用于调节TAU表达的组合物和方法技术

公开了用于使用Tau反义化合物调节动物中Tau mRNA的剪接的方法。本文还公开了用于使用Tau反义化合物降低动物中Tau mRNA和蛋白的表达的方法。所述化合物和方法适用于治疗、预防或改善有此需要的个体内的神经变性疾病。可使用Tau反义寡核苷酸的施用来治疗、预防和改善的神经变性疾病的实例包括阿尔茨海默氏病、额颞痴呆(FTD)、FTDP-17、进行性核上性麻痹、慢性创伤性脑病、癫痫和Dravet综合征。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调节TAU表达的组合物和方法序列表本申请连同序列表一起以电子格式提交。序列表是提供为2014年3月14日建立的大小为约208KB的题为BIOL0220WOSEQ_ST25.txt的文档。电子格式的序列表中的信息以引用的方式整体并入本文。背景1.领域本文公开了涉及反义化合物生物化学、分子生物学和药物的领域的组合物和方法。本文描述的实施方案涉及用于通过抑制细胞和/或动物中的Tau表达或调节Tau剪接来治疗、预防或改善神经变性疾病的化合物、组合物和方法，所述神经变性疾病包括Tau蛋白病、阿尔茨海默氏病、额颞痴呆(FTD)、FTDP-17、进行性核上性麻痹(PSP)、慢性创伤性脑病(CTE)、皮质基底节变性(CBD)、癫痫和Dravet综合征。2.描述Tau的主要功能是结合并稳定微管，微管是涉及有丝分裂、胞质分裂和囊泡转运的细胞骨架的重要结构组分。Tau存在于多种组织中，但在神经元的轴突中特别丰富。在人体内，存在通过外显子2、3和10的可变剪接所产生的六种Tau同工型。蛋白质N端处外显子2和3的剪接导致零个、一个或两个29氨基酸酸性结构域的保留并且分别称作0N、1N或2NTau。这些结构域对Tau功能的影响不完全明了，但可能在与质膜的相互作用方面起到作用。在C端的外显子10的保留导致由外显子10编码的微管结合结构域的保留。因为在Tau中的别处存在3个微管结合结构域，所以这个Tau同工型(包括有外显子10)被称为4RTau，其中‘R’是指微管结合结构域的重复的数目。没有外显子10的Tau称为3RTau。因为更多的微管结合结构域(4R相比于3R)增加了与微管的结合，所以4RTau可能显著增加微管结合和组装。3R/4RTau之比是受发育调节的，其中胎儿组织只表达3RTau，而成年人体组织表达大约相等水平的3R/4RTau。偏离3R/4RTau的正常比率是神经变性FTDTau蛋白病的特征。尚不清楚如何改变成人动物中晚期阶段的3R/4RTau比率将影响Tau蛋白病。丝氨酸-苏氨酸定向的磷酸化调节Tau的微管结合能力。高度磷酸化促进Tau从微管脱离。对Tau的其它翻译后修饰已经得到描述，然而这些修饰的意义尚不清楚。Tau的磷酸化也是受发育调节的，其中胎儿组织中的磷酸化更高，而成人中的磷酸化要低很多。神经变性病症的一个特征是Tau磷酸化的异常增加。微管网络涉及细胞内的许多重要过程，包括保持细胞形态和操作转运机器所需要的结构完整性。因为Tau与微管的结合使微管稳定，所以Tau可能是这些过程中的一些过程的关键介体，并且神经变性疾病中正常Tau的破坏可能破坏这些关键细胞过程中的一些过程。对于Tau可能在神经变性综合征中具有重要性的一个早期指示是认识到Tau是阿尔茨海默氏病中神经纤维包涵体的关键组分。事实上，神经纤维包涵体是高度磷酸化的Tau蛋白的聚集体。神经纤维包涵体与含有β淀粉样蛋白的斑块一道是阿尔茨海默氏病的标志并且与认知损伤显著相关。AD中95％的Tau积累发生于神经元过程中并且被称作神经炎性营养不良。这种与微管结合的蛋白变得与微管脱离并形成蛋白积累的过程以及这与神经元毒性的关系尚未充分了解。神经元Tau包涵体不仅是阿尔茨海默氏病的而且是额颞痴呆(FTD)亚群、PSP和CBD的病理特征。Tau与神经变性之间的联系因为发现Tau基因的突变导致FTD亚群而得到支持。这些遗传学数据也已经突出了Tau的3R∶4R比率的重要性。许多引起FTD的Tau突变导致Tau剪接的变化，这种变化导致外显子10的优先保留并因此导致增加的4RTau。总体Tau水平是正常的。是Tau同工型变化还是氨基酸变化还是两者都引起神经变性仍不可知。最近数据表明PSP也与增加的4R∶3RTau比率相关联并且因此可适用于类似的剪接策略。