本发明专利技术公开了一种同时负载化疗药物和光动力治疗药物的细胞膜微囊。选用人源细胞作为原料制备细胞膜微囊；将得到的细胞膜微囊浸泡在洋地黄皂苷溶液中，提高细胞膜通透性；依次加入化疗药物盐酸阿霉素和光动力治疗药物吲哚菁绿，使药物渗透进入细胞膜微囊；使用钙离子封闭细胞膜，得到同时负载化疗药物和光动力治疗药物的细胞膜微囊。该细胞膜微囊在808nm的激光照射下可产生活性氧，与化疗药物共同作用杀死肿瘤细胞，有望用于肿瘤治疗。本发明专利技术制备方法简便可控，生产效率高，有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
光动力治疗是采用激光与光动力治疗药物(光敏剂)结合对疾病组织进行特异性杀伤的一种新型治疗手段。激光刺激光动力治疗药物后，周围02转变为单线态氧等活性氧物质，活性氧通过氧化作用杀伤靶细胞。但起主要杀伤作用的单线态氧存活时间短，实现光动力治疗药物的定位作用是光动力治疗研究的重点内容之一，通过载体对其传递是实现该功能的一种方法。化疗也是治疗肿瘤等疾病的常用方法。阿霉素为一种蒽环类抗肿瘤抗生素，为细胞周期非特异性药，其作用机制主要是阿霉素分子嵌入DNA而抑制核酸的合成。主要用于治疗急性白血病、恶性淋巴瘤、肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、宫颈癌、膀胱癌、睾丸癌、甲状腺癌、软组织肿瘤、骨肉瘤和神经母细胞癌等。目前临床给药多为静脉滴注，但该药对骨髓和心脏都有较为严重的毒副作用，并且长期用药导致肿瘤多药耐药，易造成化疗失败。可通过微米和纳米尺度的药物载体，将光动力治疗药物和化疗药物联合使用，从而克服两种治疗方式各自的缺点，提高疗效。通常的药物载体主要是使用人工合成的聚合物或天然来源的蛋白质和多糖作为原料，其结构比较简单。但是往往生物相容性差，较易被人体的免疫系统识别并清除，具有体内循环时间短且不易到达病变部位的缺点，这些缺点限制了其推广与应用。仿细胞微囊是由细胞膜将囊内空间与囊外空间隔离开来形成的球状物质。利用细胞松弛素处理哺乳动物细胞，破坏维持细胞形态的肌动蛋白的组装，然后在机械剪切的作用下制备仿细胞微囊。仿细胞微囊作为药物载体有诸多优点:由于微囊表面实质是一层类细胞膜结构，因此具有极佳的生物相容性；并且有望降低自体免疫系统的清除作用，具有更好的临床应用价值。洋地黄皂苷是一种表面活性剂，可以提高细胞膜的通透性，使得不能自由渗透细胞膜的亲水性药物分子也可以进入细胞膜微囊内部；同时洋地黄皂苷可以与高浓度的钙离子结合，实现细胞膜的再次封闭。因此，可使用洋地黄皂苷暂时地通透细胞膜，将化疗药物和光动力治疗药物装载入细胞膜微囊中；随后封闭囊壁，实现药物的缓释和保护。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种。本专利技术的，包括以下步骤:1)在培养有人源细胞的培养盘中加入20μ?浓度为lmg/mL的细胞松弛素溶液，37°C下孵育30min ;生理盐水洗数次，胰酶消化，离心去掉细胞，得细胞膜微囊悬液； 2)取200μg步骤1)所得的细胞膜微囊加入到lmL洋地黄皂苷与化疗药物的混合溶液中，混合溶液中洋地黄皂苷浓度为10 Pg/mL，化疗药物的浓度为20-200 Pg/mL ;37°C孵育1 ?6h ; 3)将步骤2)所得的细胞膜微囊离心，用生理盐水洗去多余的化疗药物；加入lmL光动力治疗药物溶液，溶液中光动力药物浓度为20-200 Pg/mL ;37°C孵育1?6h ; 4)在步骤3)的溶液中加入ΙΟμ?0.5mol/mL氯化钙溶液，37°C下孵育2h ;离心收集细胞膜微囊，洗涤，得到同时装载化疗药物和光动力治疗药物的细胞膜微囊。