本发明专利技术属于生化行业领域，特别涉及一种利用双酶解法制备肝素钠的方法。该利用双酶解法制备肝素钠的方法包括以下步骤：采用双酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离，然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来，提高肝素钠收率。采用双酶解可以适当降低盐浓度，减轻污染，降低蒸汽用量和降温水用量。大生产可以采用猪胰脏活化后使用，每6吨反应液猪胰脏成本100元左右。猪胰脏成本和蒸汽成本可以抵消。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】(一)
本专利技术属于生化行业领域，特别涉及。(二)
技术介绍
肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖，主要存在与肥大细胞中，具有抗凝血作用，被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗死等的治疗。肝素的分子量大约3000— 37500，对商品肝素的研究提示至少有21种分子个体，肝素钠是肝素的钠盐。肝素钠作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视.也是我国主要的出口药物之一，随着研究的深入，人们发现肝素钠不但有抗凝、抗血栓形成和调节血脂的作用，还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等功能。肝素钠粗品是我国的传统出口产品，在国际上占有重要的地位。但是传统生产工艺落后，肝素钠产率低，肝素钠产品质量不稳定。(三)
技术实现思路
本专利技术为了弥补现有技术的不足，提供了一种疗效快、治愈率高的利用双酶解法制备肝素钠的方法。本专利技术是通过如下技术方案实现的: ，包括以下步骤: (1)酶解:取小肠粘膜，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0-4.0%，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.5-8，每4kg小肠粘膜加入胰酶0.8g，加热至温度45_55°C，保温I小时后，过80目滤膜，收集过滤液，在滤液中加入2709碱性蛋白酶，保温I小时； (2)升温:步骤(I)结束后，将步骤(I)中酶解中的滤液加热至温度60-65°C，保温5分钟，过80目滤膜，收集过滤液； (3)树脂吸附:将步骤(2)中所得过滤液加入到吸附罐中，每40L滤液中加4-6g树脂，进行搅拌，然后降温至55°C，保温55°C并搅拌吸附8小时后过滤，放出废液； (4)洗脱:步骤(3)结束后，收集过滤后的树脂，每克树脂中加入质量分数为24%的饱和盐水20ml，保持55°C洗脱，收集洗脱液；(5)醇沉:将步骤(4)中收集的洗脱液过滤，然后移入沉淀罐中，加入乙醇沉淀肝素钠；(6)烘干:步骤(5)结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。其中，步骤(I)中所述小肠粘膜与肠衣专用盐的质量比例为100:3-4 ;小肠粘膜与2709碱性蛋白酶的质量比为4000:1-2。其中，步骤(I)中所述小肠粘膜与水的质量比1:9。其中，步骤(I)中所述胰酶与2709碱性蛋白酶的重量比4:5-10。其中，步骤(2 )中所述步骤(I)中酶解中的滤液的温度为50-55 °C。传统生产工艺在肝素钠生产过程中，往往对料渣不做处理直接倒掉。而料渣中解离不完全的肝素钠也料渣一起倒掉，致使产品收率低。本专利技术通过双酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离，然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来，提高肝素钠收率。采用双酶解可以适当降低盐浓度，减轻污染，降低蒸汽用量和降温水用量。大生产可以采用猪胰脏活化后使用，每6吨反应液猪胰脏成本100元左右。猪胰脏成本和蒸汽成本可以抵消。本专利技术的有益效果是:本专利技术能解决单酶解工艺中酶解液活性低的问题，采用双酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离，然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来，提高肝素钠收率。(四)【具体实施方式】实施例1: ，通过下述步骤实现: (O酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜500kg，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.5%，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.8，加胰酶100g，加热至温度升至51°C，保温I小时后，过80目膜过滤，收集过滤液，加入2709碱性蛋白酶125g，保温I小时。(2)升温:步骤(I)结束后，加热至温度升至63°C，保温5分钟，过80目膜过滤，收集过滤液。(3)树脂吸附:步骤(2)结束后，将上述所得过滤液加入到吸附罐中，搅拌，降温至550C，加500g树脂，保温55°C，搅拌吸附8小时，过滤，放出废液。(4)洗脱:步骤(3)结束后，收集过滤树脂，各加饱和盐水694.4ml，保持55°C洗脱。