WT1抗原肽缀合物疫苗制造技术

本发明专利技术提供式(1)所示的化合物或其盐等，其中Xa和Ya各自为单键等，癌抗原肽A是由7-30个氨基酸残基组成的MHC I类-限制性WT1肽；R1是氢原子、式(2)所示的基团或癌抗原肽C，其中Xb和Yb各自为单键等，癌抗原肽B具有不同于癌抗原肽A的序列，并且是由7-30个氨基酸残基组成的MHC I类-限制性WT1肽，并且癌抗原肽C具有不同于癌抗原肽A的序列，并且是由含有一个半胱氨酸残基的7-30个氨基酸残基组成的MHC I类-限制性WT1肽或MHC II类-限制性WT1肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】WT1抗原肽缀合物疫苗
本专利技术属于癌免疫疗法领域，并且涉及缀合物疫苗，其可以通过肽酶ERAP1接受修整，其通过将来源于WT1抗原蛋白的肽前体经由硫-硫共价键缀合而得到，并且其有效地诱导细胞毒性T细胞。
技术介绍
对于消灭体内的癌细胞而言，主要是细胞免疫、尤其是细胞毒性T细胞（细胞毒性T淋巴细胞、细胞毒性T细胞，在下文中称为CTL）起着重要的作用。CTL通过前体T细胞的分化和增殖而生成，该前体T细胞识别由来源于癌抗原蛋白的抗原肽(癌抗原肽)和MHCI类分子形成的复合物，并且该CTL攻击癌细胞。肾母细胞瘤的抑癌基因WT1(WT1基因)被认为是白血病和实体瘤的新的癌抗原蛋白(参见非专利文献1)。对于WT1蛋白，例如，已经报道了与MHCI类结合且被其提呈的下述癌抗原肽(参见专利文献1、2)。WT1126-134肽:RMFPNAPYL(Arg-Met-Phe-Pro-Asn-Ala-Pro-Tyr-Leu)(SEQIDNO:2)，WT1235-243肽:CMTWNQMNL(Cys-Met-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu)(SEQIDNO:3),WT110-18肽:ALLPAVPSL(Ala-Leu-Leu-Pro-Ala-Val-Pro-Ser-Leu)(SEQIDNO:5)，WT1187-195肽:SLGEQQYSV(Ser-Leu-Gly-Glu-Gln-Gln-Tyr-Ser-Val)(SEQIDNO:6)，WT1302-310肽:RVPGVAPTL(Arg-Val-Pro-Gly-Val-Ala-Pro-Thr-Leu)(SEQIDNO:7)等。在癌免疫疗法中，辅助T细胞的活化对于活化包括CTL的其它T细胞也重要。通常，抗原蛋白被细胞内溶酶体降解，由肽（由约13-17个氨基酸残基组成）构成的肽片段的一部分作为抗原肽与MHCII类分子结合并被提呈至辅助T细胞-TCR･CD3复合物而活化辅助T细胞。对于WT1蛋白，例如，已经报道了下述通过与MHCII类结合而被提呈的癌抗原肽(参见专利文献3-5)。WT1332-347肽:KRYFKLSHLQMHSRKH(Lys-Arg-Tyr-Phe-Lys-Leu-Ser-His-Leu-Gln-Met-His-Ser-Arg-Lys-His)(SEQIDNO:8)，WT1328-349肽:PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(Pro-Gly-Cys-Asn-Lys-Arg-Tyr-Phe-Lys-Leu-Ser-His-Leu-Gln-Met-His-Ser-Arg-Lys-His-Thr-Gly)(SEQIDNO:10)，WT1122-140肽:SGQARMFPNAPYLPSCLES(Ser-Gly-Gln-Ala-Arg-Met-Phe-Pro-Asn-Ala-Pro-Tyr-Leu-Pro-Ser-Cys-Leu-Glu-Ser)(SEQIDNO:11)等。作为WT1的疫苗抗原，主要使用抗原蛋白本身或来源于上述抗原蛋白的抗原肽(参见非专利文献2)。因为使用蛋白的癌疫苗通常含有各种癌抗原肽，其可以同时诱导多种CTL和辅助T细胞。