本专利技术中所说的人源细胞可以是内皮细胞、平滑肌细胞或成纤维细胞；本专利技术中所说的化疗药物可以是盐酸阿霉素；本专利技术中所说的光动力治疗药物可以是吲哚菁绿。本专利技术的原理:使用洋地黄皂苷提高细胞膜通透性，利用细胞内外化疗药物的浓度差将化疗药物装入细胞膜微囊；随后利用化疗药物和光动力治疗药物相反的电荷性质，通过静电吸引将大量的光动力治疗药物装入细胞膜微囊；最后使用氯化钙溶液封闭细胞膜。本专利技术的有益效果在于: 本专利技术工艺过程简单，制备速度快，可控性好，材料来源于天然细胞，具有优越的生物相容性和传递性能；洋地黄皂苷的引入，可暂时增加细胞膜微囊的通透性，实现不能穿透完整细胞膜的化疗药物盐酸阿霉素和光动力治疗药物吲哚菁绿的装载，并调控其装载量，起到保护和缓释的作用。该细胞膜微囊在808nm的激光照射下可产生活性氧，与化疗药物共同作用杀死肿瘤细胞，有望用于肿瘤治疗。【附图说明】图1是细胞膜微囊的透射电镜照片，其中(a)为原始的细胞膜微囊，(b)为装载有盐酸阿霉素和吲哚菁绿的细胞膜微囊。图2是实施例1所得的同时负载化疗药物和光动力治疗药物的细胞膜微囊中的盐酸阿霉素的释放曲线。图3是实施例1所得的同时负载化疗药物和光动力治疗药物的细胞膜微囊中的吲哚菁绿的释放曲线。图4是实施例1所得的同时负载化疗药物和光动力治疗药物的细胞膜微囊在不同光照剂量下对肿瘤细胞ifepG2的杀伤效果。图5是实施例1所得的同时负载化疗药物和光动力治疗药物的细胞膜微囊注射到裸鼠体内肿瘤部位并光照30s或90s，至第9天解剖后所获得的肿瘤体积。图6是实施例1所得的同时负载化疗药物和光动力治疗药物的细胞膜微囊注射到裸鼠体内肿瘤部位并光照90s，随后每3天测量的裸鼠体重。【具体实施方式】以下结合实例进一步说明本专利技术，但这些实例并不用来限制本专利技术。实施例1 1)在培养有人源内皮细胞的培养盘中加入20μ?浓度为lmg/mL的细胞松弛素溶液，37°C下孵育30min ;生理盐水洗三次，胰酶消化，500rpm离心lOmin去掉细胞，上清液即为细胞膜微囊悬液； 2)取20(^g步骤1)所得的细胞膜微囊加入到lmL洋地黄皂苷与化疗药物盐酸阿霉素的混合溶液中，混合溶液中洋地黄皂苷浓度为10 Pg/mL，盐酸阿霉素的浓度为200 Pg/mL ;37°C孵育当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
同时负载化疗药物和光动力治疗药物的细胞膜微囊的制备方法，包括以下步骤：1）在培养有人源细胞的培养盘中加入20µL 浓度为1mg/mL的细胞松弛素溶液，37℃下孵育30min；生理盐水洗数次，胰酶消化，离心去掉细胞，得细胞膜微囊悬液；2）取200 µg步骤1）所得的细胞膜微囊加入到1mL洋地黄皂苷与化疗药物的混合溶液中，混合溶液中洋地黄皂苷浓度为10 µg/mL，化疗药物的浓度为20‑200 µg/mL；37℃孵育1～6h；3）将步骤2）所得的细胞膜微囊离心，用生理盐水洗去多余的化疗药物；加入1mL光动力治疗药物溶液，溶液中光动力药物浓度为20‑200 µg/mL；37℃孵育1～6h；4）在步骤3）的溶液中加入10µL 0.5mol/mL氯化钙溶液，37℃下孵育2h；离心收集细胞膜微囊，洗涤，得到同时装载化疗药物和光动力治疗药物的细胞膜微囊。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：毛峥伟，韩利杰，高长有，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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