(5)醇沉:步骤(4)结束后，反复冲洗过滤后的树脂，将冲洗干净的树脂，倒入到洗脱器，收集洗脱液，将洗脱液过滤移入沉淀罐中，加入酒精沉淀肝素钠。(6)烘干:步骤(5)结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。实施例2: ，通过下述步骤实现: (I)酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜600kg，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0%，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.5，加胰酶120g，加热至温度升至45°C，保温I小时后，过80目膜过滤，收集过滤液，加入2709碱性蛋白酶300g，保温I小时。(2)升温:步骤(I)结束后，加热至温度升至60°C，保温5分钟，过80目膜过滤，收集过滤液。(3)树脂吸附:步骤(2)结束后，将上述所得过滤液加入到吸附罐中，搅拌，降温至550C，加650g树脂，保温55°C，搅拌吸附8小时，过滤，放出废液。(4)洗脱:步骤(3)结束后，收集过滤树脂，各加饱和盐水903ml，保持55°C洗脱。(5)醇沉:步骤(4)结束后，反复冲洗过滤后的树脂，将冲洗干净的树脂，倒入到洗脱器，收集洗脱液，将洗脱液过滤移入沉淀罐中，加入酒精沉淀肝素钠。(6)烘干:步骤(5)结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。实施例3: ，通过下述步骤实现: (I)酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜800kg，加入肠衣专用盐至料液的盐度为4.0%，与水一起置于酶解罐中，调节PH8，加胰酶160g，加热至温度升至55°C，保温I小时后，过80目膜过滤，收集过滤液，加入2709碱性蛋白酶300g，保温I小时。(2)升温:步骤(I)结束后，加热至温度升至65°C，保温5分钟，过80目膜过滤，收集过滤液。(3)树脂吸附:步骤(2)结束后，将上述所得过滤液加入到吸附罐中，搅拌，降温至550C，加1200g树脂，保温55°C，搅拌吸附8小时，过滤，放出废液。(4)洗脱:步骤(3)结束后，收集过滤树脂，各加饱和盐水1667ml，保持55°C洗脱。(5)醇沉:步骤(4)结束后，反复冲洗过滤后的树脂，将冲洗干净的树脂，倒入到洗脱器，收集洗脱液，将洗脱液过滤移入沉淀罐中，加入酒精沉淀肝素钠。(6)烘干:步骤(5)结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。【主权项】1.，其特征在于:包括以下步骤:(I)酶解:取小肠粘膜，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0-4.0%，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.5-8，每4kg小肠粘膜加入胰酶0.8g,加热至温度45_55°C，保温I小时后，过80目滤膜，收集过滤液，在滤液中加入2709碱性蛋白酶，保温I小时； (2)升温:步骤(I)结束后，将步骤(I)中酶解中的滤液加热至温度60-65°C，保温5分钟，过80目滤膜，收集过滤液； (3)树脂吸附:将步骤(2)中所得过滤液加入到吸附罐中，每40L滤液中加4-6g树脂，进行搅拌，然后降温至55°C，保温55°C并搅拌吸附8小时后过滤，放出废液； (4)洗脱:步骤(3)结束后，收集过滤后的树脂，每克树脂中加入质量分数为24%的饱和盐水20ml，保持55°C洗脱，收集洗脱液； (5)醇沉:将步骤(4)中收集的洗脱液过滤，然后移入沉淀罐中，加入乙醇沉淀肝素钠； (6)烘干:步骤(5)结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用双酶解法制备肝素钠的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）酶解:取小肠粘膜，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0‑4.0%，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.5‑8，每4kg小肠粘膜加入胰酶0.8g,加热至温度45‑55℃，保温1小时后，过80目滤膜，收集过滤液，在滤液中加入2709碱性蛋白酶，保温1小时；(2)升温:步骤（1）结束后，将步骤（1）中酶解中的滤液加热至温度60‑65℃，保温5分钟，过80目滤膜，收集过滤液；(3)树脂吸附:将步骤（2）中所得过滤液加入到吸附罐中，每40L滤液中加4‑6g树脂，进行搅拌，然后降温至55℃，保温55℃并搅拌吸附8小时后过滤，放出废液；(4)洗脱:步骤（3）结束后，收集过滤后的树脂，每克树脂中加入质量分数为24%的饱和盐水20ml，保持55℃洗脱，收集洗脱液；(5)醇沉:将步骤（4）中收集的洗脱液过滤，然后移入沉淀罐中，加入乙醇沉淀肝素钠；(6)烘干:步骤（5）结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谢成君，甄爱华，刘敏，
申请(专利权)人：山东绅联生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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