本胃饥饿素是一种多肽激素，它能与生长激素促分泌激素1a受体(GHS-R1a，胃饥饿素受体)结合，促进哺乳动物发生肥胖和肥胖症。胃饥饿素与其受体作为治疗性干预的靶点，用于治疗与肥胖相关的疾病与癌症。本发明专利技术披露了一种可以在外周结合胃饥饿素的可溶性GHS-R1a受体诱饵，能阻止胃饥饿素与细胞GHS-R1受体结合以拮抗胃饥饿素的作用，达到了治疗肥胖有关的疾病和治疗癌症的目的。GHS-R1a是一种跨膜蛋白，它由位于细胞膜外的N端(Nt)，7个跨膜结构和3个细胞外环状结构(EC1,EC2和EC3)连接而成。Nt、EC1和EC2连接在一起，当受体的跨膜结构缺失，并与免疫球蛋白的Fc片段融合后产生的GHS-R1诱饵是一种新的融合蛋白GHSR-Fc，它能对进食高脂肪饮食(HFD)的小鼠体重增加起抑制作用，并能预防其发生肥胖病，同时对Nt和ECs部分并无显著的影响。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】一种生长激素促分泌激素受体相关蛋白、核酸、制备方法及 其应用 本申请要求基于2013年3月14日提出的美国临时专利申请N0. 61/748, 267优先 权的U.S.C. § 119权益的PCT国际申请案，其全部内容在此并入本文作为参考。
本专利技术涉及一种化合物及其应用，以用于遏制体重的过度增加、预防和治疗肥胖 症及其相关疾病。
技术介绍
过度肥胖是促成许多慢性疾病包括II型糖尿病、心血管疾病和癌症的危险因子 (Wang&MecPherson2011)。研究结果表明，适度地减轻体重对减轻心血管危险因子都有积 极的作用（Blackburn1995，Pi-Suneyer1996)同时还减少了II型糖尿病及糖尿病并发症 的危险（Bosello，Armellinietal1997)。 干预生活方式是目前推荐的一线控制体重的方法，其目的是通过行为方式的改变 减少卡路里的摄入和增加体力活动。但仅用这些方法与药物干预保持体重减轻相比（6-12 个月）并不成功（GreyCooperetal. 2012)。很不幸，已经批准上市的大多数治疗肥胖病 的这类药物由于其副作用而不再使用（GreyCooperetal2012)。最近，用于治疗肥胖病 的肠激素获得了业界的关注（Neary&Batterham，2009)。的确，通过注射胰高血糖素类似 肽-l(GLP-l)和YY肽（PYY)以作用于人类大脑进食中枢能够降低食欲（DeSilva，Salem etal，2011)。另一个有前景的候选药物是来自胃的多肽激素胃饥饿素。体内循环的胃饥饿 素在体内的峰值是发生在体内能量衰竭状态下，它能激活食欲、促进神经肽Y(NPY)和位于 下丘脑弓状核的刺鼠基因相关多肽（AgRP)神经（Nakazato,Murakamietal. 2001)。这一 行为是通过胃饥饿素结合生长激素促分泌激素受体（GHS-Rla)而实现的（Kamegai，TamUra etal. 2000)。除了影响食欲，胃饥饿素还能促进脂肪细胞的分化和在脂肪组织优先储存卡 路里（Tschop，Smileyetal· 2000,Rodriguez,Gomez-Ambrosietal· 2009)。 胃饥饿素多肽源自胃饥饿素前体，它是多肽前体通过降解产生乙酰化的胃饥饿 素（AG) (Zhu，Caoetal· 2006)、非乙酰化的胃饥饿素（UAG)和肥胖抑制素（Zhang，Ren etal· 2005)。然而，体外实验研究表明，UAG(Kojima，Hosodaetal· 1999)和肥胖抑制素 (Zhang,Renetal· 2005)不能与GHS-Rla结合。GHS-Rla是G蛋白偶联的受体（Howard， Feighneretal· 1996)，通过与其唯一的内源性配体AG结合而激活（Kojima,Hosodaet al. 1999)。最近的一项研究表明AG与GHS-Rla受体的结合，发生于受体位于细胞外的第二 个环状结构（EC2)，形成的一个疏水性的口袋。胃饥饿素在与受体的结合过程中，其乙酰化 疏水侧链能保持稳定（Pedretti,Villaetal· 2006)。
技术实现思路
