可口革囊星虫纤溶酶基因、可口革囊星虫重组纤溶酶及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种可口革囊星虫纤溶酶基因、可口革囊星虫重组纤溶酶及其应用，所述可口革囊星虫纤溶酶基因序列如SEQ ID NO：1所示；通过蛋白表达系统对所述的可口革囊星虫纤溶酶基因进行重组蛋白诱导表达，得到所述可口革囊星虫重组纤溶酶，所述可口革囊星虫重组纤溶酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；一种所述的可口革囊星虫重组纤溶酶的应用，所述可口革囊星虫纤溶酶基因用于制备溶栓药物，以及用于治疗血栓性疾病。本发明专利技术的可口革囊星虫纤溶酶基因和可口革囊星虫重组纤溶酶具有直接溶解血块中纤维蛋白的能力，降解纤维蛋白时，首先降解α链，然后降解β链，最后降解γ链，为α-纤溶酶，并且对肿瘤细胞有一定的抑制作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种可口革囊星虫纤溶酶基因，特别指一种口革囊星虫重组纤溶酶及其应用。
技术介绍
血栓栓塞性疾病是一种常见的心脑血管疾病，常表现为心肌梗死、缺血性脑梗死、静脉血栓栓塞。随着我国人民生活水平的提高和人口老龄化的到来，血栓栓塞性疾病现已成为我国发病率，致残率和死亡率最高的疾病。因此寻找新型高效抗栓药物迫在眉睫，溶栓药物的研发已经成为抗血栓药物的研发热点。截止目前，已经从生物中得到196条用于开发溶栓药物的基因，寻找和开发一种新型的海洋溶栓物质，能够用来治疗血栓性疾病。通过对其溶栓性质的研究，用基因工程的手段进一步研究其活性位点，从而研发出抗血栓效果更好，副作用更低的溶栓药物。可口革囊星虫(Phascolosomaesculenta)俗称“泥蒜”、海蛆、沙虫、海丁、土笋，福建安海著名小吃土笋冻就是由其制做而成的。隶属于星虫动物门(Sipunculoidea)、星虫纲(Sipuncula)、革囊星虫属(Phascolosoma)。该种为我国特有，也是我国星虫中种群数量较大的一个种，分布于我国东南沿海，广布于广西、广东、海南岛、福建和浙江，栖息于潮间带、高潮区的泥滩内，营底栖穴居生活。以废屑和动植物碎片为食料，对温度和盐度的适应能力较强，因此，具有许多海洋生物不具有的特征，同样也具有很多不为人知的功能因子，为了充分利用海洋生物资源，开发更多的功能食品。目前，可口革囊星虫主要还是供人食用，其科学研究利用价值还有待进一步的研究探讨。国内主要是对可口革囊星虫的营养成分及增养殖方面进行研究。展望未来，随着现代分子生物学技术，生物下游工程等技术的不断发展，可口革囊星虫的研究利用价值会逐步被发掘出来，其体内重要的活性物质也会被逐一探明。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题之一，在于提供一种可口革囊星虫纤溶酶基因。本专利技术是这样实现上述技术问题之一的：一种可口革囊星虫纤溶酶基因，所述可口革囊星虫纤溶酶基因序列如SEQIDNO：1所示。本专利技术要解决的技术问题之二，在于提供一种可口革囊星虫重组纤溶酶。本专利技术是这样实现上述技术问题之二的：一种可口革囊星虫重组纤溶酶，通过蛋白表达系统对所述的可口革囊星虫纤溶酶基因进行重组蛋白诱导表达，得到所述可口革囊星虫重组纤溶酶，所述可口革囊星虫重组纤溶酶的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。本专利技术要解决的技术问题之三，在于提供一种所述的可口革囊星虫重组纤溶酶的应用。本专利技术是这样实现上述技术问题之三的：一种所述的可口革囊星虫重组纤溶酶的应用，其特征在于：所述可口革囊星虫纤溶酶基因用于制备溶栓药物，以及用于治疗血栓性疾病。本专利技术的优点在于：可口革囊星虫纤溶酶基因和可口革囊星虫重组纤溶酶具有直接溶解血块中纤维蛋白的能力，降解纤维蛋白时，首先降解α链，然后降解β链，最后降解γ链，为α-纤溶酶，并且对肿瘤细胞有一定的抑制作用。附图说明下面参照附图结合实施例对本专利技术作进一步的说明。图1是本专利技术中可口革囊星虫天然纤溶酶序列模式图。