一种邻苯二甲酸丁酯的表面等离子体共振快速检测方法技术

本发明专利技术提供了一种邻苯二甲酸丁酯的表面等离子体共振快速检测方法，在金芯片的金膜表面修饰上邻苯二甲酸丁酯DBP单克隆抗体，将修饰后的金芯片置于表面等离子体共振SPR检测仪中，使目标物DBP和高分子竞争物DBP的牛血清白蛋白DBP-BSA的混合液以流动相流过金膜，则目标物DBP与高分子竞争物DBP-BSA竞争结合到金膜表面的抗体上；通过SPR检测仪检测金芯片表面光长的变化；当高分子竞争物DBP-BSA浓度一定时，标物DBP浓度与SPR检测仪检测到的信号呈反比关系，从而间接测定金芯片表面DBP含量。本发明专利技术提供的方法灵敏度高，检测结果准确，检测时间短，工作效率高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于轻纺消费品有毒有害残留量检测领域，涉及采用表面等离子体共振(SPR)技术，尤其涉及一种通过检测样品萃取液中邻苯二甲酸丁酯(DBP)抗体的余量来检测萃取液中DBP含量的一种表面等离子体共振快速检测方法。
技术介绍
邻苯二甲酸丁酯(DBP)是一种运用广泛的邻苯二甲酸酯类增塑剂。在纺织服装和玩具等轻纺消费品中，邻苯二甲酸酯类增塑剂主要用于在聚氯乙烯(PVC)、人造革、涂层、油墨印花和热压贴花产品中，可以有效降低染料粘度，提高涂层弹性。邻苯二甲酸酯在纺织印染助剂中也可用作复配组分，因为它是含酯和苯环结构的非离子化合物，所以亲聚酯纤维，从而通过缓染而达到分散染料染色时的匀染作用，是匀染剂的组分之一，也可作为染色载体，具有增塑作用。出口消费品(纺织服装和玩具)的不断召回和中国台湾食品行业爆发的“起云剂”事件，再次将邻苯二甲酸酯带入大众视野，引起社会的巨大关注。科学研究表明邻苯二甲酸酯类(PAEs)是一种环境内分泌干扰物，具有雌激素效应，它进入人体后与相应的激素受体结合，干扰体内激素正常水平，从而影响生殖、发育。对男性儿童的影响尤为严重。为了降低PAEs对人体的危害风险，欧盟、美国、加拿大、巴西等国家和地区均已出台有关法律法规，对其使用做出了明确的限量要求。目前，国内外对于邻苯二甲酸酯包括DBP的检测方法的研究，主要利用气相色谱、气质联用仪、液相色谱、液相色谱-质谱串联等作为分析手段。因此，建立灵敏、快捷的DBP的SPR检测方法，对于探索SPR技术在消费品残留量检测中的新应用有重要的实践意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种灵敏度高、检测时间短、工作效率高的邻苯二甲酸丁酯的表面等离子体共振快速检测方法。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是提供，其特征在于:在金芯片的金膜表面修饰上邻苯二甲酸丁酯DBP单克隆抗体，将修饰后的金芯片置于表面等离子体共振SPR检测仪中，使目标物DBP和高分子竞争物DBP的牛血清白蛋白DBP-BSA的混合液以流动相流过金膜，则目标物DBP与高分子竞争物DBP-BSA竞争结合到金膜表面的抗体上；通过SPR检测仪检测金芯片表面光长的变化；当高分子竞争物DBP-BSA浓度一定时，目标物DBP浓度越低，SPR检测仪检测到的信号越高；目标物DBP浓度越高，SPR检测仪检测到的信号越低；因此，目标物DBP浓度与SPR检测仪检测到的信号呈反比关系，从而间接测定金芯片表面DBP含量。优选地，具体步骤如下:步骤1:传感金芯片的修饰1.1清洗:将氨水、过氧化氢及去离子水配成溶液，水浴加热至溶液冒气泡，将金芯片放置在此溶液中浸泡，然后取出后立即用去离子水冲洗，再用氮气吹干金芯片表面；1.2自组装双功能分子:清洗好的金芯片用11-巯基十一烷酸乙醇溶液浸没，浸泡过夜；通过Au-S键共价连接自组装双功能分子；将浸泡过夜的金芯片用灭菌水清洗，用N2吹干；1.3双功能分子活化:在金芯片表面先滴加EDC溶液，再滴加NHS溶液，室温静置；1.4修饰单抗:将金芯片水洗吹干，在金芯片表面滴加DBP单克隆抗体溶液，置于十旦温箱中；1.5封闭活性位点:将金芯片取出并水洗吹干，在金芯片表面滴加乙醇胺盐酸盐溶液，室温静置；将金芯片洗净吹干备用，或放置于PBS溶液中贮存；步骤2:DBP标准样品测定2.1基线平衡:将修饰过的金芯片放入表面等离子体共振SPR检测仪，调节仪器温度，通入PBS溶液，调节流速，待SPR检测仪检测出的信号稳定后开始实验；实验在固定角条件下进行；2.2竞争物浓度的确定:通过定量环加载竞争物标准溶液，待达到吸附/解吸附平衡后，通入PBS溶液清洗金芯片，洗去非特异性吸附样品，通过特异性吸附样品的量进行目标物分析；以共振响应单位A