检测IgM抗体的胶体金试纸条及试纸卡、制备和检测方法技术

本发明专利技术提供一种检测IgM抗体的胶体金试纸条，所述IgM抗体为九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体，其包括在聚氯乙烯底板上依次贴附的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合物垫为包覆有兔抗人IgM抗体-胶体金结合物的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜依次包被有9条检测线和1条质控线，所述9条检测线分别为肺炎支原体重组抗原、肺炎衣原体重组抗原、甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、副流感病毒抗原、嗜肺军团菌抗原、Q热立克次体抗原、呼吸道合胞病毒抗原和腺病毒抗原，质控线为二抗。还提供了包括该胶体金试纸条的胶体金试纸卡及胶体金试剂盒，及其制备方法和使用该胶体金试纸条、试纸卡或试剂盒进行检测的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种试纸条，具体涉及一种检测九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体的胶体金试纸条，以及包括该胶体金试纸条的胶体金试纸卡及胶体金试剂盒，该胶体金试纸条的制备方法，和使用该胶体金试纸条、胶体金试纸卡或胶体金试剂盒进行检测的方法。
技术介绍
目前通过免疫荧光试剂盒检测样品中的九项呼吸道病原体的特异性IgM抗体是一种成熟的技术，但是所需时间较长。例如，安图生物公司九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒采用间接免疫荧光法原理，在载玻片上(10孔/片)分别包被：1孔包被嗜肺军团菌血清I型，2孔包被McCoy细胞中的肺炎支原体，3孔包被Q热立克次体II相，4孔包被肺炎衣原体(原生小体)，5孔包被HEp-2细胞中的腺病毒，6孔包被HEp-2细胞中的呼吸道合胞病毒，7孔包被LLC-MK2细胞中的甲型流感病毒，8孔包被LLC-MK2细胞中的乙型流感病毒，9孔包被LLC-MK2细胞中的副流感病毒1，2和3型，10孔为质控孔。除嗜肺军团菌，载玻片中所有抗原都是从细胞培养物中获得。简单步骤为：稀释血清样本(5min)→加入抗人IgG吸附剂处理血清样本，并离心，(20min)→在载玻片中加入所检测血清样本，并37℃孵育90min→清洗并晾干15min→加兔抗人IgM-FITC结合物，并7℃孵育30min→清洗并晾干15min→加入封闭介质并置于显微镜下观察结果15min，所以检测时间需要约3小时以上。现有技术中还有其他的检测呼吸道病原体的试剂盒，但这些试剂盒及相关检测方法常需要扩增样品的核酸片段，有的需培养或制备相应的探针溶液，有的还需使用大型仪器设备，如质谱仪、GeXP遗传分析仪等进行检测。这会付出额外的培养时间和反应时间，并且要求有专业人员和昂贵的专业设备相配合才能得以实施，因而检测成本高且效率较低。胶体金试纸条作为一种快速现场检测技术，操作简便，一般15分钟内即可肉眼读出结果。然而，目前还未见在一个胶体金试纸条上同时检测九项呼吸道病原体的特异性IgM抗体的报道。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的在于克服现有技术中的上述缺陷，提供了一种特异性强、检测便捷、价格低廉的检测九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体的胶体金试纸条，还提供了包括该胶体金试纸条的胶体金试纸卡及胶体金试剂盒，以及该胶体金试纸条的制备方法和使用该胶体金试纸条、试纸卡或试剂盒进行检测的方法。为实现上述目的，本专利技术提供了一种检测IgM抗体的胶体金试纸条，所述IgM抗体为九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体，所述胶体金试纸条包括在聚氯乙烯(PVC)底板上依次贴附的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合物垫为包覆有兔抗人IgM抗体-胶体金结合物的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜依次包被有9条检测线和1条质控线，所述9条检测线分别为肺炎支原体重组抗原、肺炎衣原体重组抗原、甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、副流感病毒抗原、嗜肺军团菌抗原、Q热立克次体抗原、呼吸道合胞病毒抗原和腺病毒抗原(下文中可分别简称为T1～T9线)，所述质控线为二抗(下文中可简称为C线)。