一种虎舌红三萜皂苷对照品的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种虎舌红三萜皂苷对照品的制备方法，包括如下步骤：(1)虎舌红药材的提取；(2)大孔吸附树脂柱分离；(3)硅胶柱层析；(4)制备型高效液相色谱分离纯化，最终得到西克拉敏A3-O-α-鼠李吡喃糖-(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖-(1→4)-[β-D-葡萄吡喃糖-(1→2)-]-α-L-阿拉伯吡喃糖苷。采用薄层色谱多个展开系统及显色方法检查该对照品，均为一个色谱斑点，进一步采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)检查，其目标峰用峰面积归一化法计算，质量浓度大于98％；变换不同色谱柱及多个流动相系统，测定结果均一致。说明制备的虎舌红素B符合中药定量分析用化学对照品的要求。本制备方法提取溶剂安全无毒，成品收率较高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，设及一种中药有效成分化学对照品的制备，具体设及 一种虎舌红=祗皂巧对照品的制备方法。
技术介绍
虎舌红为紫金牛科紫金牛属植物虎舌红ArdisiamamillataHance的干燥全草， 既是著名的观赏植物，又是我国民间常用草药，具有清热利湿、平肝解郁、活血化渺的功效， 其药用价值早在《本草纲目》中就有记载，对治疗肝炎、风湿、小儿巧积等有奇效。其主要有 效成分是其中的一种S祗皂巧一一西克拉敏A3-0-a-鼠李化喃糖-(1 一 2)-P-D-葡萄化 喃糖-(1 一 4) - -aA-阿拉伯化喃糖巧（简称虎舌红素B)， 运是存在于紫金牛科紫金牛属植物虎舌红（ArdisiamamillataHance)、朱砂根（Ardisia brevicaulisDiels)、百两金（ArdisiaCrispa(Humt). )A.DC.)等多种植物中的有效成分， 现代药理研究表明该活性成分具有细胞毒活性和抗肿瘤、抗炎等药理作用。在深入研究开 发该活性成分的过程中，需要进行制剂工艺、内在质量、稳定性等一系列药学研究工作，都 需要相应对照品进行支撑。但目前未见虎舌红素B对照品的制备方法，为深入探讨本品的 成药性及药理活性，我们从虎舌红中提取分离得到运种虎舌红=祗皂巧单体，并按照对照 品研究技术指导原则进行了纯化及结构鉴定。为深入研究上述含虎舌红素B活性成分药材 及制剂的内在质量提供对照物质，也为进一步的新药开发提供参考。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中的不足，提供一种西克拉敏A 3-0-a -鼠李化喃 糖-(1一2) - 0 -D-葡萄化喃糖-(1一4) -- a A-阿拉伯化 喃糖巧对照品的制备方法。 本案专利技术人通过对虎舌红化学成分进行文献查阅和实验研究，专利技术了虎舌红药材 回流提取、大孔吸附树脂和硅胶柱层析分离纯化，高效液相色谱制备西克拉敏A3-0-a-鼠 李化喃糖-(1一2) - 0 -D-葡萄化喃糖-(1一4) -- a A-阿 拉伯化喃糖巧对照品的方法，经薄层色谱多个展开及显色系统分离均显示一个斑点，采用 HPLC-ELSD峰面积归一化法计算，其质量浓度大于98%，符合中药定量分析用化学对照品 纯度的质量要求，因而完成了本专利技术。 本专利技术提供了一种西克拉敏A3-0-a-鼠李化喃糖-(1 一 2)-e-D-葡萄化喃 糖-(1 一 4) - [ 0-D-葡萄化喃糖-(1 一。-aA-阿拉伯化喃糖巧对照品的制备方法，主 要包括W下步骤： 1)取虎舌红药材，粉碎过10目筛，加50%~90%的乙醇回流提取，滤过，提取液减 压回收醇得提取液； 2)将提取液上大孔吸附树脂柱，水洗至洗脱液近无色，弃去洗脱液；用30%乙醇 洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；用80 %乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压浓 缩干燥得浸膏； 3)将2)的浸膏与等量硅胶拌样，干燥、研细后均匀倒入装好的硅胶柱上端，缓缓 加入流动相，W适宜的流速进行洗脱，收集富含虎舌红素B的流份，浓缩，甲醇重结晶，即得 虎舌红素B提取物。 4)将3)得到的虎舌红素B提取物用制备高效液相色谱分离纯化。色谱条件： W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水或乙腊-水为流动相，检测波长205nm， 收集目标峰并浓缩干燥得西克拉敏A3-0-a-鼠李化喃糖-(1 一 2)-0-D-葡萄化喃 糖-(1 一 4)--aA-阿拉伯化喃糖巧。 根据前述的制备方法，其中，所述的回流提取溶剂浓度为60%乙醇。 根据前述的制备方法，其中，所述的大孔吸附树脂为非极性或弱极性大孔吸附树 月旨，经过0101、0141、0140^种型号的比较，优选为0141。 根据前述的制备方法，其中，所述的硅胶柱洗脱剂为乙酸乙醋：甲醇化：4~ 8 : 2)和氯仿：甲醇：水（10 : 5 : 0.5)，考虑安全性，优选为前者。 