脂质灭菌方法技术

本发明专利技术涉及一种磷脂悬浮液的灭菌方法，可用于制备包括磷脂稳定化的全氟丁烷微泡的超声造影剂前体。该方法提供了无菌保证，未将磷脂过度热降解。该方法也适用于工业规模生产。还提供了制备结合本发明专利技术的灭菌方法的试剂盒和超声造影剂的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种磷脂悬浮液的灭菌方法，可用于制备包括磷脂稳定化的全氟丁烷 微泡的超声造影剂前体。该方法提供了无菌保证，未将磷脂过度热降解。该方法也适用于 工业规模生产。还提供了制备结合本专利技术的灭菌方法的试剂盒和超声造影剂的方法。 专利技术背景 基于全氟化碳（例如全氟丙烷或全氟丁烷）的磷脂稳定化微泡的超声造影 剂，在本领域中是公知的〇 WO97/11683公开了磷脂经历水解，并解决了对于在高压灭菌期间稳定这样的细 合物的需求（第6页第1整段）。W0 97/11683教导了使用pH小于或等于9. 5的稳定缓冲 液，以试图阻止磷脂在高压灭菌过程中降解。 W0 97/29782教导了在冷冻干燥稳定剂的存在下，可以通过冻干全氟化碳微泡制 备在室温下稳定的超声造影剂前体，所述冷冻干燥稳定剂选自：蔗糖、麦芽糖、海藻糖、棉子 糖或水苏糖，优选蔗糖。W0 97/29782还教导了在热灭菌过程中可以减少用于稳定这种造影 剂的磷脂酰丝氨酸磷脂的含量。 W0 99/08715公开了一种包含含气囊泡的水分散体的药物组合物的制备方法，其 中膜包含两亲性成膜材料，所述方法包括： (i)由包含两亲性成膜材料的混合物生成含气囊泡的分散液； (ii)冻干含所述含气囊泡的分散液； (iii)用无菌含水液体重构步骤（ii)的冻干产物，以产生含气囊泡的水分散体； 和 (iv)处理步骤⑴或步骤（iii)的水分散体产物或步骤（ii)的冻干产物，以产生 基本上无聚集无菌的含气囊泡的水分散体。 EP1228770A1教导了一种制备包含气体微泡的冻干超声造影剂的方法，其中冻干 前体小瓶在减压的顶部空间气体下密封。所述减压被认为有助于控制前体小瓶的重构后形 成的水性微泡组合物的粒径。 Feshitan等人报道，与表面活性剂 包覆的微泡相比，脂质包覆的微泡在离心之后是稳定的，且该脂质外壳是高粘性的，并且相 对不透气。Feshitan等人报道了尺寸范围4-5微米的全氟丁烷微泡可以稳定至少2天，但 在2周后就趋于碎裂成更小尺寸的微泡t 对于掺有磷脂的试剂的超声冻干前体制备方法仍存在需要，其对产品的无菌性进 行控制。这种磷脂的灭菌方法需要经得起工业规模生产的检验，并且以满足规范要求（例 如美国药典和ICH指南）的均匀小瓶含量和安全特性产生前体产品。
技术实现思路
预期用于哺乳动物肠胃外给药的磷脂稳定化气体微泡超声造影剂需要以无菌形 式制备。终端灭菌对于这种造影剂不是一种合适的技术，因此需要无菌形式的磷脂悬浮液 以允许无菌生产。工业规模的造影剂生产要求必须将大的体积（多升）灭菌。 本专利技术人发现，氢化卵磷脂酰丝氨酸中磷脂的热降解可以在高压灭菌时发生。因 此，磷脂是热敏的，并且可以在高温下长时间加热时降解。此外，如果在尝试灭菌过程中发 生过多降解，所需的气体微泡的超声特性可受到损害。因而，在实现彻底灭菌而不使磷脂过 度热降解中存在问题。 这一问题在多升规模上加重，因为更大的体积使得更难确保在整个体系中的均匀 热分布一一具有任何局部过热或长时间暴露将导致发生更高水平的磷脂降解的风险。 在通常在夹套式钢制容器中进行的标准高压灭菌过程中，通过使热媒（通常是蒸 汽）通过容器外面的夹套，将热量传递到主体材料，所述夹套与灭菌系统的内部隔离。因 此，这种系统利用显热来传递获得可接受的灭菌所需的能量。然而，在这种情况下，灭菌系 统的端点例如进口、用于排气的无菌过滤器和容器顶盖，在比更接近热源的材料主体在较 晚的时间点接收热量。封闭系统的所有部件必须被灭菌，并且在端点的无菌屏障到达可接 受的最低水平之前，这通常导致材料主体非常高的热负荷（和F。值）。 因此，利用标准的加热方案，总的热负荷和因此磷脂的化学降解可变得难以承受 地高。因此，需要快速且均匀地加热/冷却整个灭菌系统（即包含于无菌屏障之间容积）。 本专利技术提供了这一问题的解决方法。本专利技术的方法包括将蒸汽注入到磷脂悬浮液 本身中和/或所述悬浮液上方的顶部空间中。