本发明专利技术为亚硝酸钠胶体金检测卡。主要用于快速检测食品中亚硝酸钠的含量，该方法在试纸的背衬上依次粘贴有样液吸收部分、胶体金标记部分、检测反应部分及吸水部分。检测反应部分上面包被有检测用抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG1条作为参照线。该快速检测试纸条特异性强，能够半定量检测，环境温度为4-35℃都可以使用，适合于个体养殖户、食品卫生质检部门、海关等动物源食品进行亚硝酸钠残留的快速检测。本发明专利技术具有特异性强、灵敏性高、能够实现半定量检测，且操作简单方便等有益效果。
【技术实现步骤摘要】
属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害残留物的检测方法，特别是亚硝酸钠试纸检测方法。
技术介绍
亚硝酸钠(英文名:Sodium nitrite)是工业用盐，它是一种白色不透明晶体，形状很像食盐。亚硝酸盐对人体有害，可使血液中的低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，失去运输氧的能力而引起组织缺氧性损害。亚硝酸盐不仅是致癌物质，而且摄入0.2-0.5g即可引起食物中毒，3g可致死。而亚硝酸盐是食品添加剂的一种，起着色、防腐作用，广泛用于熟肉类、灌肠类和罐头等动物性食品。鉴于亚硝酸盐对肉类腌制具有多种有益的功能，现在世界各国仍允许用它来腌制肉类，但用量严加限制。世界食品卫生科学委员会1992年发布的人体安全摄入亚硝酸钠的标准为0?0.1mg / kg体重；若换算成亚硝酸盐，其标准为0?4.2 mg /60千克体重，按此标准使用和食用，对人体不会造成危害。亚硝酸钠有毒，过量食入的毒副作用是麻痹血管运动中枢、呼吸中枢及周围血管，形成高铁血红蛋白。急性中毒表现为全身无力、头痛、头晕、恶心、呕吐、腹泻、胸部紧迫感以及呼吸困难；检查见皮肤粘膜明显紫绀。严重者血压下降，昏迷、死亡。按GB1907国标生产作为食品添加剂，按GB2760规定量添加，肉食中最大使用量是0.15g/kg,肉食中亚硝酸钠残留量在罐头中不得超过0.05g/kg ;肉制品不得超过0.03g/kg ο
技术实现思路
本专利技术目的在于提供快速检测出食品中亚硝酸钠的残留。本专利技术的技术方案是亚硝酸钠的检测卡及其检测样品的处理方法。亚硝酸钠的检测卡是在长条扁平薄壳状的检测卡外壳内设置检测条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔，其特征在于测试条是由支承背板上粘贴四种原件组成:支承背板中部粘贴硝酸纤维素膜，支承背板一端上粘贴吸水纸，另一端粘贴样品垫，吸水纸内端与硝酸纤维素膜搭接，样品垫与硝酸纤维素膜之间则有一段金标垫，由金标垫将样品垫与硝酸纤维素膜连接在一起。金标垫中是含有第二种属蛋白和亚硝酸钠抗体的混合物，硝酸纤维素膜上横向有2条间隔开的显色印记带，一条是含亚硝酸钠蛋白质偶联物的检测带，另一条是第二种属动物蛋白的IgG (常用的为抗兔抗体或抗鼠抗体)；测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。样品处理方法是:称取试样2±0.05 g于50 mL的离心管中，加入10 mL超纯水，在1800 r/min条件下用高速组织粉碎机打碎(约1 min),取粘稠液加50%三氯乙酸2 mL和二氯甲烧10 mL,在回旋式振荡器上高速振摇30 min。然后在4°C 5000 rpm条件下离心30 min，取上清10 mL，加二氯甲烷2 mL，在回旋加速器上振荡混合20 min，再在4°C 12000rpm条件下离心30 min,上清液即为药物的抽提液。本专利技术的优点是能快速检测出样品中含有的亚硝酸钠，且节省检测成本，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。【附图说明】图1是亚硝酸钠检测卡外壳及检测试纸条在外壳内的安置图。图2是亚硝酸钠检测卡检测试纸条结构示意图。图3是检测试纸条硝酸纤维素膜上显示印迹带示意图。【具体实施方式】1.标记胶体金的制备 胶体金溶液的制备:先将1 g氯金酸(HAuC14)粉末溶于100 mL超纯水配置成1%的氯金酸溶液；再取1 L超纯水于特质电炉上加热，至沸腾后加入10 mL 1%的柠檬酸三钠水溶液，沸腾后继续加热，5分钟后加10 mL 1%的氯金酸溶液，再次加热至沸腾，等待颜色变为酒红色后开始计时，10分钟后停止加热，取下后自然冷却、定容至1 L，即为胶体金溶液。