一种简易的制备粒径均匀PLGA微球的方法技术

本发明专利技术提供了一种改良的搅拌乳化方法用于粒径均匀的PLGA微球制备。利用本方法制备的微球粒径分布较窄，通过简单的离心富集即能以较高的产率获得粒径均匀的PLGA微球。其制备过程为：将PLGA溶解于二氯甲烷作为油相，将PVA溶液作为水相，将油相按一定比例分散到水相中，加入数颗2-8mm直径的玻璃珠辅助乳化，随后在磁力搅拌器下搅拌乳化；经挥发有机溶剂、洗涤、差速离心富集获得粒径均匀的PLGA微球。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及聚合物微球的制备工艺，特别涉及粒径分布均勾的PLGA微球，属于生 物医用材料

技术介绍
聚乳酸羟基乳酸（PLGA)是一种生物可降解的高分子材料，在体内可最终降解生 成二氧化碳和水，安全无毒且生物相容性好，被视为优良的医用材料，并已被美国食品和药 品管理局（FDA)批准用于临床。以PLGA材料制备的微球载体在生物医药领域具有重要用 途，受到广泛研究，包括药物递送、抗体制备、疫苗佐剂等。目前，FDA已经批准了多种基于 PLGA微球的药物制剂进入临床，如LupronD印ort等。2009年，我国SFDA也批准了 2种可 注射性的微球药物制剂上市。 PLGA微球的粒径是决定PLGA微球性能的关键因素之一，粒径不同，其用途与生物 学效应差异显著。粒径大小与均匀性的控制直接影响到PLGA微球应用的有效性与可重复 性。基于此，如何改进制备工艺，以制备大小可控、粒径均匀的PLGA微球一直以来是本领域 研究的重点之一。目前，关于PLGA微球的制备方法主要包括：1)搅拌乳化法；2)超声乳化 法；3)喷雾干燥法；4)膜乳化法。搅拌乳化法较为低廉简便，其通过搅拌速度与时间控制粒 径大小，但由于乳化过程中液体受力很不均匀，形成的颗粒大小很不均匀。尽管通过差速离 心可以使大小相当的微球得到一定程度的富集，但由于微球粒径分布较宽，富集获得的微 球产率很低（< 30% )。此外，利用该方法制备小尺寸微球需要极高的转速，如获得1-2 μ m 微球需要近万转/分的搅拌速度，需要较为专业的设备；超声乳化法一般用于制备纳米级 微球，不适合微米级微球的制备；喷雾干燥法不仅需要特殊装置，且制备颗粒大小的均匀性 差；膜乳化法获得PLGA颗粒均匀性较好，但所用的专业设备与耗材成本较高。由于现有方 法的上述局限性，使得许多研究制备的PLGA微球的质量与均一性不佳，结果重复性差；而 均一性较好的PLGA微球只能在较为专业的实验室完成。因此，发展一种颗粒均匀性好、简 便、可推广性强的PLGA微球制备方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种改进的搅拌乳化法，利用常规的搅拌器即能够以较高 的产率制备出较小尺寸、粒径均匀的PLGA微球载体，用于药物递送领域。 本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的： -种制备粒径均匀的PLGA微球方法，包括以下步骤： (1)将PLGA溶解到二氯甲烷有机溶剂中，得到油相，PLGA浓度6-20 % ; (2)将上述油相分散到聚乙烯醇水相中，向其中加入2-8mm直径的珠子，搅拌乳 化，聚乙烯醇1-4%，，油相与水相比例1 : 10-1 : 5; (3)取出珠子，使二氯甲烷有机溶剂充分挥发； (4)离心收集PLGA微球，并使用蒸馏水洗涤； (5)用蒸馏水重悬PLGA微球，差速离心10分钟以上，获得PLGA微球。 在一个实施方案中，PLGA材料分子量可为10-100kDa不等，LA/GA可为75 : 25， 50 : 50,25 : 75 不等； 在另一个实施方案中，珠子直径大小可以是2_8mm，优选4_6mm。另外珠子可以是 任何适宜材料的珠子，例如可以是玻璃珠、铜珠、铝珠等。 在另外一个实施方案中，乳化时转速不超过lOOOrpm。 在又一个实施方案中，在步骤（1)中加入药物以制备载药微球。其中所述药物可 以是溶解于二氯甲烷的药物，例如利福平。 