双靶点抗HIV糖肽化合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种双靶点抗HIV糖肽化合物及其应用。该抗HIV糖肽化合物，为甘露寡糖或末端含岩藻糖的寡糖修饰的T20化合物。本发明专利技术提供的M1-T20或M3-T20或M5-T20或Lex-T20所示抗HIV药物的定点糖基化修饰物，是一种双靶点药物，能够延长药物在动物体内的血浆半衰期，增强对HIV病毒的抑制作用，具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
双靶点抗HIV糖肽化合物及其应用
本专利技术属于药物领域，涉及一种双靶点抗HIV糖肽化合物及其应用。
技术介绍
自1981年首次被发现以来，艾滋病的防治一直没有得到有效解决。艾滋病由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起，其极高的致死率，给人类生命健康安全造成极大威胁。目前在全球范围内已经呈现出了爆发性流行的趋势，据我国卫生部统计，截至2011年底，估计中国存活艾滋病病毒感染者和艾滋病病人(PLHIV)已达到78万人(62～94万人)。由于该病毒的高突变率，目前尚未寻找到有效的防治疫苗。作为全球首个侵入抑制剂，T20(又名enfuvirtide(恩夫韦肽)，商品名Fuzeon)于2003年由美国FDA批准上市，也是迄今为止市场上惟一的侵入抑制剂类药物。T20是由瑞士Roche和美国Trimeris公司共同研制的、由36个氨基酸的组成的多肽，与传统的针对病毒逆转录酶、整合酶、蛋白酶等的一些小分子酶抑制剂相比，T20具有全新的作用机制，该多肽药物可特异性结合HIV囊膜上的融合蛋白gp41从而抑制病毒进入宿主细胞。T20有很多优点，如能够产生较好的疗效，具有很强的对抗突变株的能力，且无毒副作用，可与经典的抗HIV病毒药物联合使用，自2003年上市至今已在艾滋病治疗中占有不可替代的位置。但T20同时也具有同其他多肽类药物一样的缺陷，如水溶性差、免疫原性高、易被蛋白酶降解和被肾脏清除等。T20注射后很快会被患者体内血浆蛋白酶降解，患者通常需要1天多于2次的注射治疗，频繁的注射增加了患者身体上的痛苦。在美国注射T20一年要花费两万美元，在欧洲一年要花费两万五千美元，昂贵的药费使得T20的应用受到极大限制。因此，获得活性增强，半衰期延长的HIV入侵抑制剂对于艾滋病的治疗具有非常重要的意义。但是一种全新药物的发现需付出很长的时间和很高的成本，且成功率较低，而对现有药物进行结构改造和结构修饰是得到新药的一个重要途径，这一途径成功率高，还可一定程度上改善药物的性质，提高药效，同时达到对原始药物优化的目的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种双靶点抗HIV糖肽化合物及其应用。本专利技术提供的抗HIV糖肽化合物，为甘露寡糖或末端含岩藻糖的寡糖修饰的T20化合物.所述修饰具体可为在T20的N端引入含有巯基的半胱氨酸残基，所述甘露寡糖或末端含岩藻糖的寡糖上末端的马来酰亚胺基团与所述半胱氨酸上的巯基发生Michael加成反应形成碳硫单键。具体的，所述末端含岩藻糖的寡糖为Lewis寡糖，更具体为LewisX、LewisY、Lewisa或Lewisb。所述甘露寡糖或末端含岩藻糖的寡糖修饰的T20化合物具体可为M1-T20或M3-T20或M5-T20或Lex-T20所示化合物：另外，上述本专利技术提供的M1-T20或M3-T20或M5-T20或Lex-T20所示化合物在制备抗HIV病毒药物中的应用及以所述M1-T20或M3-T20或M5-T20或Lex-T20所示化合物为活性成分的抗HIV病毒药物，也属于本专利技术的保护范围。其中，所述HIV病毒具体为HIV-1SF33型病毒。本专利技术提供了一种抗HIV药物的定点糖基化修饰物及其应用。其中所指抗HIV药物为多肽T20，其氨基酸序列为Tyr-Thr-Ser-Leu-Ile-His-Ser-Leu-Ile-Glu-Glu-Ser-Gln-Asn-Gln-Gln-Glu-Lys-Asn-Glu-Gln-Glu-Leu-Leu-Glu-Leu-Asp-Lys-Trp-Ala-Ser-Leu-Trp-Asn-Trp-Phe。