RU值为纵坐标，以加入的竞争物标准溶液浓度为横坐标绘制曲线，曲线达到平衡的浓度即为合适的竞争物浓度；其中，竞争物标准溶液为:称取一定量的DBP-BSA，加入PBS溶液定容，配置系列DBP-BSA标准溶液的浓度为:5?70ppm ；2.3标准曲线的建立:通过定量环加载样品标准溶液，待达到吸附/解吸附平衡后，通入PBS溶液清洗金芯片；以共振响应单位ARU值为纵坐标，以加入的样品标准溶液中DBP的浓度为横坐标绘制曲线；其中样品标准溶液为:步骤2.2中所述合适的竞争物浓度的DBP-BSA与x ppm的DBP 混合溶液(X = 5n，n e )；2.4样品测试:按照标准曲线法测试样品标准溶液，根据其ARU值，在标准曲线上读出DBP含量；2.5芯片再生:检测完样品标准溶液，通入甘氨酸-盐酸再生液进行金芯片再生；最后，通入PBS溶液清洗金芯片。 优选地，所述步骤1.2中，11-巯基十一烷酸乙醇溶液浓度为lmmol/L，温度为4°C。优选地，所述步骤1.3中，EDC溶液和NHS溶液均为150 μ L ;室温静置时间为lh。优选地，所述步骤1.4中，DBP单克隆抗体溶液为200 μ L ;置于37 °C恒温箱中3h。优选地，所述步骤1.5中，乙醇胺盐酸盐溶液为200 μ L、lmol/L,室温静置时间为lh ;PBS 溶液为 4°C ο优选地，所述步骤2.1中，调节仪器温度使其低于室温1?2°C，调节PBS溶液流速为 30 μL/min。优选地，所述步骤2.5中，通入pH = 2.2的甘氨酸-盐酸再生液6min进行芯片再生。优选地，所述DBP-BSA为DBP偶联蛋白；所述EDC溶液为0.4mol/L的1_(3_ 二甲氨基丙基)_3_乙基碳二亚胺盐溶液；所述NHS溶液为0.lmol/L的N_羟基琥珀酰亚胺溶液；所述PBS溶液为pH = 7.4的磷酸盐缓冲液。相比现有技术，本专利技术具有如下有益效果:1、采用间接SPR检测方法测定DBP的含量，通过修饰DBP单抗，检测样品溶液中剩余DBP-BSA高分子竞争物的含量来间接测定DBP的浓度，有效提高了灵敏度；检测时间短，一般15min内即可检测出结果，样品用量少；2、通过SPR仪记录，减少了人为判断的主观性，芯片可实现批量修饰，工作效率尚ο【具体实施方式】为使本专利技术更明显易懂，兹以一优选实施例，作详细说明如下。本专利技术提供了，利用带有表面等离子体共振传感器的SPR检测仪，以检测固定角光强的变化，间接测定样品中DBP的含量。主要技术方案是:在金膜表面修饰上DBP单克隆抗体(DBP-6C6)，流过金膜的流动相是目标物DBP和高分子竞争物DBP的牛血清白蛋白(DBP-BSA)的混合液。目标物DBP与加入的高分子竞争物DBP-BSA竞争结合到芯片表面的抗体上，当高分子竞争物DBP-BSA浓度一定时，目标物DBP浓度越低，信号越高；DBP浓度越高，信号越低。因此，目标物DBP浓度与信号呈一定的反比关系。通过SPR检测仪检测溶液中未被结合的DBP-BSA，从而间接测定待测样品中DBP含量。具体操作步骤如下:步骤1:传感芯片的修饰1.1清洗:1份30%的氨水(ΝΗ40Η)和1份30%的过氧化氢(H202)，加入5份的去离子水，水浴加热至溶液轻微冒气泡，此时温度约80?90°C。将金芯片放置在此溶液中浸泡10分钟，取出后立即用去离子水冲洗，再用氮气吹干芯片表面，并尽快开始实验。当使用全新金芯片，可简化为:用去离子水对芯片表面进行清洗，后再用氮气本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种邻苯二甲酸丁酯的表面等离子体共振快速检测方法，其特征在于：在金芯片的金膜表面修饰上邻苯二甲酸丁酯DBP单克隆抗体，将修饰后的金芯片置于表面等离子体共振SPR检测仪中，使目标物DBP和高分子竞争物DBP的牛血清白蛋白DBP‑BSA的混合液以流动相流过金膜，则目标物DBP与高分子竞争物DBP‑BSA竞争结合到金膜表面的抗体上；通过SPR检测仪检测金芯片表面光长的变化；当高分子竞争物DBP‑BSA浓度一定时，目标物DBP浓度与SPR检测仪检测到的信号呈反比关系，从而间接测定金芯片表面DBP含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：魏孟媛，刘芳，孙美蓉，刘敏华，谢秋慧，
申请(专利权)人：上海出入境检验检疫局工业品与原材料检测技术中心，
类型：发明
国别省市：上海;31