本专利技术披露了一种体内表达的GHS-Rla融合构建体，它是含有N端和细胞外结合 结构域的环状结构1和环状结构2的融合蛋白（GHSR/Fc)，令人感兴趣的是它能引起AG的 减少，但不影响UAG的水平，能使饮食高脂肪食物的小鼠避免体重增加，使小鼠的脂肪基 因表达发生改变，葡萄糖清除率和胰岛素敏感性得到改善。观察到的这些现象表明：这种 GHSR/Fc融合蛋白可能在治疗肥胖病及其相关疾病方面有临床应用价值。 -方面，本专利技术提供了一种可溶性的融合分子，其至少包括（a)生长激素促分泌 素受体（GHS-Rla)的以下部分之一：i)N-端区域，ii)胞外环状结构1，iii)胞外环状结构 2,与（b)连接到融合部分。 具体讲，可溶性的融合分子至少包含GHS-Rla的：i)N_端区域，ii)胞外环状结 构1和iii)胞外环状结构2中的两个，连接到融合部分。换言之，可溶性的融合分子包含 GHS-Rla的i)N-端区域，ii)胞外环状结构1和iii)胞外环状结构2连接到融合部分。更 具体地讲，可溶性的融合分子是由GHS-Rla的i)N-端区域，ii)胞外环状结构1和iii)胞 外环状结构2,连接到融合分子组成。 在一实施例中，GHS-Rla的N端的氨基酸序列如SEQIDN0 :4或13所示，或是其变 异体。胞外环状结构1的氨基酸序列如SEQIDN0 :6或15所示，或是其变异体。胞外环状 结构2的氨基酸序列如SEQIDN0 :8或17所示，或是其变异体。 在一实施例中，GHS-Rla的N端结构域由SEQIDN0 :4或13所示的核苷酸序列转 录，或是由其变异体转录。胞外环状结构1的结构域由核苷酸序列SEQIDN0 :6或15转 录，或是由其变异体转录。胞外环状结构2由核苷酸序列SEQIDN0 :7或16转录，或是由 其变异体转录。 在一实施例中，融合分子是一段稳定性分子。该分子或为稳定性蛋白质分子或为 聚合物。在一实施例中，稳定性蛋白质分子为免疫球蛋白的稳定结构域（Fc)或为白蛋白分 子。在一实施例中，，Fc结构域是IgG的Fc结构域，优选IgG2或IgG4。在另一实施例中， 稳定性聚合物为聚乙二醇。 本专利技术的可溶性融合分子可以直接或是通过一段连接肽连接不止一段的细胞外 GHS-Rla的结构域，并且/或者GHS-Rla细胞外的结构域与融合结构的连接。 在一实施例中，可溶性融合分子具有如SEQIDN0 :2或11所示氨基酸序列，或是 其变异体。由核苷酸序列SEQIDN0 :1或10转录，或为其变异体转录。 本专利技术同样提供了核苷酸分子编码的可溶性融合分子。其中a)和b)为蛋白质， 由随意选取的连接肽连接。 在另一实施例中，本专利技术提供了通过分离提取得到的一段核苷酸序列，该序列编 码GHS-Rla蛋白的N端结构域。在一实施例中，该提取的核苷酸包括核苷酸序列如序列SEQ IDN0 :3或12所示，由其编码的氨基酸序列如SEQIDN0 :4或13所示。在另一实施例中， 本专利技术提供了通过分离提取得到的一段核苷酸序列，该序列编码GHS-Rla蛋白的环状结构 1的结构域。在一实施例中，该提取的核苷酸包括核苷酸序列如SEQIDN0 :5或14所示， 或由其变异体组成，由其编码的氨基酸序列如SEQIDN0 :6或15所示，或由其变异体组成。 进一步提供了通过分离提取得到的一段核苷酸序列，该序列编码GHS-Rla蛋白的环状结构 2的结构域。在一实施例中，该核苷酸序列如SEQIDN0 :7或16所示，或由其变异体组成， 由其编码的氨基酸序列如SEQIDN0 :8或17所示，或由其变异体组成。 本专利技术提供了一种宿主细胞含有披露的核苷酸分子 本专利技术进一步提供了一种药学上的组成，该组成为本专利技术披露的可溶性融合分 子，该组成亦为本专利技术提供的核酸分子，该组成为本专利技术提供的宿主细胞，或是GHS-Rla的 细胞外结构域，或是一种载体，一种药学上可接受的载体。在一实施例中，GHS-Rla的细胞 外结构域可以是N端序列本文档来自技高网...
【技术保护点】
一个可溶性融合分子包含：a)至少包含生长激素促分泌素受体(GHS‑R1a)的以下部分之一：i)N‑端区域,ii)胞外环状结构1,iii)胞外环状结构2，连接到b)融合部分。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：王庆华，尤尼思·安尼尼，
申请(专利权)人：王庆华，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。