利用潜热（蒸汽加热）进行热传递比来自例 如外部夹套的显热更有效的多，因为更高量的能量在更短的时间段内释放。此外，蒸汽注入 顶部空间特别使得能够快速加热端点，例如进口、无菌过滤器和容器顶盖，因此减小了主体 材料上的总热负荷。使用顶部空间蒸汽加热提供以下优点： 专利技术详述 第一方面，本专利技术提供了一种磷脂悬浮液的灭菌方法，其包括： (i)在夹套式容器中将所述磷脂与丙二醇一起在水性生物相容性载体中混合，以 得到水性磷脂悬浮液；和 (ii)将来自步骤（i)的水性磷脂悬浮液高压灭菌，其中所述高压灭菌能够使灭菌 系统的所有部分的F。值达到大于15,并且其中除了来自加热所述容器夹套的显热之外，加 热还包括将蒸汽加入至： (a)步骤⑴的容器的顶部空间；或 (b)步骤⑴的水性磷脂悬浮液；或 (c) (a)和（b)的组合； (iii)冷却来自步骤（ii)的热悬浮液至15_30°C以得到无菌磷脂悬浮液； 其中所述磷脂为氢化卵磷脂酰丝氨酸（Η-EPS)。 术语"灭菌"具有其常规含义，并且是指消灭微生物以获得无菌、无热原的组合物 的过程。术语"高压灭菌"具有其常规含义，并且是指使用过热蒸汽灭菌的一种特定的灭 菌方法。高压灭菌和其它灭菌方法描述于《在医学和药物产品中实现无菌》（Achieving SterilityinMedicalandPharmaceuticalProducts)中，N.HAlls(CRC出版，1994)。 术语"灭菌系统"是指高压灭菌装置主体的灭菌屏障（即进口和出口）内包含的 容积。 保证灭菌通常通过术语F。描述，定义为"与121°C下通过灭菌过程传递给产物的相 等的时间量，以分钟计"（FDA"提议的规则"6月1日，1976(b)，212. 3部）。在高压灭菌周 期中，F。值被计算为： F〇=ΔtΣ10(TTb)/Z 其中： At是测量间隔，T是加热温度（传感器测得的温度）， Tb是121. 1°C(蒸汽巴氏杀菌的规定温度），和 Z是对数灭菌能力变化的温度常数，通常设定为10°C。 在高压灭菌周期中，甚至在低温下，F。将因此随时间增加，但增加速率非常依赖于 温度。根据美国药典/欧洲药典，作为无菌保证的可接受的F。的最小要求为F。〉15。 术语"顶部空间"具有其常规含义，并且指的是容器内部和在容器液体和/或固体 内容物（在本情况下为水性磷脂悬浮液）上方的气相。 术语"水性磷脂悬浮液"是指磷脂在水性溶剂中的悬浮液，所述水性溶剂包括水和 /或水混溶剂。水性溶剂是合适的生物相容性载体。术语"生物相容性载体"是指一种流体， 特别是液体，使得该组合物是生理上可以耐受的，即可被给予到哺乳动物身体上，没有毒性 或过度的不适感。生物相容性载体合适地是注射载液，例如无菌、无热原的注射用水；水溶 液如盐水（其可以有利地被平衡，使得用于注射的终产物是等渗的）；包含生物相容缓冲剂 的水性缓冲溶液（例如磷酸盐缓冲液）；一种或多种张力调节物质（例如血浆阳离子与生 物相容性抗衡离子的盐）、糖（例如葡萄糖或蔗糖）、糖醇（例如山梨糖醇或甘露糖醇）、二 醇（例如甘油）或其它非离子多元醇材料（例如聚乙二醇、丙二醇等）的水溶液。优选生 物相容性载体是无热原的注射用水（WFI)、等渗盐水和磷酸盐缓冲液。因此水性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种磷脂悬浮液的灭菌方法，其包括：(i)在夹套式容器中将所述磷脂与丙二醇在水性生物相容性载体中混合，以得到水性磷脂悬浮液；和(ii)将来自步骤(i)的水性磷脂悬浮液高压灭菌，其中所述高压灭菌能够使灭菌系统所有部分的F0值达到大于15，并且其中，除了来自加热所述容器夹套的显热之外，加热还包括加入蒸汽至：(a)步骤(i)的容器的顶部空间；或(b)步骤(i)的水性磷脂悬浮液；或(c)(a)和(b)的组合；(iii)冷却来自步骤(ii)的热悬浮液至15‑30℃以得到无菌磷脂悬浮液；其中所述磷脂为氢化卵磷脂酰丝氨酸。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：I·亨里克森，S·克瓦勒，O·J·托克鲁，P·松图姆，
申请(专利权)人：通用电气医疗集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：挪威;NO