图2是本专利技术中克隆可口革囊星虫重组纤溶酶3’-FullRACECoreSetVer.2.0实验原理图。图3是本专利技术中重组纤溶酶Western-Blot检测结果原始图。图4是本专利技术中可口革囊星虫重组纤溶酶利用纤维平板法进行纤溶活性的检测结果的示意图。具体实施方式一种可口革囊星虫纤溶酶基因，所述可口革囊星虫纤溶酶基因序列如SEQIDNO：1所示，编码区为720bp，编码多肽长度为240个氨基酸。可口革囊星虫纤溶酶基因的获取，是从福建沿海的海洋生物可口革囊星虫的肠组织中寻找和分离到的天然纤溶蛋白质进行N端7个氨基酸测序，序列为NH4-IVGGRDV-OH，根据序列比对丝氨酸超家族酶的保守序列设计引物对，初步克隆基因，3’RACE和5’RACE技术和生物信息学分析得到其基因序列。具体的实施方法如下：1实验耗材：1.1实验材料：可口革囊星虫(Phasolosmaesculenta)，雄性昆明种小鼠，大肠埃希氏菌DH5α、BL21(DE3)，pET-22b质粒，毕赤酵母GS115，Ppic9质粒。1.2、仪器高速冷冻离心机；台式离心机；磁力搅拌器；精密pH计；电泳仪；凝胶成像仪；微波炉；电子天平；微量移液器；恒温摇床；脱色摇床；冻干机；制冰机；恒温水浴锅DK-S24；恒温干燥箱；酶标仪；核酸蛋白检测系统；N3000色谱工作站；恒流泵；数码照相机；分光光度计；超纯水仪；组织匀浆器；洁净工作台；立式自动压力蒸汽灭菌器；架盘药物天平；涡旋振荡器；超低温冰箱；普通冰箱；PCR仪；数显电热培养箱；超声波细胞破碎仪；基因导入仪。1.3药物与试剂凝血酶；牛纤维蛋白原；戊巴比妥钠，角叉菜胶，注射用尿激酶；考马斯亮蓝R-250；低分子量标准蛋白(2KDa-220KDa)；三羟基氨基甲烷；美国陶氏分装丙烯酰胺；甲叉双丙烯酰胺；甘氨酸；过硫酸铵；十二烷基磺酸钠(SDS)；β-巯基乙醇；TEMED；甲醇；氯化钠；磷酸氢二钾；磷酸二氢钾；氢氧化钠；氯化钙；氯化钾；二乙基焦碳酸酯；三氯甲烷；乙酸；无水乙醇；琼脂糖；溴化乙锭；N,N,N,N,-四甲基乙二胺；蛋白胨；酵母浸出物；甘油；氨苄青霉素；异丙醇；溴酚蓝；二甲苯青；醋酸钠；琼脂粉；限制性内切酶BgLII，XhoI，BamHI，NcoI；dNTPMix(10mM)；10×ReactionBuffer；TaqDNA聚合酶；PlatinumpfxDNA聚合酶；MgSO4；10×pfxBuffer；10×LoadingBuffer；乳糖；PrecisionPlusProteinTMStandardsDualColor；；Tween-20；脱脂奶粉；苯甲基磺酰氟；PVDF膜0.22μ；mHis-tag(27E8)MousemAb；StabilizedPeroxidaseConjugatedGoatAnti-mouse(H+L)；尿素；硫酸镍；咪唑；YNB；生物素；D-葡萄糖；山梨醇；TritonX-100；NiSepharoseTM6FastFlow；BCA蛋白浓度测定试剂盒；UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒(生工生物工程(上海)有限公司)；RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit(美国Fermentas)；PCRPurificationKit(德国QIAGEN)；新型pUM-T本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可口革囊星虫纤溶酶基因，其特征在于：所述可口革囊星虫纤溶酶基因序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种可口革囊星虫纤溶酶基因，其特征在于：所述可口革囊星虫纤
溶酶基因序列如SEQIDNO：1所示。
2.一种可口革囊星虫重组纤溶酶，其特征在于：通过蛋白表达系统对
权利要求1所述的可口革囊星虫纤溶酶基因进行重组蛋白诱导表达，得到所
述...

【专利技术属性】
技术研发人员：许瑞安，王秋艳，熊亚楠，李招发，吴雅清，马国兴，蔡双凤，崔秀灵，
申请(专利权)人：华侨大学，
类型：发明
国别省市：福建;35