根据前述的制备方法，其中，所述的HPLC的流动相中甲醇与水的体积比为 62 : 38~72 : 28;乙腊与水的体积比为30 : 70~40 : 60,优选甲醇-水的体积比为 60 : 40,乙腊-水的体积比为35 : 65,考虑安全性，优选甲醇-水系统为HPLC制备用流动 相。 本专利技术制备的虎舌红素B经高分辨质谱（HR-FAB-M巧给出精确分子量为1074， 其碳、氨核磁共振信号根据gCOSY，HMQC，HMBC所显示的相关关系得到了归属，结构鉴定为 西克拉敏A3-0-a-鼠李化喃糖-(1 一 2)-P-D-葡萄化喃糖-(1 一 4)--aA-阿拉伯化喃糖巧。 本专利技术制备的虎舌红素B经高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD)纯度 检查，不同色谱柱和流动相测定结果均为一个色谱峰，WHPLC-ELSD峰面积归一化法测定， 其质量分数均大于98%，符合含量测定用中药化学对照品的要求。 而且本专利技术药材提取完全，所需有机溶剂少，溶剂无毒无污染。【附图说明】 图1为西克拉敏A3-0-a-鼠李化喃糖-(1 一-D-葡萄化喃 糖-(1 一 4)--aA-阿拉伯化喃糖巧的HPLC-UV制备色谱 图 阳0化]图2为西克拉敏A3-0-a-鼠李化喃糖-(1 一-D-葡萄化喃 糖-(1 一 4)--aA-阿拉伯化喃糖巧的HPLC-ELSD纯度检 测色谱图【具体实施方式】 W下通过具体实施例对本专利技术作进一步说明，但不限制本专利技术，依据现有技术，本 专利技术的实施方式并不限于具体实施例。 仪器、试药与样品 高效液相色谱仪（美国安捷伦1100系列），包括在线真空脱气机（G1322A)， 四元梯度累（G1311A)，自动进样器（G1313A)，柱溫箱（G1316A)，DAD检测器（G1314A)， 化emstation色谱工作站；AlltechELSD2000型蒸发光散射检测器；制备型高效液相色 谱仪（美国贝克曼库尔特邸CHMAN125P型），包含SYSTEMGOLD125PSolventModule 和 16化Detector等；MiIIi-Q超纯水器（美国Milipore公司）！Microfuge18 台式 离屯、机（美国贝克曼库尔特有限公司）；KQ-500DE超声清洗机（昆山市超声仪器有 限公司，功率300W，频率40曲Z)巧P-210D型电子分析天平（德国赛多利斯，十万分之 一）；过滤装置（Autoscience)及微孔滤膜化45Jim)。分析色谱柱：WatersSymmetiT Cis(150mmX4. 5mm，5ym)；PhenomenexGeminiQs(150mmX4. 5mm，5ym)；AlltechAltimma Cis(250mmX4. 5mm，5]im);制备色谱柱：BECKMANULTRAPREPC18(21.ImmX150mm，10ym); 保护挂袖enomnexCis。 阳0巧实施例I I.对照品的制备 1)取虎舌红药材，粉碎过10目筛，加10倍量的80%的乙醇回流提取2小时，重复 提取3次，滤过，合并滤液并减压回收乙醇得虎舌红提取物；[00对。将提取液上D141大孔吸附树脂柱，水洗至洗脱液近无色，弃去洗脱液；用30% 乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；用80 %乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减 压浓缩干燥得虎舌红浸膏； 3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种虎舌红素B——西克拉敏A 3‑O‑α‑鼠李吡喃糖‑(1→2)‑β‑D‑葡萄吡喃糖‑(1→4)‑[β‑D‑葡萄吡喃糖‑(1→2)‑]‑α‑L‑阿拉伯吡喃糖苷(以下简称虎舌红素B)的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)取虎舌红药材，粉碎过10目筛，加50％～90％的乙醇回流提取，滤过，提取液减压回收醇得提取液；2)将提取液上大孔吸附树脂柱，水洗至洗脱液近无色，弃去洗脱液；用30％乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；用80％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压浓缩干燥得浸膏；3)将2)的浸膏与等量硅胶拌样，干燥、研细后均匀倒入装好的硅胶柱上端，缓缓加入流动相，以适宜的流速进行洗脱，收集富含虎舌红素B的流份，浓缩，甲醇重结晶，即得虎舌红素B提取物。4)将3)得到的虎舌红素B提取物用制备高效液相色谱分离纯化。色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇‑水或乙腈‑水为流动相，检测波长205nm，收集目标峰并浓缩干燥得西克拉敏A 3‑O‑α‑鼠李吡喃糖‑(1→2)‑β‑D‑葡萄吡喃糖‑(1→4)‑[β‑D‑葡萄吡喃糖‑(1→2)‑]‑α‑L‑阿拉伯吡喃糖苷。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：薛永新，薛永江，张琦，李远志，白晓春，刘群，曹晓兰，张承平，
申请(专利权)人：四川恩威制药有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51