一种硬叶兰组织培养繁育方法，包括如下步骤：(1)取硬叶兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽。采用本发明专利技术所述的培养方法得到的硬叶兰丛生芽增殖系数达到20-30倍，能够在短时间内提供健壮的硬叶兰优质种苗，有效解决硬叶兰规模化育苗的问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物繁殖方法，特别是。
技术介绍
硬叶兰(Cymbidium bicolor Lindl.)为兰科药用植物，全草入药，具有散瘀止血、清热润肺、化痰止咳等功效。此外，硬叶兰还极具观赏价值。但硬叶兰的种子非常细小，仅有发育不完全的胚，本身无法储存养分，自然条件下，其种子萌发阶段完全依靠菌根真菌为其提供养分，自然繁殖率低，时间长。因此，野生硬叶兰非常稀少，由于长期过度采掘及生态环境的破坏，硬叶兰已处于濒危状态，种子种苗稀缺，资源更新非常困难。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，能够快速有效地提高硬叶兰种苗的繁殖速度和质量，实现硬叶兰优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。本专利技术通过以下技术方案达到上述目的:，包括以下步骤:(1)外植体的选择与消毒:取硬叶兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS诱导培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS诱导培养基中添加0.3mg/L的6-BA、4.0mg/L 的 ΝΑΑ、2.0mg/L 的 PVP、30g/L 蔗糖和 5g/L 的琼脂，培养基的 pH 值为 5.8 ；(3)丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于1/3MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养60天得到丛生芽，其中1/3MS繁殖培养基中添加2.0-5.0mg/L的6_BA、0.2-0.6mg/LNAA、2.0mg/L的PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。本专利技术的突出优点在于:(1)采用生物技术对硬叶兰进行组织培养快速繁殖，能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的硬叶兰幼苗，保障硬叶兰种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。(2)采用本专利技术所述的培养方法得到的硬叶兰丛生芽增殖系数达到20-30倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根。【具体实施方式】下面结合实施例对本专利技术的技术方案进一步说明。实施例1本专利技术所述的硬叶兰组织培养繁育方法的一个实例，包括以下步骤:(1)外植体的选择与消毒:取硬叶兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS诱导培养基中，在培养温度为23_27°C，光照强度15001UX，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS诱导培养基中添加 0.3mg/L 的 6-BA、4.0mg/L 的 ΝΑΑ、2.0mg/L 的 PVP、30g/L 蔗糖和 5g/L 的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;(3)丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于1/3MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养60天得到丛生芽。其中，1/3MS繁殖培养基中添加2.0mg/L的6_BA、0.3mg/L的NAA、2.0mg/L的PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为21.6。实施例2本专利技术所述的硬叶兰组织培养繁育方法的又一个实例，包括以下步骤:(1)外植体的选择与消毒:取硬叶兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS诱导培养基中，在培养温度为23_27°C，光照强度15001UX，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS诱导培养基中添加 0.3mg/L 的 6-BA、4.0mg/L 的 ΝΑΑ、2.0mg/L 的 PVP、30g/L 蔗糖和 5g/L 的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;(3)丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于1/3MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养60天得到丛生芽，其中1/3MS繁殖培养基中添加3.0mg/L的6_BA、0.4mg/L的NAA、2.0mg/L的PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为24.8。实施例3本专利技术所述的硬叶兰组织培养繁育方法的再一个实例，包括以下步骤:(1)外植体的选择与消毒:取硬叶兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS诱导培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间8-10小时/天的条件下，培养60天，得到无菌试管苗。其中，MS诱导培养基中添加 0.3mg/L 的 6-BA、4.0mg/L 的 NAA、2.0mg/L 的 PVP、30g/L 蔗糖和 5g/L 的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;(3)丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于1/3MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养60天得到丛生芽，其中1/3MS繁殖培养基中添加3.0mg/L的6_BA、0.5mg/L的NAA、2.0mg/L的PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为30.2。实施例4本专利技术所述的硬叶兰组织培养繁育方法的又一个实例，包括以下步骤:(1)外植体的选择与消毒:取硬叶兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min，线状自来水冲洗15_30min，添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min，无菌水冲洗3_5次，最后，用消本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种硬叶兰组织培养繁育方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取硬叶兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15‑30min、添加了2‑3滴吐温‑20的100毫升0.1v/v％升汞消毒8‑10min、无菌水冲洗3‑5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体剥去0.2‑0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS诱导培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS诱导培养基中添加0.3mg/L的6‑BA、4.0mg/L的NAA、2.0mg/L的PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于1/3MS繁殖培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养60天得到丛生芽，其中1/3MS繁殖培养基中添加2.0‑5.0mg/L的6‑BA、0.2‑0.6mg/LNAA、2.0mg/L的PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王晓峰，李刚，缪剑华，韦坤华，李翠，李林轩，王一诺，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西;45
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