本发明专利技术的目的是提供一种CHST6基因在制备检测斑块状角膜营养不良诊断制品中的应用，本发明专利技术提供了CHST6基因的新的用途，从而提供了一种有效的进行斑块状角膜营养不良疾病基因诊断、产前基因筛查及遗传咨询的途径，应用效果表明本发明专利技术所提供的基因的SNP位点及检测引物可以有效的用于临床患者及胎儿绒毛或羊水进行CHST6基因突变位点的快速检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因诊断制品
，具体涉及一种N-乙酰氨基葡萄糖-6-转磺酶(CHST6)在制备检测斑块状角膜营养不良基因诊断制品中的应用。专利技术背景斑状角膜营养不良(macularcornealdystrophy,MCD)是一种常染色体隐性遗传病，以双侧角膜基质进行性雾状混浊及中央角膜变薄为特征，在临床上较为少见，但发病较严重，早期即明显影响视力。患者通常在10岁以前就双眼较对称发病，视力下降，约在20岁时病情已比较明显，有畏光、流泪及视力下降的症状，角膜病变初期表现为角膜中央浅基质层的细小云雾状浑浊，有的为半透明环状。以后这些细小浑浊逐渐融合为多形、不规则的灰白样，随病情进展向角膜周边延伸和角膜深基质层发展。当角膜混浊的区域向表面扩展形成凸出角膜表面呈结节状，造成角膜不规则散光，而当混浊区域向弹力层发展时，裂隙灯下可见角膜后有大量的内皮赘疣。与其他的角膜营养不良不同，斑块状角膜营养不良在病程发展至晚期，均可出现角膜变薄。当视力下降明显、影响工作与生活时，可行板层或穿透性角膜移植术进行治疗，但术后都存在复发的可能。根据ELISA法检查病人血清中硫酸角质素(keratansulfate,KS)抗原浓度的高低及对角膜组织的免疫组化检查，将斑状角膜营养不良分为三型，I型患者的血清和角膜中没有KS的免疫反应，ⅠA型患者的血清中没有KS的免疫反应，但角膜中存在KS的免疫反应，而II患者血清和角膜中都存在KS的免疫反应。斑块状角膜营养不良发病较早，病情逐渐进展，常双眼发病，对视力影响严重，常合并角膜上皮糜烂而有刺激症状，除了角膜移植手术，目前尚无更好的治疗方法，而手术供体匮乏，术后并发症多并且容易复发，加之手术费用昂贵，给患者家庭和社会带来沉重的经济和精神负担。建立斑块状角膜营养不良的相关的基因突变检测系统，并应用于临床工作和优生优育，有助于遗传性斑块状角膜营养不良的基因诊断和相应的基因治疗，有助于突变基因携带者的检出，有助于通过产前检查降低疾病的发生率，有助于有效地控制这种疾病的发生。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种CHST6基因在制备检测斑块状角膜营养不良诊断制品中的应用，从而弥补现有技术的不足。申请人从一个5代呈常染色体隐性遗传的斑块状角膜营养不良家系中，对该家系全部成员进行了CHST6基因的测序，找到了该家系的致病基因CHST6存在遗传上的致病突变，从而促成了本专利技术。本专利技术首先提供CHST6基因新的用途，是在制备用于检测斑块状角膜营养不良诊断制品中的应用；上述的诊断制品，作为实施例的优选，是检测斑块状角膜营养不良的引物或探针。上述的引物对，其引物信息如下：CHST6-F:CCACAAACTCCTTGGTCAATSEQIDNO:1CHST6-R:TGTCTTAAGGCCACATTTCCSEQIDNO:2CHST6-1F:GCCCCTAACCGCTGCGCTCTCSEQIDNO:3CHST6-1R:GGCTTGCACACGGCCTCGCTSEQIDNO:4CHST6-2F:GACGTGTTTGATGCCTATCTGCCTTGSEQIDNO:5CHST6-2R:TCCGTGGGTGATGTTATGGATSEQIDNO:6本专利技术还提供一种用于检测斑块状角膜营养不良的试剂盒，包含有上述的引物对中的两种或几种。本专利技术还提供一种与斑块状角膜营养不良疾病相关的SNP位点，为CHST6基因编码区域由起始密码子起第463-464位碱基。其中用于检测上述SNP位点的引物信息如下：CHST6-F:CCACAAACTCCTTGGTCAATSEQIDNO:1CHST6-R:TGTCTTAAGGCCACATTTCCSEQIDNO:2CHST6-2F:GACGTGTTTGATGCCTATCTGCCTTGSEQIDNO:5CHST6-2R:TCCGTGGGTGATGTTATGGATSEQIDNO:6。