一种倍半萜内酯类化合物、其制备方法以及应用技术

本发明专利技术公开了一种倍半萜内酯类化合物、其制备方法以及在癌症治疗中的应用，该倍半萜内酯类化合物的结构如式(Ⅰ)所示。该倍半萜内酯类化合物的制备方法包括：A、使用提取溶剂对药材提取，得到提取液；B、将提取液浓缩，加水混悬，分别用极性由小到大的有机溶剂进行萃取，得到萃取液，萃取液浓缩，得到粗提物；C、粗提物上正相柱用洗脱剂进行洗脱；收集洗脱液，干燥，得到富含新颖倍半萜内酯化合物的提取物；D、提取物进行反相中压柱层析及制备型高效液相柱层析分离，得到所述的新颖倍半萜内酯化合物。该制备方法操作简单，生产成本低，得到的产品可用于癌症治疗药物的制备，具有良好开发前景。

【技术实现步骤摘要】
一种倍半萜内酯类化合物、其制备方法以及应用
本专利技术属于天然药物活性成分
，涉及从中药中提取、制备有效成分和应用的领域，尤其是涉及一种菊科泽兰属植物中一个新颖倍半萜内酯的制备方法及其癌症治疗应用。
技术介绍
菊科(Compositae)泽兰属(EupatoriumL.)植物全世界约600余种，主要分布于中南美洲的温带及热带地区。我国有14种，若干个变种，除新疆、西藏外全国均产。泽兰属作为药用的植物，目前应用较多的有林泽兰等八个种。该属植物具有悠久的用药历史。野马追为菊科泽兰属植物林泽兰(EupatoriumlindleyanumDC.)的干燥地上部分，在我国分布较广，具有多年用药历史，现被我国2015版药典收载。野马追，味苦性平，归肺经，具有清热解毒，化痰止咳、平喘等功效。野马追枝叶有解表祛湿，和中化湿之效，用于劳伤咳嗽、吐血咳血以及淋浊白带、无名肿痛等治疗。野马追已被开发成颗粒剂、糖浆剂等多种中成药广泛应用于临床。野马追糖浆是名优中成药，主要用于呼吸系统疾病的治疗，产生了显著的社会及经济效益。野马追药材中含有丰富的结构新颖的倍半萜内酯类成分，该类成分普遍含有“α-β不饱和羰基”结构单元，为一类典型的迈克尔反应受体分子(Michaeladditionacceptors)。迈克尔反应受体分子具有显著生物活性，特别是对细胞信号传导通路中含有半胱氨酸残基的蛋白、酶，如STAT3、CDK、Hsp90、NF-κB等具有抑制活性，迈克尔反应受体分子已成为小分子生物药物研究的热点之一。迄今为止，虽然从泽兰属植物中分离得到了一系列倍半萜内酯类化合物，但并没有提供一种工艺简单、科学合理，有效成分理化性质稳定、生物活性显著的菊科泽兰属植物倍半萜内酯类化合物及其制备方法。在野马追糖浆等中成药制剂的应用方面，该类制剂多用于化痰、止咳、平喘等呼吸系统疾病的治疗，检测的指标成分或有效成分以黄酮、生物碱为主，野马追及其制剂在癌症治疗方面的应用鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新颖倍半萜内酯、其制备方法以及应用，该倍半萜内酯具有较好的抗癌活性，同时该制备方法工艺操作简单、科学合理，能够得到理化性质稳定，纯度较高的倍半萜内酯类化合物。一种倍半萜内酯类化合物，结构如式(Ⅰ)所示：该化合物的结构目前未见有文献报道，同时MTT试验表明该化合物对两株人源乳腺癌细胞具有显著的抑制作用，给药24h后，对两株人源肿瘤细胞株的半数抑制浓度(IC50)为：2.67～3.05μmol/L。具有抗肿瘤活性。本专利技术还提供了一种所述倍半萜内酯类化合物的制备方法，包括下述步骤：(A)提取：采用提取溶剂对药材进行提取，得到提取液；所述的药材为菊科泽兰属植物的干燥地上部分和/或全草；(B)萃取：对步骤(A)得到的提取液进行浓缩，得到的浓缩物加水混悬，然后采用萃取溶剂进行萃取得到萃取液，萃取液经过浓缩，得到粗提物；(C)柱层析：步骤(B)得到的粗提物上正相柱，用洗脱溶剂进行洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得到富含所述倍半萜内酯化合物的提取物；(D)中压柱层析：步骤(C)得到的提取物进行中压柱层析分离，得到含有式(1)所示化合物的粗产品。所述的中压柱层析中，色谱柱填料为十八烷基键合相硅胶；所述中压柱层析流动相至少包括40～70％的甲醇水溶液；(E)制备型高效液相柱层析：步骤(D)得到的粗产品进行制备型高效液相柱层析，得到如式(1)所示的化合物。所述制备型高效液相柱层析中，色谱柱填料为十八烷基键合相硅胶；所述制备型高效液相柱层析流动相至少包括20～40％的乙腈水溶液。步骤A中，药材的提取方法较多，包括渗漉法。渗漉法提取效率高，提取溶剂用量少，常温提取能耗低，简便可行。渗漉法在常温下操作，亦不会造成热敏性有效成分的破坏。步骤B中，萃取溶剂可以有多种选择，但至少要包括乙酸乙酯。乙酸乙酯极性大于现有技术中的石油醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿，能够将泽兰属植物提取物中倍半萜内酯类成分萃取完全；乙酸乙酯极性小于现有技术中的正丁醇，不但能将倍半萜内酯类成分完全萃取出来，还能够剔除一些易溶于正丁醇的极性较大的苷类杂质，从而使得泽兰属植物粗提物中倍半萜内酯类活性成分的含量更高，纯度更高。步骤C中，洗脱剂有比较严格的要求，并对体积比有限定，所述洗脱剂选择性高，洗脱能力强，能够保证得到理化性能稳定、所述化合物分布集中的提取物。