以上9条检测线可以以任意顺序排列而不影响检测结果。本专利技术涉及的呼吸道感染病原体的相关介绍如下：肺炎支原体：肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，可在呼吸道粘膜上皮内潜伏，部分患者无明显症状，但大部分患者为显性感染，在3岁以下儿童呼吸道感染多见，成人以肺炎表现为主。肺炎支原体肺炎潜伏期为14～21天，起病缓慢，IgM抗体一般在感染后1周出现，3～4周达高峰期，可持续3～6个月。肺炎衣原体：肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎，在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10％，肺炎衣原体所感染所致的肺炎，症状和体征无特异性，多数起病缓慢，潜伏期一般为30天左右，IgM抗体在发病2～3周出现，一般来说可持续存在2～6个月。流感病毒：它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。由于它易与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期间临床诊断很困难，因此实验室诊断显得非常重要。流感病毒感染的潜伏期一般为1～7天，IgM抗体在发病1周左右出现，可持续2～3个月。副流感：副流感病毒在2～4岁儿童中能引起喉气管支气管炎，潜伏期一般为2～7天，IgM抗体在发病1周左右出现，可持续2～3个月。嗜肺军团菌：人最易感染嗜肺军团菌1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。10％的肺炎是由嗜肺军团菌1型所引起的，潜伏期一般为2～10天，IgM抗体存在感染后1周出现，并可持续3～6个月。Q热立克次体：Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热，非典型肺炎，肝炎或者心内膜炎，潜伏期为2～38天，通常为12～19天，IgM抗体一般在感染后2周出现，4～8周达高峰，可持续存在3～4个月。呼吸道合胞病毒：是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。潜伏期为3～7天，IgM抗体在发病1周左右出现。腺病毒：腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。腺病毒感染的潜伏期为2～14天，IgM抗体在发病1周左右出现。可持续2～3个月。免疫球蛋白M(IgM)是人类或者动物体内最重要的一种免疫球蛋白。当机体感染病原体后，在体内，最早出现的是该病原体的特异性的IgM抗体，之后IgM浓度降低，特异性的IgG抗体升高。因此，通过检测机体内病原体特异性的IgM抗体的存在与否，可以诊断人或者动物对该病原体是否有早期感染的可能。血清内若检测出病原体的特异性的IgM抗体，证明该机体有近期感染的发生，如果能够实现早诊断、早诊疗，无疑对临床医生和患者都是具有重要的意义。根据本专利技术的胶体金试纸条，其中，所述样品垫为玻璃纤维膜。优选地，所述吸水垫为吸水纸。根据本专利技术的胶体金试纸条，其中，所述检测线和质控线的各相邻线的间隔为3～4mm，优选为3mm；优选地，所述胶体金试纸条的宽度为3～5mm，优选为4mm。根据本专利技术的胶体金试纸条，其中，所述样品垫与结合物垫之间重叠1～2mm，优选为1mm，所述结合物垫与硝酸纤维素膜之间重叠1～2mm，优选为1mm，所述硝酸纤维素膜与吸水垫之间重叠1～2mm，优选为1mm。根据本专利技术的胶体金试纸条，其中，选用的二抗为羊抗兔IgG抗体。该胶体金试纸条的检测原理大体为：在样品垫滴加入待测样品后，通过毛细作用，待测样品将结合本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测IgM抗体的胶体金试纸条，其特征在于，所述IgM抗体为九项呼吸道感染病原体特异性IgM抗体，所述胶体金试纸条包括在聚氯乙烯底板上依次贴附的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合物垫为包覆有兔抗人IgM抗体‑胶体金结合物的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜依次包被有9条检测线和1条质控线，所述9条检测线分别为肺炎支原体重组抗原、肺炎衣原体重组抗原、甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、副流感病毒抗原、嗜肺军团菌抗原、Q热立克次体抗原、呼吸道合胞病毒抗原和腺病毒抗原，所述质控线为二抗。

