一种特早熟桃杂交胚挽救成苗的方法技术

一种特早熟桃杂交胚挽救成苗的方法，摘取特早熟桃七到八分熟的果实，果实消毒后破核取出胚珠并接种在生长培养基中进行胚珠培养，再将幼胚接种至分化培养基中进行幼胚分化培养，将打破休眠的胚进行胚萌发培养，再进行移栽。本发明专利技术进行特早熟桃杂交胚挽救时机适宜，在胚珠培养与胚萌发过程中开发出了合适的培养基，提高了杂交胚的发育率，提高了正常胚的比例，胚挽救苗整齐健壮，胚生长力可以达到83％以上，分化力达到60％，培养力达到50％，大大提高了特早熟桃杂交后代胚挽救成苗的基数，从而能得到更多的特早熟桃杂交后代植株群体，提高了特早熟桃杂交胚挽救成苗率，方法可操作性强、容易掌握。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物育种
，具体涉及一种特早熟桃杂交胚挽救成苗的方法。
技术介绍
果实成熟期在育种上是一项重要的经济性状。我国南方地区6月份进入梅雨季节，这个时期成熟的桃子受天气影响，大多品质不好，并且雨季影响市民对桃的购买能力，使得早熟桃在上海地区的发展受到制约，但是上海地区5月底到6月上旬天气晴朗，雨水少，如果能把早熟桃成熟期提前到这个时间，将会丰富我国桃品种资源、增加桃果品市场供应，促进南方地区桃产业的发展。桃成熟早、品质好，栽培管理省工，亩产值收入高，因而创造特早熟类型更有重要意义，也是近代各国果树育种学家向往和追求的目标之一。但当人们旨在创造特早熟新品种时，却常常会遇到杂种种胚不育的问题，阻碍着育种工作的进展。激素含量的异常会导致种子败育。陈伟2000年研究荔枝败育品种开始出现败育时IAA、GA1+3、CTK含量急剧下降，可能是生长促进物质含量的不足影响胚的细胞分裂与生物大分子的合成，造成生理代谢的紊乱及物质和能量亏损，使胚不能正常发育，最终导致败育。黄碧光等(1997)年在蕉柑幼果发育过程中也发现了这种现象。胚培养在桃遗传育种中的应用最早开始于1933年，Tukey首先进行了果实生长快慢与桃胚大小关系的研究，并开展了桃胚的培养。20世纪40年代起胚培养技术开始广泛应用于果树育种。近些年来，通过桃胚培养技术已经选育出了许多优良品种，特别是早熟品种。如春蕾、春花、早花露、早霞露、玫瑰露、Mayfire、Golderest、华光、艳光等。但是，在胚挽救过程中，品种基因型、取样接种时间、培养基种类与相态、植物生长调节剂、碳源、培养环境、移栽方式等都会对胚挽救的萌发率和成苗率产生影响，且各因子相互作用，特早熟桃由于种胚很小，并且发育过程中出现败育现象，其胚培过程需要先让胚长大然后再萌发成苗，操作复杂，成苗率低，严重限制了特早熟桃的育种效率。因此，很有必要深入开展特早熟桃的胚挽救技术研究，以提高特早熟桃胚挽救育种的成苗率。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种特早熟桃杂交胚挽救成苗的方法，有效地促进特早熟桃杂交胚发育，在离体组织培养条件下能发育成苗，且萌发后的试管苗健壮整齐，提高特早熟桃中胚挽救育种效率。为了达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种特早熟桃杂交胚挽救成苗的方法，包括以下步骤：1)取样接种在特早熟桃品种杂交授粉后，摘取七到八分熟果实，对果实消毒，破核取出胚珠，将胚珠接种在生长培养基中；所述的生长培养基中包含SH培养基、植物生长调节剂、蔗糖和活性炭；2)胚珠培养将步骤1)中接种至生长培养基中的胚珠进行暗培养，暗培养的温度为20～28℃，培养20～40天，得到膨大的胚珠；3)幼胚分化培养将步骤2)中膨大的胚珠剥去种皮，得到幼胚，将长度大于1mm的幼胚转接到分化培养基中，于2～7℃低温暗培养70～90天，得到打破休眠的胚；4)胚萌发培养将打破休眠的胚进行光照培养，培养温度18～23℃，培养7～15天后得到试管苗；5)移苗将具有3～6片真叶、5条以上须根的试管苗移栽到基质中，移到温室中进行常规管理，得到幼苗，在终霜期后将幼苗移栽到大田中。进一步，步骤1)中对果实消毒的方法为：先用体积分数为70～85％酒精浸没果实，消毒10～20min，然后用20～30％次氯酸钠浸没果实，消毒10～20min。优选地，步骤1)中所述的生长培养基中的植物生长调节剂为吲哚乙酸和赤霉素。又进一步，步骤1)中所述的生长培养基包含SH培养基、吲哚乙酸1～2.5mg/L、赤霉素0.5～1.5mg/L、蔗糖55～65g/L和活性炭0.5～2.5g/L。优选地，步骤2)胚珠培养中暗培养温度为22～26℃，培养25～35天。进一步，步骤3)中的低温暗培养温度为4～5℃，所述分化培养基为木本培养基。进一步，步骤5)中移栽入基质的试管苗具有5～6片真叶，5条以上须根，基质为进口草炭：珍珠岩＝1：1～3，体积比，将试管苗移栽到基质中后罩住保湿，3天后打开透气。