显微镜下进行细胞微切割和回收的方法技术

本发明专利技术提供了一种显微镜下进行细胞微切割和回收的方法，包括以下步骤：组织切片的制备；确定切割区域；肿瘤细胞切割；利用细胞转移膜收集和转移细胞，所述细胞转移膜是由能被消化酶消化的材料制成。当样本中肿瘤细胞占比较少时，利用本发明专利技术所述方法，能够在普通显微镜下回收和富集样本中的肿瘤细胞，满足分子诊断需要的细胞样本用量。解决了在显微镜下挑选出的细胞不能被肉眼看到和准确转移的技术问题，且操作方法简单、成本低。非常有利于临床检验领域的应用，保证了后续检测的顺利进行和检测结果的准确性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及一种细胞样本采集领域，特别设及在普通显微镜下进行细胞微切割和 回收的方法。
技术介绍
在生命科学检测领域，需要对组织中某一特定的细胞群体进行基因或蛋白质的研 究。例如，人体肿瘤千差万别，即使是同一个部位的肿瘤，治疗效果和方法也应因人而异。随 着基因分子水平研究的不断深入，越来越多的肿瘤细胞信号通路被发现，大量临床研究表 明，通路中特定基因的扩增/突变/表达状态与祀向、化疗药物有效性密切相关。据统计，化 疗总体有效率在30%到40%，而通过基因检测筛选出获益病人，有效率可W提高到80%。 因此利用基因检测能最大程度地提高治疗的效率，减少药物的毒副作用，避免用药不当贻 误治疗时机。美国抑A已经强制要求用药前进行EGFR、KRAS等基因检测。美国国家综合癌 症网络已经将EGFR、KRAS、ERCC1、RRM1、肥R2等基因检测纳入到癌症治疗指南中。现在肿 瘤基因检测主要针对一些实体瘤，如肺癌、肠癌、乳腺癌、胃癌等。 在分析过程中，首先需要从生物体中获得待测组织样本。在通常情况下，待测组织 样本中特定细胞的量是充足的。然而有时临床样本的量不能满足检测要求。例如在肿瘤分 子诊断中，需要分析组织中肿瘤细胞的基因情况，但若组织样本中的肿瘤细胞量非常少，而 其他细胞或细胞间质比例很高时，提取获得的肿瘤DNA的量不能满足基因检测的要求，造 成假阴性的检测结果。因此需要从多样性的组织中进一步分离出形态单一的细胞群，提高 待分析样本中特定细胞群（例如肿瘤细胞）的占比，使基因或蛋白分析更加准确。 利用激光微切割仪器分离肿瘤组织切片中的肿瘤细胞是目前常用的方法。激光 微切割具有切割效果好，收集效率高和对后续基因、蛋白检测影响小的特点，但激光微切割 成本高，耗时长。人工对肿瘤组织切片中的肿瘤细胞进行显微镜下的镜检和切割也是目前 常用的切割方法。该方法成本低，对设备的要求不高。但是，一方面因切割下的细胞非常微 小，肉眼几乎不能观察到，细小的细胞离开显微镜后不能被肉眼看到。另一方面肿瘤细胞 在组织切片中所占比例非常低，运些因素让显微镜下切割后的细胞的成功转移变得非常困 难。如何实现将切割下来的细胞准确转移成为人工显微镜下镜检切割和富集目标细胞的一 个瓶颈，是当前急需解决的技术问题。
技术实现思路
为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供了一种显微镜下进行细胞微切割和回收 的方法，包括W下步骤： (1)组织切片的制备； 似将（1)中所述组织切片放在显微镜下，确定切割区域； (3)在显微镜下进行肿瘤细胞切割； (4)细胞转移和收集：将细胞转移膜粘贴于经（3)切割的切片上，所述细胞转移膜 粘附了切割下来的肿瘤细胞后，将所述细胞转移膜放入细胞收集器中，肿瘤细胞与转移膜 分离，获得经显微切割获得的肿瘤细胞。 进一步地，步骤（2)中，在4倍物镜下确定肿瘤细胞的切割区域。 进一步地，步骤（3)中，将物镜调至10倍，并在该倍数下利用切割工具进行显微切 害d，切割出肿瘤细胞。 进一步地，所述切割工具选自注射器、刀片之一。 进一步地，将注射器推杆拉至最大距离，用手W握笔方式手持注射器，在显微镜观 察下让注射器针头接近切片中肿瘤细胞区域，持注射器的手控制针头来回移动切割目标区 域肿瘤细胞。 