所述的洗脱剂包括由体积比为20～0：1的石油醚和乙酸乙酯组成的洗脱剂。步骤D中，所述的中压柱层析为反相色谱，色谱柱填料为十八烷基键合相硅胶。所述中压柱层析流动相至少包括40～70％的甲醇水溶液。步骤E中，所述的制备型高效液相柱层析亦为反相色谱，色谱柱填料为十八烷基键合相硅胶，流动相至少包括20～40％的乙腈水溶液。为了取得更好的专利技术效果，以下作为本专利技术的优选：步骤(A)中，所述药材为野马追(EupatoriumlindleyanumDC.)的干燥全草，野马追被2015版中国药典收载，价廉易得。所述提取溶剂为水、醇中的一种或两种，该提取溶剂使用安全、价廉、且具有较好的提取效率。进一步优选，所述提取溶剂为含乙醇质量分数为90～95％的乙醇水溶液。该提取溶剂的性质非常适合于提取泽兰属植物干燥地上部分和/或全草，能够更加高效、完全地获取药用部位中的倍半萜内酯类活性成分，且能避免大量极性较大的非倍半萜内酯类杂质被提取出来。所述提取方法为溶剂提取法。进一步优选，所述提取方法为渗漉法。药材打粉，过40目筛，药粉润湿后装柱，加90～95％乙醇冷浸24h，渗漉，提取溶剂与药材的用量比为15～20L﹕1kg。该法提取效率高，提取溶剂用量少，常温下提取能耗低，且能避免热敏性活性成分的降解，渗漉设备简单，也能大量节约生产成本。步骤(B)中，所述的萃取溶剂为石油醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水中的两种以上。萃取时按极性由小到大依次使用单一溶剂进行萃取。进一步优选，所述的萃取溶剂为石油醚、乙酸乙酯，萃取时按极性大小依次使用单一溶剂等体积进行萃取。根据相似相溶原理，分别通过上述萃取溶剂萃取，以使步骤A得到的药材提取液浓缩加水混悬后的溶液按照极性由小到大分离，通过薄层色谱(TLC)、LC-MS检识，泽兰属植物萃取液中的倍半萜内酯主要集中在乙酸乙酯萃取液中，其它萃取溶剂主要用于去除药材提取物中非倍半萜内酯类杂质，以得到富含倍半萜内酯的粗提物。因此，进一步优选，将乙酸乙酯萃取液浓缩，乙酸乙酯提取物上正相柱进一步纯化，其余的可以忽略，从而减少生产成本。步骤(C)中，所述正相柱填料为100～200目的柱层析用硅胶或氧化铝。所述的洗脱剂包括由体积比为20﹕1的石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂、由体积比为15﹕1的石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂、由体积比为10﹕1的石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂、由体积比为6﹕1的石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂、由体积比为3﹕1的石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂、由体积比为2﹕1的石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂、由体积比为1﹕1的石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂、由体积比为0﹕1的石油醚和乙酸乙酯组成的混合溶剂，并按极性由小到大依次进行梯度洗脱。采用石油醚和乙酸乙酯组成的洗脱剂，并按极性由小到大依次进行梯度洗脱，该洗脱体系选择性高，洗脱能力强，通过T本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种倍半萜内酯类化合物，其特征在于，结构如式(Ⅰ)所示：

【技术特征摘要】
1.一种倍半萜内酯类化合物，其特征在于，结构如式(Ⅰ)所示：2.一种如权利要求1所述的倍半萜内酯类化合物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：(A)提取：采用醇溶剂对药材进行提取，得到提取液；所述的药材为野马追的地上部分和/或全草；(B)萃取：对步骤(A)得到的提取液进行浓缩，得到的浓缩物加水混悬，然后采用萃取溶剂进行萃取得到萃取液，萃取液经过浓缩，得到粗提物；步骤(B)中，萃取采用石油醚和乙酸乙酯分别进行，对乙酸乙酯萃取液进行浓缩得到粗提物；(C)柱层析：步骤(B)得到的粗提物上正相柱用洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得到富含所述倍半萜内酯的提取物；步骤(C)中，所述的正相柱所用的填料为100～200目的柱层析硅胶；步骤(C)中，洗脱方式为梯度洗脱，洗脱剂由体积比为20～0:1的石油醚和乙酸乙酯组成，含有目标产物的洗脱液通过TLC或LC-MS进行检识；(D)中压柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨波，赵华军，周东恒，赵亚萍，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33