另一方面，因为癌蛋白疫苗在稳定供应和质量控制上存在问题，因此促进制造和质量控制的肽被广泛用作WT1的癌抗原。然而，由于常规的肽疫苗通常主要由单一MHCI类提呈肽抗原构成，近年来已经指出有效的CTL的诱导还需要进一步的改进(参见非专利文献3)。一个解决方案是多价抗原肽提呈WT1肽癌疫苗。作为该肽癌疫苗，已经报道了含有由MHCI类和II类所提呈的多种肽抗原的混合物的混合疫苗（cocktailvaccine）(参见非专利文献4)，含有由MHCI类和II类所提呈的肽抗原(其通过酰胺键结合)的长链肽疫苗等(参见非专利文献5)。然而，在混合疫苗的情形中，由于由各种氨基酸组成的各肽抗原表现出各种性质，能够有效地诱导与其对应的CTL的最佳制剂的开发常常有问题。在长链肽疫苗的情形中，其生产有时像蛋白那样出现问题。进而，由于在长链肽疫苗中，被I类和II类所提呈的肽抗原经由任意的肽间隔物而结合，因而难以通过细胞内酶控制和预测切割位点。同时，已经报道了其中两个肽单体通过二硫键相互结合的肽二聚体(参见专利文献6)。与混合疫苗不同，由于是两个单一的肽结合，因此它们具有单一的物性并能容易地制造。另一方面，为了形成缀合物，WT1癌抗原肽需要在其氨基酸序列中含有半胱氨酸，因此可应用的是有限的。进而，还已经报道了一种通过二硫键将具有半胱氨酸、谷胱甘肽或巯基乙酸的癌抗原肽的N-末端半胱氨酸缩合而获得的改变的化合物(参见专利文献7)。MHCI类上的癌抗原肽提呈的过程涉及多种肽酶。这些肽酶中，内质网氨肽酶1(下文中称为ERAP1)是内质网(下文中称为ER)中的一种修整酶，并且已被报道识别特定的抗原肽序列和肽长度，并且从N-末端切断癌抗原肽前体而控制长度为最适于与MHCI类结合(参见非专利文献6-8)。然而，迄今尚未报道通过ERAP1的修整功能而控制了其从N-末端起的长度的含有半胱氨酸的WT1肽癌抗原前体。[文献列表][专利文献]专利文献1:WO00/06602专利文献2:WO00/18795专利文献3:WO2005/045027专利文献4:WO2007/047764专利文献5:WO2007/120673专利文献6:WO2004/063217专利文献7:WO2007/063903[非专利文献]非专利文献1:TheJournalofImmunology,2000;164(4);1873-1880非专利文献2:TheOncologist,2012;17(2);250-259非专利文献3:CancerJournal,2011;17(5);343-350非专利文献4:Blood,2010;166(2);171-179非专利文献5:Cancers,2011;3;3991-4009非专利文献6:ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesofUnitedStatesofAmerica,2005;102(47);17107-17112非专利文献7:TheJournalofImmunology,2009;183;5526-5536非专利文献8:TheJournalofImmunology,2010;184;4725-4732。
技术实现思路
专利技术要解决的技术问题本专利技术要解决的问题是提供一种有效地诱导CTL的WT1缀合物疫苗。用于解决技术问题的方法为了解决上述问题，本专利技术人已经进行了深入研究，并且发现，当考虑采用缀合物疫苗时，想到将半胱氨酸添加至WT1癌抗原肽，并且进一步证实了采用体内动物模型的药理学试验等的结果强烈暗示ERAP1从通过细胞内的二硫键的还原裂解生成的WT1癌抗原肽前体的N-末端切断半胱氨酸，而有效地将其转换为癌抗原肽，这使得发现能够在体内诱导CTL的多价抗原肽提呈缀合物疫苗，从而完成了本专利技术。具体地，在研究上述问题的解决方案的过程中，他们已经获得了下述想法，即在不影响MHCI类的抗原提呈的情形下将形成两个不同WT1癌抗原肽的缀合物所需的半胱氨酸导入至N-末端或C-末端的任意位置的方法。作为进一步研究的结果，他本文档来自技高网...