进一步地，所述细胞转移膜是由能被消化酶消化的材料制成。 进一步地，经消化酶消化，转移膜被消化酶消化，肿瘤细胞与转移膜分离。 本专利技术的有益效果是：当样本中肿瘤细胞占比较少时，利用本专利技术所述方法，能够 在普通显微镜下回收和富集样本中的肿瘤细胞，满足分子诊断需要的细胞用量。解决了在 显微镜下切割得到的细胞不能被肉眼看到和准确转移的技术问题，且操作方法简单、成本 低。【附图说明】 图1在显微镜下确定需要切割的区域； 图2使用注射器在显微镜下切割肿瘤细胞。 图3是切割前的细胞切片。 图4是切割并还剩有未转移的细胞切片。 图5是肿瘤细胞被完全切割和转移后的细胞切片。 图6是使用本专利技术所述方法获得的样本Sanger测序结果图。 图7未使用本专利技术所述方法获得的样本Sanger测序结果图。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术进行详细的说明。运些具体的实施例仅仅是在不违 背本专利技术精神下的有限列举，并不排除本领域的一般技术人员把现有技术和本专利技术结合而 产生的其他具体的实施方案。 (一）用于显微切割的样本采集 根据病例情况，获得需要显微切割的组织样本。 (二）操作工具：切割装置；细胞收集器；细胞转移膜；綴子、剪刀、橡胶手套、记号 笔等。 所述切割装置选自注射器、切割刀片等。所述细胞收集器选自1. 5ml或2ml的干 燥EP管等。优选的方案中，所述细胞转移膜具有一定的粘性，可W粘附住细胞，在优选方案 中，转移膜可W被消化酶消化的材料制成，例如封口膜（parafilim)等。 (S)显微镜下切割和回收细胞的操作步骤 3. 1组织切片的制备：病理医生确认需进行微切割的病例，根据镜下所见评估所 需切面数，进行切片、染色，不封片。 3. 2确定切割区域：将拟切割切片放置于显微镜载物盘，在物镜下确定切割区域。 优选的方案中，在4倍物镜下确定肿瘤细胞的切割区域。 3. 3肿瘤细胞切割：在显微镜观察下用切割装置切割出目标区域的肿瘤细胞。优 选的方案中，将物镜调整至10倍，并在该倍数下利用切割工具切割出目标区域的肿瘤细 胞。 3. 4细胞转移和收集 将细胞转移膜粘贴于切片上，使切割下的肿瘤细胞能粘附于细胞转移膜上，轻轻 取下粘附着细胞的转移膜，并将所述细胞转移膜放入细胞收集器中。被转移的细胞与转移 膜分离，获得经显微切割获得的肿瘤细胞。 所述细胞与转移膜的分离方法，包括利用洗脱液将细胞从转移膜上洗脱下来，或 利用消化过程，消化转移膜，留下目标产物。 在消化转移膜的方法中，所述的细胞转移膜是由可W被消化的材料制成。在一个 优选的方案中所述细胞转移膜可W被消化酶消化，所述消化酶选自蛋白酶K等。具体的，向 细胞收集器中加入消化酶，消化酶将细胞转移膜溶解，获得切割下来的肿瘤细胞。 切割完成后将切割装置上粘附的肿瘤细胞注入细胞收集器中，可W再显微镜下重 复操作多次，W尽可能多的收集经显微切割下来的肿瘤细胞。 在利用细胞转移膜转移肿瘤细胞前，操作者可W缓慢、平稳的从显微镜上取下已 切割当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
显微镜下进行细胞微切割和回收的方法，包括以下步骤：(1)组织切片的制备；(2)将(1)中所述组织切片放在显微镜下，确定切割区域；(3)在显微镜下进行肿瘤细胞切割；(4)细胞转移和收集：将细胞转移膜粘贴于经(3)切割的切片上，所述细胞转移膜粘附了切割下来的肿瘤细胞后，将所述细胞转移膜放入细胞收集器中，肿瘤细胞与转移膜分离，获得经显微切割获得的肿瘤细胞。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏成青，陈红梅，朱良俊，邹媛，张磊，唐远燕，吴薇，张梅英，
申请(专利权)人：南京艾迪康医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32