为了帮助理解Tau比率对神经变性的影响，使用包括Tau启动子和外显子10的侧翼内含子序列的小基因生成了基于一种剪接Tau突变(N279K)的小鼠模型。和在人体内一样，这些小鼠展现了与表达WTTau的转基因动物相比有所增加的4RTau水平，并且发展出行为和运动异常以及大脑和脊髓中聚集Tau的积累。蛋白“Tau”已经与大脑的多种疾病相关联，这些疾病包括阿尔茨海默氏病、额颞痴呆、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、拳击员痴呆、与染色体连锁的帕金森综合征、Lytico-Bodig病、缠结主导的痴呆、神经节神经胶质瘤、神经节细胞瘤、脑膜血管瘤病、亚急性硬化性全脑炎、铅毒性脑病、结节性硬化症、哈-斯二氏病、皮克氏病、嗜银颗粒性疾病、皮质基底变性或额颞叶变性以及其它。Tau相关病症如AD是老年人痴呆的最常见原因。AD影响全世界估计1500万人和40％的85岁以上的人口。AD以两个病例标志为特征：Tau神经纤维包涵体(NFT)和β淀粉样蛋白(Aβ)斑块。在中风发作病症中，大脑的电活动被周期性地扰动，导致一定程度的临时脑功能障碍。正常的大脑功能需要有序的、有组织的、协调的电脉冲放电。电脉冲使大脑能够与脊髓、神经和肌肉以及其自身内部进行通信。当大脑的电活动受到破坏时可导致中风发作。存在两种基本中风发作类型：癫痫性的和非癫痫性的。癫痫性中风发作没有明显原因或触发且重复发生。非癫痫性中风发作是受刺激大脑的病症或其它病状触发或驱使。某些精神病症可引起被称为精神性非癫痫性中风发作的中风发作症状。已知阿尔茨海默氏病(AD)是迟发型中风发作的临床危险因素。多种AD小鼠模型概括了这种增加的中风发作敏感性。在过去5年内，已经在小鼠tau敲除(tau-/-)环境中研究了许多这样的AD模型。在这些淀粉样蛋白沉积的tau敲除动物系中，增加的中风发作敏感性得到改善。此外，有趣的是，单独的tau-/-表现出了针对化学诱导的中风发作的保护性。抗惊厥药代表了中风发作的常用治疗方案。然而，抗惊厥药在具有中风发作病症的较大比例人群中是无效的并且对于这些个体，手术是唯一选项。鉴于缺乏可用于中风发作病症和神经变性疾病的治疗，本专利技术实施方案的某些方法提供用于通过抑制动物中的Tau表达或调节Tau剪接来治疗、预防或改善中风发作病症和神经变性疾病的方法。概述本文提供了用于调节细胞、组织和动物中的TaumRNA紧接的方法。本文还提供了用于调节细胞、组织和动物中的TaumRNA的表达产物的方法。在某些实施方案中，可在细胞或组织中进行调节。在某些实施方案中，细胞或组织处于动物体内。在某些实施方案中，动物为人。在某些实施方案中，TaumRNA水平降低。在某些实施方案中，Tau蛋白水平降低。在某些实施方案中，调节了TaumRNA的剪接。在某些实施方案中，调节了TaumRNA的表达产物。在某些实施方案中，促进了Tau外显子10的排除。在某些实施方案中，降低了TauRNA或蛋白的4R同工型的表达。在某些实施方案中，增加了TauRNA或蛋白的3R同工型的表达。在某些实施方案中，降低了TauRNA或蛋白的4R同工型的表达并且增加了TauRNA或蛋白的3R同工型的表达。在某些实施方案中，减少了高度磷酸化的Tau。所述降低和调节可以时间依赖性方式或以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸是由8至30个连接核苷组成且具有包含含有至少8个连续核碱基的互补区域的核碱基序列，所述互补区域与Tau转录物的等长度靶区域互补。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.14 US 61/785,177;2014.02.24 US 61/943,9311.一种包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸是由16至22个连接核苷组成且如在所述寡核苷酸的整个长度上所测量的，具有与SEQIDNO:1的等长区域100％互补的核碱基序列，其中所述核碱基序列包含至少16个连续核碱基，其与SEQIDNO:1的核碱基121873至121898等长度部分互补，其中所述修饰寡核苷酸的每个核苷包含修饰的糖部分，其中所述修饰的糖部分为2’-取代的糖部分且其中所述2’-取代的糖部分为2’-MOE。


