一种NKT细胞培养基和NKT细胞培养方法技术

本发明专利技术属于细胞培养领域，尤其涉及一种NKT细胞培养基和NKT细胞培养方法。本发明专利技术提供的NKT细胞培养基包括白蛋白、维生素C、人参皂苷、香菇多糖、细胞因子和无血清基础培养基，能够有效促进NKT细胞的诱导扩增，提高培养获得的NKT细胞的毒性。实验结果表明，采用本发明专利技术提供的培养基进行NKT细胞体外培养时，其NKT细胞扩增量，培养获得的NKT细胞的CD3+、CD56+双阳性表达量，以及培养获得的NKT细胞对K562细胞的毒性效果都远远优于传统培养基，说明本发明专利技术提供的NKT细胞培养基有利于NKT细胞的诱导扩增，能够提高培养获得的NKT细胞的毒性效果，进而提高培养获得的NKT细胞的疾病治疗效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞培养领域，尤其设及一种NKT细胞培养基和NKT细胞培养方法。
技术介绍
NKT(na化ralkillerT)细胞是一群细胞表面既有T细胞受体TCR，又有NK细胞 受体的特殊T细胞亚群。近年来研究显示，NKT细胞作为一类新的免疫调节细胞在抗肿瘤 免疫，克服移植排斥，W及抑制自身免疫性疾病的发生中发挥着至关重要的作用。NKT细胞 的功能异常与多种临床疾病，如：肿瘤的转移，自身免疫性疾病（糖尿病，系统性红斑狼疮， 多发性硬化等）的发生有关。研究还显示，调控NKT细胞的功能可达到对肿瘤W及多种人 类疾病的治疗效果。 如今，很多研究在探讨NKT细胞的体外培养，从而为自身免疫性疾病、移植排斥W 及多种肿瘤的治疗开辟一条新的途径。常见的NKT细胞体外培养方法是在添加相应细胞因 子的培养基中培养外周血单个核细胞（PBMC)，在细胞因子的刺激下诱导PBMC成为NKT细 胞。目前，最常使用的NKT细胞培养基是添加细胞因子的含有10%胎牛血清的RPMI1640培 养基，但采用此种培养基培养NKT细胞时，NKT细胞的扩增倍数较低，且培养获得的NKT细 胞的毒性较差。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种NKT细胞培养基和NKT细胞培养方法，本发 明提供的培养基有利于NKT细胞的诱导扩增，提高NKT细胞的毒性。 本专利技术提供了一种NKT细胞培养基，包括白蛋白、维生素C、人参皂巧、香茹多糖、 细胞因子和无血清基础培养基。 优选的，所述白蛋白在所述NKT细胞培养基中的含量为5~lOwt%。 优选的，所述维生素C在所述MT细胞培养基中的含量为1~10yg/mL。 优选的，所述人参皂巧在所述MT细胞培养基中的含量为5~15yg/血。 优选的，所述香茹多糖在所述NKT细胞培养基中的含量为5~15yg/mL。 优选的，所述细胞因子在所述NKT细胞培养基中的含量为1~lOiig/mL。 优选的，所述细胞因子包括白细胞介素-2和/或白细胞介素-15。[001引本专利技术提供了一种NKT细胞培养方法，包括W下步骤：a)、使用上述技术方案所述的NKT细胞培养基培养外周血单个核细胞，获得NKT细 胞。 优选的，所述步骤a)具体包括W下步骤：[001引 al)、外周血单个核细胞在所述NKT细胞培养基中重悬，得到细胞悬液；a2)、将所述细胞悬液接种到细胞培养容器中进行培养，获得NKT细胞。 优选的，所述细胞悬液中的外周血单个核细胞密度为0. 5XIO6~5X10 6个/mL。 与现有技术相比，本专利技术提供了一种MT细胞培养基和MT细胞培养方法。本发 明提供的MT细胞培养基包括白蛋白、维生素C、人参皂巧、香茹多糖、细胞因子和无血清基 础培养基。本专利技术提供的NKT细胞培养基含有白蛋白、维生素C、人参皂巧和香茹多糖，通过 四者的协同作用，能够有效促进NKT细胞的诱导扩增，提高培养获得的NKT细胞的毒性。实 验结果表明，采用本专利技术提供的培养基进行NKT细胞体外培养时，其NKT细胞扩增量，培养 获得的NKT细胞的CD3+、CD56+双阳性表达量，W及培养获得的NKT细胞对K562细胞的毒 性效果都远远优于传统培养基，说明本专利技术提供的NKT细胞培养基有利于NKT细胞的诱导 扩增，能够提高培养获得的NKT细胞的毒性效果，进而提高培养获得的NKT细胞的疾病治疗 效果。 