本专利技术的SH(StewartandHsu)培养基的pH为5.8，成分见表1：表1主要成份mg/L七水硫酸镁(MgSO4·7H2O)493二水氯化钙(CaCl2·2H2O)441.06硝酸钾(KNO3)5055.0磷酸二氢钾(KH2PO4)272.18七水硫酸铁(FeSO4·7H2O)8.34碘化钾(KI)0.83六水氯化钴(CoCl2·6H2O)0.024七水硫酸锰(ZnSO4·7H2O)8.6五水硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.025硼酸(H3BO3)6.183二水钼酸纳(Na2MoO4.2H2O)0.242四水硫酸锰(MnSO4·4H2O)16.9乙二胺四乙酸二钠(Na2-EDTAEDTA)11.167氯化铵(NH4Cl)535.0盐酸硫胺(Thiamine-HCl)1.349盐酸吡哆素(Pyroxidine-HCl)0.822烟酸(NicotinicAcid)0.492本专利技术的木本培养基(WoodyPlantmedium，简称WPM培养基)的pH为5.8，其成分见表2：表2主要成份mg/L硝酸铵(NH4NO3)400四水硝酸钙(Ca(NO3)2.4H2O)556硫酸钾(K2SO4)990二水氯化钙(CaCl2·2H2O)96磷酸二氢钾(KH2PO4)170二水钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)0.25七水硫酸镁(MgSO4·7H2O)370一水硫酸锰(MnSO4·H2O)22.4七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O)8.6五水硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.25硼酸(H3BO3)6.2七水硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)27.8乙二胺四乙酸二钠(Na2-EDTA)37.3肌醇(myo-Inositol)100维生素B1(ThiamineHCl)1.0烟酸(Nicotinicacid)0.5维生素B6(Pyridoxine本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特早熟桃杂交胚挽救成苗的方法，包括以下步骤：1)取样接种在特早熟桃品种杂交授粉后，摘取七到八分熟果实，对果实消毒，破核取出胚珠，将胚珠接种在生长培养基中；所述的生长培养基中包含SH培养基、植物生长调节剂、蔗糖和活性炭；2)胚珠培养将步骤1)中接种至生长培养基中的胚珠进行暗培养，暗培养的温度为20～28℃，培养20～40天，得到膨大的胚珠；3)幼胚分化培养将步骤2)得到的膨大的胚珠剥去种皮，得到幼胚，再将长度大于1mm的幼胚转接到分化培养基中，于2～7℃低温暗培养70～90天，得到打破休眠的胚；4)胚萌发培养将打破休眠的胚进行光照培养，培养温度18～23℃，培养7～15天后得到试管苗；5)移苗将具有3～6片真叶、5条以上须根的试管苗移栽到基质中，在温室中进行常规管理，得到幼苗，在终霜期后将幼苗移栽到大田中。

【技术特征摘要】
1.一种特早熟桃杂交胚挽救成苗的方法，包括以下步骤：
1)取样接种
在特早熟桃品种杂交授粉后，摘取七到八分熟果实，对果实消毒，
破核取出胚珠，将胚珠接种在生长培养基中；所述的生长培养基中包含
SH培养基、植物生长调节剂、蔗糖和活性炭；
2)胚珠培养
将步骤1)中接种至生长培养基中的胚珠进行暗培养，暗培养的温度
为20～28℃，培养20～40天，得到膨大的胚珠；
3)幼胚分化培养
将步骤2)得到的膨大的胚珠剥去种皮，得到幼胚，再将长度大于
1mm的幼胚转接到分化培养基中，于2～7℃低温暗培养70～90天，得到
打破休眠的胚；
4)胚萌发培养
将打破休眠的胚进行光照培养，培养温度18～23℃，培养7～15天后
得到试管苗；
5)移苗
将具有3～6片真叶、5条以上须根的试管苗移栽到基质中，在温室中
进行常规管理，得到幼苗，在终霜期后将幼苗移栽到大田中。
2.根据权利要求1所述的特早熟桃杂交胚挽救成苗方法，其特征在于，步
骤1)中对果实消毒的方法为：先用70～85％酒精浸没果实，消毒
10～20min，然后用次氯酸钠水溶液浸没果实，消毒10～20min。
3.根据权利要求1所述的特早熟桃杂交胚挽救成苗方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜纪红，叶正文，苏明申，周慧娟，李雄伟，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海;31