2.如权利要求1所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸是由18或20个连接核苷组成。


3.一种包含修饰寡核苷酸的化合物，所述修饰寡核苷酸是由16至30个连接核苷组成且如在所述寡核苷酸的整个长度上所测量的，具有与SEQIDNO:1的等长区域100％互补的核碱基序列，其中所述核碱基序列包含SEQIDNO:33、34、145-155和208-210中任一个的至少16个连续核碱基，其中所述修饰寡核苷酸的每个核苷包含2’-取代的糖部分和其中每个2’-取代的糖部分是2’-MOE。


4.如权利要求3所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸是由18或20个连接核苷组成。


5.如权利要求1所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸的至少一个核碱基是修饰核碱基。


6.如权利要求1所述的化合物，其中所有胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。


7.如权利要求3所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸的至少一个核碱基是修饰核碱基。


8.如权利要求3所述的化合物，其中所有胞嘧啶为是5-甲基胞嘧啶。


9.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物包含由18个连续核碱基组成的修饰寡核苷酸且具有NSNSNONSNONSNONSNONSNONSNONSNONSNSN核苷间键联基序，其中每个N代表核苷，每个S代表硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个O代表磷酸二酯核苷间键联。


10.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物包含由18个连续核碱基组成的修饰寡核苷酸且具有NSNONONONSNSNSNSNSNSNSNSNONONONSNSN核苷间键联基序，其中每个N代表核苷，每个S代表硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个O代表磷酸二酯核苷间键联。


11.如权利要求1所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键联。


12.如权利要求11所述的化合物，其中所述修饰的核苷间键联是硫代磷酸酯核苷间键联。


13.如权利要求12所述的化合物，其中每个剩余的核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。


14.如权利要求1所述的化合物，其中每个核苷间键联为修饰的核苷间键联。


15.如权利要求14所述的化合物，其中每个修饰的核苷间键联是硫代磷酸酯核苷间键联。


16.如权利要求3所述的化合物，其中所述化合物包含由18个连续核碱基组成的修饰寡核苷酸且具有NSNSNONSNONSNONSNONSNONSNONSNONSNSN核苷间键联基序，其中每个N代表核苷，每个S代表硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个O代表磷酸二酯核苷间键联。


17.如权利要求3所述的化合物，其中所述化合物包含由18个连续核碱基组成的修饰寡核苷酸且具有NSNONONONSNSNSNSNSNSNSNSNONONO...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·里戈，C·F·贝内特，
申请(专利权)人：ISIS制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US