PHF20和JMJD3组合物及其在肿瘤免疫治疗中的使用方法技术

调节哺乳动物体细胞重编程的药物组合物和治疗方法，特别是能对人细胞重编程进行体内体外的正向和负向调节的药物组合物和治疗方法。这一发明专利技术提供了PHF20来源的复合物和有用的方法用于癌症免疫治疗，特别是乳腺癌的治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】优先权信息本申请要求申请日为2013年2月26日、专利申请序列号为61/769,545的审查中的美国专利申请的优先权，该专利申请内容通过参考并入本申请中。相关技术描述人及小鼠的体细胞均可通过四个关键转录因子：Oct4，Sox2，Klf4和c-Myc(Okitaetal.,2007；Takahashietal.,2007b；TakahashiandYamanaka,2006；Yuetal.,2007)被重编程为类似于多能胚胎干细胞(ESC)的状态，从而产生诱导多能干细胞(iPSCs)。基于iPSCs与ESCs在基因表达谱、表观遗传/基因标记以及自我更新和分化成多种细胞的能力方面的相似性，它在人类疾病模型的建立，药物筛选，甚至治疗应用方面拥有巨大的潜能(PlathandLowry,2011；RobintonandDaley,2012)。尽管采用以下几种方法均可以实现体细胞的重编程，包括诱导四个转录因子的表达，蛋白转导以及小RNA(miRNA)表达(RobintonandDaley,2012；StadtfeldandHochedlinger,2010)，不管是依赖或不依赖小分子化合物，其效率及iPSC产生的动力仍不理想。这表明，在重编程过程有大量的遗传和表观遗传的的障碍存在(Hannaetal.,2009；Smithetal.,2010)。许多因素，包括细胞增殖和细胞周期，间充质细胞到上皮细胞的转化以及表观遗传对组蛋白修饰和DNA甲基化的调节均可影响重编程效率(PappandPlath,2011；StadtfeldandHochedlinger,2010)。瞬时强迫细胞表达重编程因子会产生可分离的事件，开始是间质细胞到上皮细胞的转化引起的体细胞标记物YHYI的丢失，接着激活胚胎标记物，例如碱性磷酸酶(AP)以及胚胎抗原1(SSEA1)(Lietal.,2010；PlathandLowry,2011)。诱导和维持内源性多能基因，例如Nanog和Oct4，需要在DNA甲基化和组蛋白修饰方面进一步进行表观遗传修饰(StadtfeldandHochedlinger,2010)。如果不能及时达到这些表观遗传的变化，可能会导致部分重编程诱导多能干细胞。在重编程过程中，全面分析常染色质的动态变化可以揭示在组蛋白修饰水平精细的表观遗传的改变(Gaspar-Maiaetal.,011；Hembergeretal.,2009；HochedlingerandPlath,2009；Kocheetal.,2011)。异位表达染色质重塑蛋白，例如Brg-1和Brf155可以增强四个因子介导的重编程效率(Gaspar-Maiaetal.,2009；Singhaletal.,2010)。ESCs和iPSCs都含有“二价结合域”，在这一区域核体标记为组氨酸3-赖氨酸27和组氨酸3-赖氨酸4三甲基化(H3K27me3和H3K4me3)(Gaspar-Mafiaetal.,2011；HochedlingerandPlath,2009)。而PcG复合体介导H3K27甲基化并且抑制基因阻遏(Caoetal.,2002；MargueronandRinberg,2011),Jmjd3和Utx介导H3K27去甲基化(Aggeretal.,2007；Hongetal.,2007；Jepsenetal.,2007；Kouzarides,2007；Lanetal.,2007)。因此，根据表观遗传因素在决定细胞谱系方面的重要性，可以合理推测在体细胞重编程过程中，一些因子是体细胞重编程高效进行所必须的，而另外一些因子可能起负调控作用。如果要除去这些重编程过程中路障，需要增加了解这些表观遗传分子的作用机制，即哪一种表观遗传因子控制细胞系从而影响重编程的动态过程。专利技术概要Jmjd3被鉴定为是重编程过程中的重要负调控分子。Jmjd3缺陷的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)与野生型相比明显会产生更多的iPSC克隆，而Jmjd3异位表达可以显著抑制重编程。Jmjd3的抑制作用通过组氨酸脱甲基酶依赖性及非依赖性两种途径实现，而后者是完全新颖的并包括Jmjd3靶向PHF20并通过招募E3连接酶Trim26而进行泛素化和降解。PHF20缺陷的MEFs即便在Jmjd3,Ink4a或p21敲低的条件下也不能转换为完全重编程的iPSCs，说明PHF20这一蛋白在重编程过程中起主导作用。因此，本专利技术提供了诱导多能干细胞形成的方法，包括在细胞中抑制或阻止Jmjd3基因的表达及抑制JMJD3蛋白的活性，例如通过在细胞培养中添加JMJD3的拮抗剂。还发现PHF20在超过90％的乳腺癌组织中过表达，可作为一个新的乳腺癌抗原，在介导强的抗肿瘤免疫反应中起重要作用。因此提供了靶向PHF20的乳腺癌免疫疗法。一个实施方案中，提供了联合免疫疗法，该联合免疫疗法产生PHF20抗原特异性免疫反应，同时抑制乳腺癌肿瘤生长。另一个实施方案中，给予有需求的患者负载有纳米脂质体的树突状细胞(DC)与具有抗-PD-1(程序性死亡-1)闭锁的siRNAs或抗人PD1(抗-PD1)抗体联合应用，所述纳米脂质体含有PHF20肽，其中PHF20/DC免疫接种增强抗原特异性T细胞的前体，而抗-PD-1闭锁增加抗原特异性T细胞反应，(从而)抑制肿瘤生长并降低非特异性免疫反应或副作用。另一个实施方案中，可以用包含抗PHF20抗体的合适制备物靶向肿瘤特异的PHF20，所述抗PHF20抗体优选人源化、或人、单克隆抗体。本专利技术还提供了药物组合物，包括PHF20肽及药学上可接受的赋形剂，PHF20肽来源于PHF20蛋白，是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的表位。PHF20肽，优选人的PHF20肽，可以激活T细胞，从而使T细胞能够识别负载有PHF20肽的T2细胞或PHF20阳性的乳腺癌细胞。在一个实施方案中，本专利技术提供了一种疫苗或药物组合物，所述疫苗或药物组合物包含PHF20肽、编码PHF20肽的核酸分子、或包含编码PHF20肽的核酸分子的表达载体。在本专利技术的一个实施方案中，提供了PHF20肽特异性的分离的T细胞，优选CTL，或者用PHF20肽刺激外周血单核细胞(PBMCs)产生的分离的T细胞。本专利技术还提供了治疗乳腺癌的方法，包括以下步骤(a)从对象分离细胞群，该细胞群包含或能够产生CTLs和/或TH细胞；(b)用PHF20肽处理所述细胞群，任选与增生剂联用；(c)筛选所述细胞群中对PHF20肽特异的CTLs或TH细胞或它们的混合；以及(d)给本文档来自技高网...