抗体标记:确定抗体所需的0.1 mol/1 K2C03的比例，取100 mL胶体金溶液，加入此比例0.1 mol/L的K2C03，混匀(约5 min),再将亚硝酸钠和第二种属动物蛋白分别用PBS(0.01 mol/L,pH7.4)溶解稀释至2 mg/mL,加入2 mL 2 mg/mL的亚硝酸钠抗体(或2 mL 2mg/mL第二种属动物蛋白),混勻(5 min),最后加入10% BSA 2 mL,混勻(5 min)。离心三次留沉淀，此三次收集的沉淀即为金标亚硝酸钠抗体。胶体金标记部分处理:将亚硝酸钠抗体稀释后，按一定比例将载体(如玻璃纤维、聚酯膜等)浸透，铺均匀，取出放于37 °C恒温烘箱烘制8-12 h，干燥后即作为胶体金标记部分。2.免疫层析专用高分子复合膜制备 首先用一种硝酸纤维素膜制成透明背衬膜，在背衬膜上覆盖一层对蛋白质结合力强，浸润性能好的具有一定孔径的层析膜。背衬膜的作用是阻止粘合剂中的有机溶剂对层析膜上蛋白质的破坏。3.层析膜的点样方法 将一定浓度的甜蜜抗原(亚硝酸钠与载体物质形成的偶合物)精确定量；以一定间距(5mm)呈横条状点定于层析膜上，供检测用。亚硝酸钠检测卡是在检测卡外壳1中设置检测试纸条2，检测卡外壳1的结构及检测试纸条2的设置见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70 _，宽20 _，厚5mm，薄壳壁厚1 mm，由工程塑料制成，检测卡外壳1由上盖和下盖两半联接而成，在检测卡外壳1上盖上有检测窗孔3和加样孔4。检测试纸条2放置在检测卡外壳1的下盖内。检测试纸条2是多层结构的窄条薄片，片长60 mm,片宽约4 mm,厚度小于2.5 mm。检测试纸条2是多层结构:底层是支承背板5,为聚乙烯薄片,厚度约0.5 mm,长60 mm,宽4mm ;支承背板5中部粘贴硝酸纤维素膜6,硝酸纤维素膜厚0.5 mm,长20 mm,宽4 mm。硝酸纤维素膜6上有两条间隔开的横向显示印迹带，参见附图3，两条显示印迹中，一条是检测线10，含亚硝酸钠偶联物，另一条是参照线11，含第二种属动物蛋白的IgG。支承背板5 —端上粘贴吸水纸9，另一端粘贴样品垫8，吸水纸9内端与硝酸纤维素膜6搭接，样品垫8与硝酸纤维素膜6之间则有一段金标垫7，由金标垫7将样品垫8与硝酸纤维素膜6连接在一起，搭接宽度在1-2 mm。样品垫8材料为吸水玻璃纤维或聚酯膜。使用亚硝酸钠胶体金检测卡时，先将待检测的样品液(药物的抽提液稀释后，直接用于检测)从加样孔4中滴入亚硝酸钠检测试纸条2的样品垫8，由于虹作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜7所含的抗亚硝酸钠单克隆抗体胶体金标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-10分钟内观察结果。检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金标记的抗体，在测试线上与含有亚硝酸钠蛋白质偶联物，以及参照线含第二种属动物蛋白的IgG反应，形成棕红色条带。若样品中相应的待测亚硝酸钠高于允许值，样品加入后先与金标垫中的抗体反应，而不会与检测带所带有的亚硝酸钠蛋白质偶联物反应，从而不显色。主要有以下3种检测结果: 1.检测线10和参照线11同时显现棕红色印迹，表示检测结果为阴性，说明被测样品中不含亚硝酸钠或含量低于允许值。2.检测线10不显色，参照线11显现棕红色印迹，表示检测结果为阳性，说明被测样品中亚硝酸钠含量高于允许值。3.检测线10显现棕红色印迹，参照线11不显色，或检测线10和参照线11均不显色，表示检测试纸条失效。【主权项】1.亚硝酸钠胶体金检测卡，其特征在于:在试纸的背衬上依次贴有样液吸收部分、胶体金标记部分、检测反本文档来自技高网...
【技术保护点】
亚硝酸钠胶体金检测卡，其特征在于：在试纸的背衬上依次贴有样液吸收部分、胶体金标记部分、检测反应部分和吸水部分，胶体金标记部分被标记的物质为第二种属动物蛋白和亚硝酸钠抗体的混合物；检测反应部分包被有检测用亚硝酸钠抗原 1 条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG 1条作为参照线。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杜霞，洪霞，吴明慧，
申请(专利权)人：江苏维赛科技生物发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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