本专利技术还提供另外一种与斑块状角膜营养不良疾病相关的SNP位点为CHST6基因编码区域由起始密码子起第250-272位碱基。其中用于检测上述SNP位点的引物信息如下：CHST6-F:CCACAAACTCCTTGGTCAATSEQIDNO:1CHST6-R:TGTCTTAAGGCCACATTTCCSEQIDNO:2CHST6-1F:GCCCCTAACCGCTGCGCTCTCSEQIDNO:3CHST6-1R:GGCTTGCACACGGCCTCGCTSEQIDNO:4。本专利技术提供了CHST6基因的新的用途，从而提供了一种有效的进行斑块状角膜营养不良疾病基因诊断、产前基因筛查及遗传咨询的途径，应用效果表明本专利技术所提供的基因的SNP位点及检测引物可以有效的用于临床患者及胎儿绒毛或羊水进行CHST6基因突变位点的快速检测。附图说明图1：实施例1的斑块状角膜营养不良家系内患者CHST6测序图，其中A：参考序列；B：患者。该家系中三名患者CHST6基因编码区域由起始密码子起第463-464位碱基发生了纯合突变，其碱基CG发生缺失。图2：实施例2的斑块状角膜营养不良家系内患者CHST6测序图，其中A：参考序列；B：正常人。该家系中三名患者CHST6基因编码区域由起始密码子起第250-272位碱基发生了纯合突变，其碱基AGCGCCGCAACGCTGCACATGGC发生缺失。具体实施方式申请人在一个斑块状角膜营养不良家系中发现CHST6基因的突变位点，并证实该基因的突变是该病的致病基因，从而促成了本专利技术。CHST6基因位于染色体16q22，可转录成大约1188bp的mRNA(NCBI登录号为NM_021615.4)，直接翻译形成395个氨基酸组成的蛋白质。下面结合实施例对本专利技术进行详细的描述。实施例1：从斑块状角膜营养不良家系中筛选CHST6基因的突变位点1、提取外周血基因组DNA：在符合国家相关政策规定，并在取样对象同意的基础上，抽取第一个家系成员外周静脉血2-5ml，放入EDTA抗凝管内，-80℃冻存备用；冻存的EDTA抗凝血在室温融化后，取500μL放于离心管，加入等体积TE(pH8.0)，混匀，4℃，10000rpm离心10分钟，弃上清。加入180μLTE、20μLSDS(10％)、8μL蛋白酶K(l0mg/ml)混匀，置于37℃水浴过夜。从水浴中取出样品，瞬时离心沉淀样本。在反应管中加入等体积的Tris-饱和酚(约300μL)，充分混匀，室温本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种CHST6基因的应用，其特征在于，所述的应用是CHST6基因在制备用于检测斑块状角膜营养不良诊断制品中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种CHST6基因的应用，其特征在于，所述的应用是CHST6基因在
制备用于检测斑块状角膜营养不良诊断制品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的诊断制品为PCR检测
引物或探针。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的引物的序列信息如下：
一种用于检测斑块状角膜营养不良的引物对，所述的引物对的信息如下：
CHST6-F:CCACAAACTCCTTGGTCAATSEQIDNO:1、
CHST6-R:TGTCTTAAGGCCACATTTCCSEQIDNO:2、
CHST6-1F:GCCCCTAACCGCTGCGCTCTCSEQIDNO:3、
CHST6-1R:GGCTTGCACACGGCCTCGCTSEQIDNO:4、
CHST6-2F:GACGTGTTTGATGCCTATCTGCCTTGSEQIDNO:5、
CH...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈鹏，郝晓丹，王殿强，赵晓雯，王瑶，
申请(专利权)人：山东省眼科研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37
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