所述糖基化修饰中的糖基是指甘露寡糖或者末端含岩藻糖的LewisX寡糖，且寡糖末端含马来酰亚胺基团，具体的修饰方法是指通过化学合成或定点突变的方法，向所述的多肽N端引入含有巯基的半胱氨酸残基，得到的修饰肽序列2为Cys-Tyr-Thr-Ser-Leu-Ile-His-Ser-Leu-Ile-Glu-Glu-Ser-Gln-Asn-Gln-Gln-Glu-Lys-Asn-Glu-Gln-Glu-Leu-Leu-Glu-Leu-Asp-Lys-Trp-Ala-Ser-Leu-Trp-Asn-Trp-Phe。其中序列2中的cysteine中所含的巯基可与糖链末端马来酰亚胺进行Michael加成反应，由此方法将糖链导入多肽，获得糖基化多肽制剂。本专利技术提供的M1-T20或M3-T20或M5-T20或Lex-T20所示抗HIV药物的定点糖基化修饰物，是一种双靶点抗HIV药物，能够延长药物在动物体内的血浆半衰期，增强对HIV病毒的抑制作用，具有重要的应用价值。HIV对T细胞的感染，是由树突细胞呈递的。树突细胞表面的蛋白DC-SIGN(Dendriticcell-specificintercellularadhesionmolecule-3grabbingnonintegrin，DC细胞特异性细胞间黏附分子-3捕获非整合素)可结合病毒囊膜蛋白gp120表面的甘露糖或末端含有岩藻糖的寡糖，继而树突细胞内吞、保存并转运病毒至T细胞，完成对病毒的呈递作用。本专利技术将依据该过程对T20进行修饰，选用可与DC-SIGN特异性结合的寡糖(甘露寡糖或者末端含有岩藻糖的寡糖)修饰T20，得到的糖肽可通过糖基部分与病毒竞争性结合DC-SIGN，抑制树突细胞对病毒的内吞和呈递，同时，多肽部分可结合HIV囊膜上的融合蛋白gp41从而抑制病毒进入宿主细胞。这种双靶点药物可有效提高药物的活性，有望解决T20的耐药问题。附图说明图1为M1-T20、M3-T20、M5-T20和Lex-T20的ESI质谱图。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到，以下未特别说明的化合物都是可商购或可参照文献制备的物质。1HNMR由BrukerARX400在CDCl3或D2O中测得，以四甲基硅为内标。质谱采用VGPLATFORM质谱仪，用ESI或MALDI-TOF技术进样。薄层色谱(TLC)由HF254硅胶板上用30％(V/V)的硫酸甲醇溶液或紫外(UV)检测器检测。柱色谱采用100～200目的硅胶，用乙酸乙酯-石油醚(60～90℃)或甲醇-乙酸乙酯作为淋洗液，溶液在小于60℃时减压蒸馏。下述实施例中如无特殊说明，所述液体与液体的比值为体积与体积比；所述固体与液体的比值为物质的量与体积比，所述物质的量以mmol计，所述体积以ml计；所述固体与固体的比值为质量与质量比。下述实施例中如无特殊说明，所述室温反应具体为将反应温度控制在20-30℃范围内，包括20℃和30℃。下述实施例中如无特殊说明，所述收率的计算方法为：(产物物质的量/原料物质的量)*100％(若有两种以上的原料，则选择物质的量较少的原料作为标准)。实施例1、甘露五糖的合成称量化合物1(按照文献J.Carbohydr.Chem.,2006,25,491-498制备，3.67mmol)于100ml反应瓶中，加入10ml的二氯甲烷溶剂，并加入40ml的MeOH溶剂溶解原料，40℃油浴加热，加入过量AcCl进行选择性脱保护反应，浓缩反应液，过硅胶柱进行分离纯化，得到化合物2，收率85％。1HNMR(500MHz本文档来自技高网...

【技术保护点】
甘露寡糖或末端含岩藻糖的寡糖修饰的T20化合物。

【技术特征摘要】
1.甘露寡糖或末端含岩藻糖的寡糖修饰的T20化合物；所述修饰为在T20的N端引入含有巯基的半胱氨酸残基，所述甘露寡糖或末端含岩藻糖的寡糖上末端的马来酰亚胺基团与所述半胱氨酸上的巯基发生Michael加成反应形成碳硫单键。2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述末端含岩藻糖的寡糖为Lewis寡糖。3.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于：所述Lewis寡糖为LewisX、LewisY、Lewisa或Lewisb。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：李学兵，程水红，王彦，马丽英，邵一鸣，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：北京;11