【技术特征摘要】
1.检测IgM抗体的胶体金试纸条，其特征在于，所述IgM抗体为九项
呼吸道感染病原体特异性IgM抗体，所述胶体金试纸条包括在聚氯乙烯底
板上依次贴附的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合物
垫为包覆有兔抗人IgM抗体-胶体金结合物的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素
膜依次包被有9条检测线和1条质控线，所述9条检测线分别为肺炎支原
体重组抗原、肺炎衣原体重组抗原、甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗
原、副流感病毒抗原、嗜肺军团菌抗原、Q热立克次体抗原、呼吸道合胞
病毒抗原和腺病毒抗原，所述质控线为二抗。
2.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述样品垫为
玻璃纤维膜；优选地，所述吸水垫为吸水纸。
3.根据权利要求1或2所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述检测
线和质控线的各相邻线的间隔为3～4mm，优选为3mm；优选地，所述胶体
金试纸条的宽度为3～5mm，优选为4mm。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的胶体金试纸条，其特征在于，
所述样品垫与结合物垫之间重叠1～2mm，优选为1mm，所述结合物垫与硝
酸纤维素膜之间重叠1～2mm，优选为1mm，所述硝酸纤维素膜与吸水垫之
间重叠1～2mm，优选为1mm。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的胶体金试纸条，其特征在于，
选用的二抗为羊抗兔IgG抗体。
6.权利要求1至5中任一项所述的胶体金试纸条的制备方法，其特征
在于，该方法包括以下步骤：
(1)处理兔抗人IgM抗体：取200μg兔抗人IgM抗体置于透析袋中
对5mMTris-HCl进行透析24h，期间每隔2h换一次水；透析完成后，将抗
原取出置于离心管中，加入三蒸水至2mL，离心后弃去沉淀杂质，得到经

\t处理的兔抗人IgM抗体；
(2)采用柠檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金溶液：向烧杯中加入
1000mL三蒸水，然后加入10mL的1质量％的柠檬酸钠溶液，加热至沸腾
后，再加入15mL1质量％的氯金酸溶液，煮沸15min后至冷却，置于4℃
保存，得到胶体金溶液，其中金颗粒直径约为30～40nm；优选地，该步骤
中使用的玻璃仪器事先用洗液过夜浸泡，然后冲洗干净；
(3)制备结合物垫：取步骤(2)制备的胶体金溶液20mL置于烧杯
中，加入150μL0.1M的K2CO3溶液调节溶液的pH至7.0，搅拌均匀，然
后加入步骤(1)的经处理的兔抗人IgM抗体，搅拌20min，然后加入2mL
10质量％的牛血清白蛋白溶液，进行离心，离心时间40Min，转速为10000
rpm，然后弃去上清液，再加入1质量％的牛血清白蛋白的溶液继续离心，
弃去上清液，对沉淀物进行恢复，恢复液的成分为：1质量％的牛血清白蛋
白，0.5质量％的蔗糖，0.5质量％的酪蛋白钠，将其涂覆在200平方厘米大
小的玻璃纤维膜上面，-45℃冷冻后，作为结合物垫冻干备用；优选地，所
述结合物垫在冻干后在室温下避光保存备用；
(4)组装试纸：将样品垫、步骤(3)制备的结合物垫、硝酸纤维素
膜和吸水垫顺次彼此邻接地贴附在聚氯乙烯底板上，得到组装试纸；
(5)包被硝酸纤维素膜：使用划膜仪将肺炎支原体重组抗原溶液、肺
炎衣原体重组抗原溶液、甲型流感病毒抗原溶液、乙型流感病毒抗原溶液、
副流感病毒抗原溶液、嗜肺军团菌抗原溶液、Q热立克次体抗原溶液、呼
吸道合胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋兴宇，曹丰晶，张伟，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：北京;11