【技术保护点】
药物组合物，包含PHF20肽和药学上可接受的赋形剂，所述PHF20肽来源于PHF20蛋白并作为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.02.26 US 61/769,5451.药物组合物，包含PHF20肽和药学上可接受的赋形剂，所述PHF20肽来源于
PHF20蛋白并作为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，PHF20肽能够刺激活化T细胞，使T
细胞能够识别负载有PHF20肽的T2细胞或者PHF20-阳性的乳腺癌细胞。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，产生PHF20肽的PHF20蛋白是人类的
PHF20蛋白。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，PHF20肽包含选自SEQIDNOs:1-
10的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，PHF20肽包含氨基酸序列WQFNLLTHV
(SEQIDNO:2)。
6.根据权利要求1所述的药物组合物，还包含佐剂。
7.一种在有需求的对象中治疗、预防、或管理乳腺癌的方法，包括给予所述对
象权利要求1所述的药物组合物。
8.根据权利要求7所述的方法，还包括给予对象免疫反应调节剂。
9.根据权利要求7所述的方法，其中，患者树突状细胞的负性调控分子被敲减。
10.根据权利要求7所述的方法，其中，给予患者所述药物组合物的同时或者之
后，诱导患者的的抗-PD-1闭锁。
11.根据权利要求10所述的方法，其中，给予患者有效剂量的抗-PD-1siRNA。
12.根据权利要求10所述的方法，给予患者有效剂量的抗-PD-1抗体。
13.根据权利要求7所述的方法，所述对象是人。
14.根据权利要求7所述的方法，其中，给予有需求的对象负载在树突状细胞上
的PHF20肽。
15.根据权利要求7所述的方法，其中，在使患者足以产生细胞毒性T细胞(CTL)
反应的条件下给予患者所述药物组合物。
16.一种疫苗，包括编码PHF20肽的核酸分...

【专利技术属性】
技术研发人员：王荣福，王羿成，赵蔚，
申请(专利权)人：王荣福，王羿成，赵蔚，
类型：发明
国别省市：美国;US