【技术保护点】
式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中Xa和Ya各自为单键，癌抗原肽A是由选自下述氨基酸序列中的任意氨基酸序列组成的肽:RMFPNAPYL (SEQ ID NO:2)，ALLPAVPSL (SEQ ID NO:5)，SLGEQQYSV (SEQ ID NO:6) 和RVPGVAPTL (SEQ ID NO:7)，癌抗原肽A的N‑末端氨基酸的氨基与式(1)中的Ya结合，并且癌抗原肽A的C‑末端氨基酸的羰基与式(1)中的羟基结合，R1是癌抗原肽C，癌抗原肽C具有不同于癌抗原肽A的序列的序列，该癌抗原肽C是由选自下述氨基酸序列中的任意氨基酸序列组成的肽:CMTWNQMNL (SEQ ID NO:3) 和CYTWNQMNL (SEQ ID NO:4)，并且癌抗原肽C的半胱氨酸残基的硫醚基与式(1)中的硫醚基结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.29 JP 2013-072173;2013.07.31 JP 2013-158381.式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中Xa和Ya各自为单键，癌抗原肽A是由选自下述氨基酸序列中的任意氨基酸序列组成的肽:RMFPNAPYL(SEQIDNO:2)，ALLPAVPSL(SEQIDNO:5)，SLGEQQYSV(SEQIDNO:6)和RVPGVAPTL(SEQIDNO:7)，癌抗原肽A的N-末端氨基酸的氨基与式(1)中的Ya结合，并且癌抗原肽A的C-末端氨基酸的羰基与式(1)中的羟基结合，R1是癌抗原肽C，癌抗原肽C具有不同于癌抗原肽A的序列的序列，该癌抗原肽C是由选自下述氨基酸序列中的任意氨基酸序列组成的肽:CMTWNQMNL(SEQIDNO:3)和CYTWNQMNL(SEQIDNO:4)，并且癌抗原肽C的半胱氨酸残基的硫醚基与式(1)中的硫醚基结合。2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中式(1)所示的化合物是式(4)所示的化合物:其中C与C之间的键是二硫键。3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中式(1)所示的化合物是式(5)所示的化合物:其中C与C之间的键是二硫键。4.组合物，其包含根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述组合物包含：选自式(4)所示的化合物和式(5)所示的化合物中的化合物，其中C与C之间的键是二硫键，其中C与C之间的键是二硫键；以及至少一个由选自下述氨基酸序列中的氨基酸序列组成的肽:CNKRYFKLSHLQMHSRK(SEQIDNO:22)，CNKRYFKLSHLQMHSRKH(SEQIDNO:23)，CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(SEQIDNO:24)，WAPVLDFAPPGASAYGSL(SEQIDNO:244)，CWAPVLDFAPPGASAYGSL(SEQIDNO:242)和WAPVLDFAPPGASAYGSLC(SEQIDNO:243)。6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述组合物包含式(4)所示的化合物：其中C与C之间的键是二硫键。7.根据权利要求5所述的组合物，其中所述组合物包含式(5)所示的化合物：其中C与C之间的键是二硫键。8.根据权利要求4-7中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少一个由选自下述氨基酸序列中的氨基酸序列组成的肽:WAPVLDFAPPGASAYGSL(SEQIDNO:244)，CWAPVLDFAPPGA...

【专利技术属性】
技术研发人员：李嘉强，坂仁志，西尾幸博，后藤正志，西原纪夫，高梨洋辅，
申请(专利权)人：大日本住友制药株式会社，株式会社癌免疫研究所，
类型：发明
国别省市：日本;JP