本发明专利技术公开了人白介素17A和白介素26联合用于制备治疗轮状病毒感染的药物中的应用及方法，通过先加入重组人IL-17A，抑制轮状病毒复制，而后加入IL-26，进一步清除轮状病毒，从而达到抑制其增殖并保护肠上皮细胞免受更深侵害，为细胞的轮状病毒感染治疗提供了新的思路，也为临床治疗轮状病毒感染奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及人白介素17A和白介素26联合用于制备治疗 轮状病毒感染的药物中的应用，还涉及利用人白介素17A和白介素26体外抑制轮状病毒的 方法。
技术介绍
轮状病毒（Rotavirus，RV)属于呼肠弧病毒科，为无胞膜双链RNA(dsRNA)病毒，11 条dsRNA各缠绕1分子的RNA依赖RNA多聚酶（VP1)和1分子的鸟苷酸及甲基转移酶（VP3) 位于病毒颗粒的核心，编码12种蛋白质，包括6种结构蛋白（VP1~4、6~7)与6种非结 构蛋白（NSP1~6)。VP2构成轮状病毒的内层衣壳包裹病毒基因组；VP6构成的中层衣壳 包绕VP2形成轮状病毒双层衣壳颗粒（DLP) ;VP4和VP7构成的外层衣壳再包绕DLP形成完 整的轮状病毒三层衣壳颗粒（TLP)。轮状病毒在受体的介导下穿过细胞膜进入细胞，脱掉外 层衣壳形成DLP开始复制过程，新生成的病毒dsRNA与蛋白在胞浆中聚集形成病毒质粒，并 在其中组装生成DLP，DLP不具有感染能力，其随后进入内质网，与新合成的VP4和VP7装配 成具有感染能力的TLP并分泌出宿主细胞，完成病毒的复制过程。轮状病毒感染能抑制宿 主细胞蛋白的表达，激活宿主细胞内多种蛋白激酶如PKA、PKB、PKC、PKG以及酪氨酸蛋白激 酶的激活，引起肠上皮细胞连接的破坏、肠粘膜通透性增加。轮状病毒感染是导致婴幼儿腹 泻的主要病因，每年引起约1.25亿例儿童胃肠炎，仅我国每年就大约有千万婴幼儿患轮状 病毒感染性胃肠炎。 辅助性T细胞17 (Thl7)是CD4+的免疫细胞亚群，与多种感染性疾病和炎症性疾 病密切相关，Thl7细胞可通过分泌人白介素17A(IL-17A)、人白介素17F(IL-17F)及白介素 26 (IL-26)等细胞因子抵抗外来感染和促进炎症的发生，Thl7细胞对轮状病毒感染也有一 定的防御作用。但是在轮状病毒感染的前期，适应性免疫细胞群未能及时发挥功能，Thl7细 胞不能有效启动，致使病毒在肠道上皮细胞内大量增殖，所以即使有预防性疫苗，每年仍有 大量患儿遭受轮状病毒感染之痛，感染后的有效治疗显得尤为重要。 因此，急需一种能够快速高效抑制轮状病毒感染的方法，为临床治疗轮状病毒感 染奠定基础。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供白介素17A和白介素26联合用于制备治疗 轮状病毒感染的药物中的应用；本专利技术的目的之二在于提供白介素17A和白介素26联合用 于制备抑制轮状病毒复制的药物中的应用；本专利技术的目的之三在于提供利用白介素17A和 白介素26体外抑制治疗轮状病毒复制的方法。 为实现上述专利技术目的，经大量研究，本专利技术提供如下技术方案： 1、白介素17A和白介素26联合用于制备治疗轮状病毒感染的药物中的应用。 优选的，所述白介素17A为重组人白介素17A，所述白介素26为重组人白介素26。 更优选的，所述白介素17A的浓度为1. 5-2ng/ml，所述白介素26的浓度为10-20ng/ml。 2、白介素17A和白介素26联合用于制备抑制轮状病毒复制的药物中的应用。 优选的，所述白介素17A为重组人白介素17A，所述白介素26为重组人白介素26。 更优选的，所述白介素17A的浓度为1. 5-2ng/ml，所述白介素26的浓度为10-20ng/ml。 3、利用白介素17A和白介素26体外抑制治疗轮状病毒复制的方法，包括以下步 骤： A.将液氮中冻存的Caco-2细胞取出后置入37°C水浴中使其融化，然后将Caco-2 细胞转入DMEM培养基中，混匀，然后在1200rpm/分钟条件下离心10分钟；弃上清，再加入 含10% (v/v)胎牛血清的DMEM高糖培养基，混匀，然后将细胞转入培养瓶中，于37°C、C02体积分数为5%的培养箱中贴壁培养12小时； B.