本专利技术的有益效果是在珠子辅助的乳化下，使用常规的低速搅拌器，如磁力搅拌 器，即可达到很好的乳化分散效果，结合简单的差速离心方法，可获得粒径均匀的PLGA微 球。相对于现有技术而言，本方法设备简单，成本低廉，低速搅拌乳化即可获得直径小至 1 μ m的PLGA微球，所获的微球粒径分布均匀，富集产率高。【附图说明】 图1为常规搅拌乳化与玻璃珠辅助搅拌乳化示意图。la为常规搅拌乳化示意图； lb玻璃珠辅助搅拌乳化示意图； 图2为不同转速下，常规搅拌乳化与玻璃珠辅助搅拌乳化获得的PLGA微球光学照 片。其中，图2a为400转/分转速下常规搅拌3小时，2b为800转/分转速下常规搅拌3 小时，2c为400转/分转速下常规搅拌3小时，2d为400转/分转速下玻璃珠辅助搅拌3 小时，2e为800转/分转速下玻璃珠辅助搅拌3小时，2f为1000转/分转速下玻璃珠辅助 搅拌3小时（Bar = 20 μ m); 图3为不同转速下，常规搅拌乳化与玻璃珠辅助搅拌乳化获得的PLGA微球扫描电 镜照片及粒径分布。其中，图3a为400转/分转速下常规搅拌3小时，3b为800转/分转 速下常规搅拌3小时，3c为1000转/分转速下常规搅拌3小时，3d为400转/分转速下玻 璃珠辅助搅拌3小时，3e为800转/分转速下玻璃珠辅助搅拌3小时，3f为1000转/分转 速下玻璃珠辅助搅拌3小时（Bar = 5 μπι); 图4玻璃珠辅助乳化下，1000转/分乳化lh获得的PLGA微球大小； 图5不同离心力条件下差速离心获得的PLGA微球粒径分布与扫描电镜图片。其 中，图5a为50g离心力离心收集PLGA微球的粒径分布，5b为200g离心力离心收集PLGA微 球的粒径分布，5c为2000g离心力离心收集PLGA微球的粒径分布，5d为50g离心力离心收 集PLGA微球的扫描电镜图片，5e为200g离心力离心收集PLGA微球的扫描电镜图片，5f为 2000g离心力离心收集PLGA微球的扫描电镜图片。 图6. PLGA微球对利福平的缓释作用。其中，图6a为包裹利福平的PLGA微球每天 缓释利福平药物量；图6b为包裹利福平的PLGA微球随时间累积释放的利福平药物量。【具体实施方式】 下面通过以下实施例对本专利技术作进一步详细描述，以便本领域的技术人员进一步 理解本专利技术，但不对本专利技术构成任何限制。 实施例1 :玻璃珠辅助下PLGA微球制备 (1)油相的制备：称取PLGA 0. 6g，溶解到lOmL二氯甲烷中，配制6 %的PLGA溶 液； (2) PVA水溶液的制备：称取2. 5g PVA固体，加入到lOOmL蒸馏水中，加热搅拌充 分溶解，配制成2. 5%的PVA水溶液； (3)玻璃珠辅助乳化：在大小适当的玻璃瓶中，每瓶加入10mL 2. 5%的PVA溶液， 并将lmL 6%的PLGA油相溶液分散其中，随后加入磁力搅拌器转子与数个4-6mm直径的玻 璃珠，分别在400转/分、800转/分、1000转/分转速下开搅拌3小时； (4)有机溶剂的挥发：玻璃珠辅助乳化完成后，取出玻璃珠，低速搅拌12-24小时， 使二氯甲烷有机溶剂充分挥发； (5) PLG当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种简易的制备粒径均匀PLGA微球的方法，包括以下步骤：(1)将PLGA溶解到二氯甲烷有机溶剂中，得到油相，PLGA浓度6‑20％；(2)将上述油相分散到聚乙烯醇水相中，向其中加入2‑8mm直径的珠子，搅拌乳化，聚乙烯醇浓度1‑4％，油相与水相比例1∶10‑1∶5；(3)取出珠子，使二氯甲烷有机溶剂充分挥发；(4)离心收集PLGA微球，并使用蒸馏水洗涤；(5)用蒸馏水重悬PLGA微球，差速离心10分钟以上，获得PLGA微球。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志强，冯晓燕，张贺秋，段翠密，修冰水，张旭辉，杨锡琴，阙海萍，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11