治疗缺氧诱导因子(HIF)相关的状况的方法技术

本发明专利技术涉及治疗缺氧诱导因子(HIF)相关的状况的方法，且特别地涉及治疗HIF相关的状况的方法，所述方法包括施用包含转铁蛋白的组合物。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】治疗缺氧诱导因子（HIF)相关的状况的方法 描沭 专利
本专利技术涉及治疗缺氧诱导因子（HIF)相关的状况的方法，且特别地涉及治疗HIF 相关的状况的方法，所述方法包括施用包含转铁蛋白的组合物。 专利技术背景 保护细胞且特别是神经元免受由包括以下的各种因素引起的损害：中风、神经退 行性疾病、外伤性损伤等等，对细胞或神经元功能的长期恢复是重要的。通过单一的剂对损 伤的细胞或神经元的疗治处理具有优势，但常常不足以调动有助于恢复完全功能所需要的 分子的复杂性。 保护神经元或其他细胞免受缺氧或缺血性事件、或氧化的生理反应，常常被认为 是由通过缺氧诱导因子（HIF)信号传导通路上调的基因的表达来介导，所述缺氧诱导因子 (HIF)信号传导通路是响应细胞损害的关键调控通路。在脑中，神经保护分子的上调被认为 是保护细胞免受不可挽回的损害的关键因素。然而，几乎没有可用药物足以能够阻止、恢复 或降低对神经元和其他组织的损害。此外，它们常常是有毒的，具有短的半衰期，或两者兼 而有之。例如，国际专利申请W02006/20727提出了去铁胺作为针对再灌注的有害效应的神 经保护（neuroprotector)剂的用途；然而，由于其在血衆中降低的半衰期，去铁胺的施用 构成问题。 转铁蛋白是控制生物体液中的游离铁的水平的铁结合血液血浆糖蛋白。转铁 蛋白在循环中发挥了铁的主要转运蛋白的作用，其中转铁蛋白以不含铁的脱铁转铁蛋 白（apo_transferrin，ApoTf)形式，作为单铁的（monoferric)转铁蛋白、或作为二铁 的（diferric)饱和铁转铁蛋白（holo-transferrin，HoloTf)存在。通常，铁结合循环 中全部转铁蛋白结合位点的30%。Chen-Roetling等人已公开了 ApoTf而非HoloTf的 神经保护功能（Chen-Roetling J·，Chen L·，和 Regan R.F. Neuropharmacology，2011; 60(2-3) :423-431.)，表明ApoTf可在脑内出血后减轻血红蛋白的神经毒性。 本专利技术的专利技术人已经发现，通过将转铁蛋白与其他铁螯合剂或与另一种铁结合血 浆蛋白诸如脱铁乳铁蛋白（Apolactoferrin)组合，提高转铁蛋白施用在患者中的神经保 护特性是可能的，所述脱铁乳铁蛋白已显示增加了一些组织中的HIF-?α蛋白水平并对血 浆 ΕΡ0 水平有影响（Zakharova E.T.等人 Biometals (2012) 25:1247-1259)。已表明具有铁 螯合能力的分子是通过阻断脯氨酰羟化酶的活性的HIF通路活化剂。 因此，本专利技术涉及治疗缺氧诱导因子（HIF)相关的状况的方法，所述方法包括施 用包含转铁蛋白的组合物。本专利技术还涉及治疗缺氧诱导因子（HIF)相关的状况的方法，其 中施用的组合物还包含转铁蛋白和铁螯合剂的组合。 如本文所用的，术语"转铁蛋白"及其复数是指单独ApoTf、或单独HoloTf或其混 合物。 附图简述 参考以下附图进一步描述本专利技术，其中： 图 1 不出了多数ApoTf (majority ApoTf)和多数HoloTf (majority HoloTf)的组 合物在常氧和低氧条件下处理6小时后诱导HIF-1 α蛋白。 图2示出了多数ApoTf和多数HoloTf的组合物在常氧条件下处理24小时后诱导 HIF-la 蛋白。 图3示出了 ApoTf和HoloTf的混合物处理后6小时诱导HIF-1 a蛋白。 图4A示出了在常氧和低氧条件下在HSA、脱铁转铁蛋白或饱和铁转铁蛋白的存在 下Glutl的mRNA表达水平。 