发具有更高价值的益生菌，为利用益生菌添加剂缓解水生动物铅毒性开辟出新 的途径和解决方案。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种植物乳杆菌饲料，所述植物乳杆菌饲料是将植物乳杆菌 CGMCC No. 5494以饲料添加剂的形式加入到水生动物饲料的预混料中进行制粒或者是预先 制粒后进行以载体喷涂益生菌的方式制备含活菌的益生菌饲料，所述植物乳杆菌饲料中含 有活菌含量大于l〇sCFU/g的植物乳杆菌CGMCC No. 5494。 所述植物乳杆菌CGMCC No. 5494于2011年11月29日保藏于中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院 微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 5494。 所涉及的植物乳杆菌CGMCC No. 5494具有以下生物学特性： (1)菌体特征：革兰氏染色阳性，细胞呈短杆状，菌体约0.5-1. Ομπι宽，2-4 μπι长， 成单、成对或者成链，不形成芽孢，两端圆形； (2)菌落特征：在MRS培养基上形成明显的菌落，直径在0. 3-2. 0mm之间，圆形，乳 白色，半透明，表面湿润光滑，边缘整齐，不产生色素； (3)生长特性：该菌株的最低生长温度为20°C，最高生长温度为40°C，在温度 30-37°C下生长最佳，能耐受的最高和最低初始生长pH为9. 0和2. 5,最适生长初始pH为 6. 0 ;本专利技术植物乳杆菌菌株的延迟期相对较短，4h左右开始进入对数生长期，12h就达到 稳定期。 所涉及的植物乳杆菌CGMCC No. 5494作为饲料添加剂加入到水生动物饲料中，还 具有下述有益特性： (1)能提高罗非鱼的生长速率； (2)能提高铅暴露罗非鱼的肠道消化酶活力； (3)能降低铅暴露罗非鱼体内铅含量，尤其是罗非鱼肝胰脏、肾脏、脾脏和鳃的铅 含量； (4)能缓解铅暴露罗非鱼体内氧化应激损伤； (5)能提高铅暴露罗非鱼体内氨基乙酰丙酸脱水酶（ALAD)的活性； (6)能提高铅暴露罗非鱼的溶菌酶活性与髓过氧化物酶活性（ΜΡ0); (7)能缓解铅暴露罗非鱼的细胞和遗传毒性。 在本专利技术的一种实施方式中，所述饲料添加剂是CGMCC No. 5494的浓缩菌液或者 是冷冻干燥工艺获得的冻干菌粉，或是CGMCC No. 5494的海藻酸钠微胶囊菌剂。 所述载体是在饲料中可接受的载体。 所述在饲料中可接受的载体是一种或多种在饲料中通常使用的粘合剂、润滑剂或 者是保护剂。 在本专利技术的一种实施方式中，所述浓缩菌液的制备包括以下步骤： A.培养基的制备：使用以按培养基总质量计87. 7%的水将10 %酶水解脱脂乳、 0. 5%葡萄糖、1. 5%胰蛋白胨与0. 3%酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6. 8,得到培养基； B.植物乳杆菌CGMCC 5494菌种按照以所述培养基的质量计2-4%的接种量接种 到在温度110_120°C下灭菌8-12min后的培养基中，然后在温度37°C下培养18h，用pH7. 2 磷酸盐缓冲液清洗2-4次，用生理盐水重悬使活菌浓度达到10nCFU/mL，得到新鲜浓缩菌 液。 在本专利技术的一种实施方式中，所述冻干菌粉的制备包括以下步骤： C.冷冻干燥保护剂的制备：使用水与保护剂原料混合制备得到含有100g/L脱脂 奶粉、30mL/L甘油、100g/L麦芽糊精、150g/L海藻糖、10g/LL-谷氨酸钠的保护剂； D.按照步骤A、B的做法磷酸盐缓冲液清洗2-4次后用步骤C准备的冷冻干燥保 护剂重悬使活菌浓度达到10nCFU/mL，让该悬浮液在温度37°C下预培养60min，再进行冷冻 干燥得到所述的冻干菌粉。 在本专利技术的一种实施方式中，所述的海藻酸钠微胶囊菌剂的制备包括以下几个步 骤： E.将CGMCC 5494的活菌浓度达到10nCFU/mL以上的浓缩菌液，以体积比为1:10 与2%海藻酸钠溶液充分混合，并加入0. 4%的吐温80,磁力搅拌器搅拌乳化15m本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种植物乳杆菌饲料，其特征在于，所述植物乳杆菌饲料是将植物乳杆菌CGMCC No.5494以饲料添加剂的形式加入到水生动物饲料的预混料中进行制粒或者是预先制粒后进行以载体喷涂益生菌的方式制备含活菌的益生菌饲料，所述植物乳杆菌饲料中含有活菌含量大于108CFU/g的植物乳杆菌CGMCC No.5494。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫，田丰伟，翟齐啸，王汗成，王刚，赵建新，刘小鸣，张秋香，张灏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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