倒掉瓶内培养液，用DMEM培养液清洗细胞2-3次，然后吸除残余液体，在培养瓶 中加入猪胰蛋白酶至质量分数为〇. 25%，于37°C培养箱中消化5-10分钟，再加入含体积分 数为5 % FBS的DMEM培养基，轻轻吹打使团块细胞分散均匀，然后于1200rpm/分钟条件下 离心10分钟，再加入DMEM完全培养基；接着按照1 X 105/孔的密度将细胞接种到24孔板 中，于37°C、体积分数为5%的C02培养箱中贴壁培养12小时，再按IX 10 7/孔的浓度将轮 状病毒接种到细胞中，继续培养24小时； C.倒掉旧培养基，加入新鲜的含体积分数10% FBS的DMEM高糖培养基，然后加入 1. 5~2ng/ml的白介素17A，于37°C、体积分数为5%的C02培养箱中培养12小时；然后再 在培养基中加入浓度为10~20ng/ml的白介素26继续培养24小时，即可。 优选的，所述白介素17A为重组人白介素17A，所述白介素26为重组人白介素26。 本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了白介素17A和白介素26联合用于制备治疗 轮状病毒感染的药物的新用途，通过合理利用抗轮状病毒的细胞因子（IL-17、IL-26)抑制 其在细胞内复制，即当细胞被轮状病毒感染后，通过先加入重组人IL-17A，抑制轮状病毒复 制，而后加入IL-26,进一步清除轮状病毒。从而达到抑制其增殖并保护肠上皮细胞免受更 深侵害。为细胞的轮状病毒感染治疗提供了新的思路，也为临床治疗轮状病毒感染奠定了 基础。【附图说明】 为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图： 图1为CCK-8鉴定不同实验组Caco-2细胞活性。 图2为RT-PCR检测不同实验组Caco-2细胞内轮状病毒的DNA数量。【具体实施方式】 下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体 条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。 本专利技术中重组人IL-17A、IL-26均购自英国abcame公司（货号分别为：abl94179、 abl63231) ;CCK-8购自日本Dojindo公司（货号：CK04)，DMEM高糖培养基购自美国Thermo Fisher 公司（货号：11%5_118);荧光定量检测试剂盒 SYBR GREEN Realtime PCR Master Mix购自日本TOYOBO公司（货号为：FSQ-101)。 实施例1 利用白介素17A和白介素26体外抑制治疗轮状病毒复制的方法，具体步骤如下： A.从液氮罐中取出Caco-2细胞（人结直肠腺癌细胞株）冻存管，立即置入37°C 水浴中，不时摇动，1分钟内使其融化；将冻存管表面擦拭干净，酒精消毒后在超净工作台 上进行后续操作；将冻存管中的细胞转入装有5ml DMEM培养基的10ml离心管中，玻璃滴管 混匀；将装有Caco-2细胞的10ml离心管置于水平离心机中，1200rpm/分钟，离心10分钟； 弃上清，加入5ml DMEM高糖（含体积分数为10 %的胎牛血清）完全培养基，玻璃滴管混匀， 将细胞转入50ml细胞培养瓶中；37°C、体积分数为5%的C02培养箱中贴壁培养12小时； B.倒掉瓶内培养液，用1ml DMEM培养液清洗细胞，清洗3次，然后玻璃滴管吸除 残余液体；在培养瓶中加入猪胰蛋白酶至质量分数为〇. 25% (10 本文档来自技高网...
【技术保护点】
白介素17A和白介素26联合用于制备治疗轮状病毒感染的药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：申子刚，田志强，张记，吴玉章，倪兵，刘耀，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：重庆;85
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