图4B示出了在常氧和低氧条件下在HSA、脱铁转铁蛋白或饱和铁转铁蛋白的存在 下VEGF的mRNA表达水平。 图5A示出了包含多数HoloTf或多数ApoTf的组合物的体外（in vitro)或体内 (in vivo)毒性。 图5B示出了用包含多数ApoTf或HoloTf的药物静脉注射处理的大鼠的改良的 Bederson和一般行为评分。 图6A示出了短暂性大脑中动脉闭塞（MCAo)大鼠模型中ApoTf (385mg/kg，IV)或 盐水处理的梗塞体积的散点图。 图6B示出了来自代表性对照和ApoTf处理的大鼠的氯化三苯基四氮唑（TTC)染 色的冠状缝切面。 图7示出了主要包含ApoTf和HoloTf的混合物保护神经元细胞免受Abeta (1-42) 的毒性效应。 图8A示出了用4mg/ml多数ApoTf及用多数ApoTf和DF0或10X2的组合处理 SH-SY5Y神经元细胞。 图8B示出了用4mg/ml所示蛋白及用所示蛋白和10uM M30的组合处理SH-SY5Y 神经元细胞。 图8C示出了用4mg/ml所示蛋白及用所示蛋白和200uM DF0的组合处理SH-SY5Y 神经元细胞。 图9A不出了 Glutl响应多数脱铁转铁蛋白（majority Apotransferrin)与DF0 或10X2组合的mRNA表达水平。 图9B示出了 VEGF响应多数脱铁转铁蛋白与DF0或10X2组合的mRNA表达水平。 图10A示出了在正常氧气水平下用4mg/mL多数脱铁转铁蛋白、多数饱和铁转铁 蛋白（majority Holo-transferrin)或每一种的多种混合物处理原代人肾近端小管上皮 (RPTEC)细胞6小时后的HIF-1 α水平。 图10Β示出了在正常氧气水平下用4mg/mL多数脱铁转铁蛋白、多数饱和铁转铁蛋 白或每个的多种混合物处理原代皮质上皮（HRCE)细胞6小时后的HIF-la水平。 图11A示出了当用多数ApoTf或DF0处理48小时时，原代人肾近端小管上皮 (RPTEC)或皮质上皮（HRCE)细胞的存活力（viability)。 图11B示出了当用4mg/mL多数ApoTf、多数HoloTf、转铁蛋白的混合物处理72小 时时，RPTEC或HRCE细胞的存活力。 图12示出了在多数ApoTf或DF0的存在下人原代肾细胞内的半胱天冬酶3/7活 化。 图13A示出了在正常氧气水平下用4mg/mL多数脱铁转铁蛋白、多数饱和铁转铁蛋 白或pd-转铁蛋白（pd-Transferrin)处理肺细胞系NCI-H16506小时后的HIF-la水平。 图13B示出了在正常氧气水平下用4mg/mL多数脱铁转铁蛋白、多数饱和铁转铁蛋 白或pd-转铁蛋白处理原代肝细胞6小时后的HIF-1 a水平。 图14A示出了当用4mg/mL的多数ApoTf、多数HoloTf、或pd-转铁蛋白处理72小 时时，人肺细胞系NCI-H1650的存活力。 图14B示出了当用4mg/mL的多数ApoTf、多数HoloTf、或pd-转铁蛋白处理72小 时时，原代人肝细胞的存活力。【具体实施方式】 在一方面，本专利技术涉及治疗缺氧诱导因子（HIF)相关的状况的方法，所述方法包 括施用包含转铁蛋白的组合物。优选地，转铁蛋白是重组体、源自血衆的（plasmaderived) 或化学合成的转铁蛋白。 当转铁蛋白是重组体时，其可根据蛋白表达、产生和纯化的领域中已知的任何 技术来获得。例如，可将转铁蛋白的核酸序列插入适合于在选择的宿主细胞中表达的 任何载体，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗HIF相关的病理学状况的方法，所述方法包括：a.在需要其的患者中诊断HIF相关的病理学状况，和b.向所述患者施用包含治疗有效量的转铁蛋白的组合物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·A·罗斯，拉尔夫·克里斯蒂安·克鲁姆林，
申请(专利权)人：基立福环球运营有限公司，
类型：发明
国别省市：爱尔兰;IE