此外，在本专利技术提供的优选实施方式中，所提供的NKT细胞培养基不含有血清成 分，避免了血清中不确定成分对细胞培养安全性的影响。【附图说明】 为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可W根据 提供的附图获得其他的附图。 图1是本专利技术实施例5提供的细胞生长曲线图； 图4是采用实施例4提供的培养基培养得到的NKT细胞对K562细胞的毒性效果； [002引图5是采用对比例提供的培养基培养得到的NKT细胞对K562细胞的毒性效果。【具体实施方式】 下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例 仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范 围。 本专利技术提供了一种NKT细胞培养基，包括白蛋白、维生素C、人参皂巧、香茹多糖、 细胞因子和无血清基础培养基。[002引本专利技术提供的NKT细胞培养基包括白蛋白、维生素C、人参皂巧、香茹多糖、细胞因 子和无血清基础培养基。其中，所述白蛋白又称清蛋白，其在本专利技术中的主要作用是为细胞 提供氮源等有效营养成分。在本专利技术提供的一个实施例中，所述白蛋白为人血白蛋白。在 本专利技术提供的一个实施例中，所述白蛋白在所述NKT细胞培养基中的含量为5~IOwt%;在 本专利技术提供的另一个实施例中，所述白蛋白在所述NKT细胞培养基中的含量为7~1Owt%。 本专利技术对所述白蛋白的来源没有特别限定，采用市售商品即可。 在本专利技术中，所述维生素C的主要作用是作为一种抗氧化剂，保护细胞免受自由 基的伤害。在本专利技术提供的一个实施例中，所述维生素C在所述NKT细胞培养基中的含量 为2~5yg/mL;在本专利技术提供的另一个实施例中，所述维生素C在所述NKT细胞培养基中 的含量为2~5yg/mL。本专利技术对所述维生素C的来源没有特别限定，采用市售商品即可。 在本专利技术中，所述人参皂巧的主要作用是促进MT细胞在培养过程中成熟分 化。在本专利技术提供的一个实施例中，所述人参皂巧在所述NKT细胞培养基中的含量为5~ 15yg/mL;在本专利技术提供的另一个实施例中，所述人参皂巧在所述NKT细胞培养基中的含 量为8~12yg/mL。本专利技术对所述人参皂巧的来源没有特别限定，采用市售商品即可。 在本专利技术中，所述香茹多糖的主要作用是通过与人参皂巧协同作用，从而促进NKT 细胞在培养过程中成熟分化。在本专利技术提供的一个实施例中，所述香茹多糖在所述NKT细 胞培养基中的含量为5~15yg/mL;在本专利技术提供的另一个实施例中，所述香茹多糖在所 述NKT细胞培养基中的含量为8~12yg/mL。本专利技术对所述香茹多糖的来源没有特别限 定，采用市售商品即可。 在本专利技术中，所述细胞因子为可将外周血单个核细胞诱导成为NKT细胞的细胞因 子，所述细胞因子包括但不限于白细胞介素-2和/或白细胞介素-15。在本专利技术提供的一 个实施例中，所述细胞因子在所述NKT细胞培养基中的含量为1~10yg/mL;在本专利技术提 供的另一个实施例中，所述细胞因子在所述NKT细胞培养基中的含量为4~6yg/mL。在 本专利技术提供的一个实施例中，所述白细胞介素-2在所述NKT细胞培养基中的含量为1~ 5yg/mL;在本专利技术提供的另一个实施例中，所述白细胞介素-2在所述NKT细胞培养基中的 含量为2~3yg/mL。在本专利技术提供的一个实施例中，所述白细胞介素-15在所述NKT细胞 培养基中的含量为1~5yg/mL;在本专利技术提供的另一个实施例中，所述白细胞介素-15在 所述NKT细胞培养基中的含量为2~3yg/mL。本专利技术对所述细胞因子的来源本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种NKT细胞培养基，包括白蛋白、维生素C、人参皂苷、香菇多糖、细胞因子和无血清基础培养基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海佳，王一飞，葛啸虎，曾维杰，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44