一种抑制落叶松枯梢病菌生长的化合物制造技术

本发明专利技术发现对落叶松枯梢病菌具有抑菌和杀菌活性的化合物。其落叶松枯梢病菌的最小抑菌浓度MIC值为0.5μg/mL，最小杀菌浓度MBC值为1μg/mL。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及化合物的新用途，阐明药物化学结构与细菌的生物活性之间的关系， 更具体的说，是探索化合物对落叶松枯梢病菌的抑菌和杀菌活性。
技术介绍
落叶松属于松科中的落叶松亚科，是我国东北、内蒙古林区W及华北、西南的高山 针叶林的主要森林组成树种，是东北地区主要=大针叶用材林树种之一。该属的种质资源 丰富，分布范围广，遍及北半球的亚热带高山区、及寒溫带的平原地区，在我国原来主要分 布于东北，为大、小兴安岭海拔300~1200米地带的主要群落。现在分布范围己扩大，在内蒙 古自治区、迂宁省、吉林省、黑龙江省、山东省、陕西省、甘肃省、青海省、宁夏回族自治区均 有其分布。落叶松在针叶树种中是最耐寒的，垂直分布达到森林分布的最上限。在我国北 方地区天然分布和人工栽培的主要落叶松有兴安落叶松、长白落叶松、华北落叶松、日本落 叶松及朝鲜落叶松等。它具有适应性强，适应范围广，生长速度快，成林早，抗病虫害等优良 特性，它的木材强度高，耐腐蚀性强，在工业上有广泛的用途，并能作为优良的造纸原料。由 于它具有W上优良特性，它可作为大面积造林树种。 落叶松枯梢病是落叶松重要病害之一。1938年龟井和井上于日本北海道首次发现 此病，1950年泽田确定其病原菌，到60年代在日本广泛传染造成极大的损害。落叶松枯梢 病于70年代初期在中国开始发生W来，曾在十几年间即己遍布东北=省的广大林区，是危 害严重，蔓延迅速的危险性病害。 该病为害1~35年生落叶松人工林的当年新梢，6~15年生的幼林发病较重且普遍。 起初在未木质化的新梢嫩茎部或茎轴部退绿，由浅褐色变为暗褐色、黑色，微收缩变细。往 往有树脂溢出，上部弯曲成钩状，叶枯萎，大部分脱落，只在顶部残留一丛针叶。在松针上产 生黑色小点为病原菌的分生抱子器。因此，发病部位W上的枝梢枯死，使幼苗成为无顶苗。 在第二年春季在病梢上的树皮缝内产生大黑点和小黑点为病原菌的座囊腔和分生抱子器。 该病不仅引起落叶松新梢枯死，更为严重的是，由于连年受害，使树冠秀顶，变形 成扫靑状，胸径、材积、树高逐年下降，致使林地不能成林，林木不能成材。鉴于此病是一种 危险性传染病，危害极大，国家早已正式将其列为检疫对象，而在2004年8月12日，国家林 业局办造字【2004】59号文件发布第4号《公告》森林植物检疫对象中，落叶松枯梢病仍位 列其中，充分说明该病的严重危害性。
技术实现思路
本专利技术采用体外抗菌试验，研究化合物对落叶松枯梢病菌的生物活性。 阳007] 本专利技术的具体技术方案如下： 本专利技术的创新点是发现化合物对落叶松枯梢病菌有良好的抑菌和杀菌活性，并测量得 到其最小抑菌浓度MIC值和最小杀菌浓度MBC值，属于首次公开。 所述化合物结构特征如下图式所示： 【具体实施方式】 下面结合具体实施实例，进一步详细地说明本专利技术。应理解下面实施例仅用于说 明本专利技术而不用于限制本专利技术范围。 实施实例1 测量最小抑菌浓度MIC值。 (1)营养肉汤的配制：取营养肉汤30g加1000血蒸馈水即得。使用前12rc高压 蒸汽灭菌20min待用。 (2)营养琼脂固体培养基的配制：取营养琼脂45g加lOOOmL蒸馈水即得。使用前 12rC高压蒸汽灭菌20min待用。 (3)菌株的培养：操作于超净工作台上进行。吸取已灭菌的液体培养基lOmU放在 已灭菌的试管中，然后用接菌环挑取一个菌落，加到液体培养基中，放于培养箱内培养，细 菌培养24h，培养溫度为28°C。 (4)菌液配制及计数：将培养后的菌液，采用10倍稀释法用液体培养基稀释，并 用血球计数板在显微镜上初步观察计数，然后将菌液用液体培养基稀释，作为加入供试品 中的菌液。细菌采用平板计数法进行计数，将W上菌液用无菌生理盐水再稀释100倍，取 50y以均匀涂于已铺有固体培养基的平皿中，培养2地，培养溫度为28°C。培养后，单个活 细菌生长形成一个菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。 计算公式为：菌液浓度=nX20XlOOcfu/mL (5)药品溶液的配制：称取化合物，加入灭菌生理盐水，摇勾，得均匀溶液，备用。存放 于4°C冰箱保存待用。 (6)最小抑菌浓度（MIC)与最小杀菌浓度（MBC)的测定：采用微量肉汤稀释法测定 最小抑菌浓度MIC(MinimalInhibitoiyConcentration)。MIC为最小抑菌浓度，即药物 与一定浓度的菌液作用后，能够抑制可见菌生长的最低浓度。 采用二倍稀释法将药液用无菌生理盐水将药液稀释系列浓度，0.5、1、2、4、8、16、 32、64、128和256 ^邑/111以在96孔板上1~10行，每孔加lOOyL不同浓度的药液和lOOyL 菌液，使最终菌液浓度为1~5X105c化/mL，第11行W无菌生理盐水加菌液作为阳性对照，第 12行W不加菌液的无菌生理盐水为阴性对照，混匀后于28°C培养2地，W肉眼观察药物最 低浓度管中无细菌生长者为该试验药物的MIC，每个实验重复=次。 测得最小抑菌浓度MIC值为0. 5yg/mL。 实施实例2 测量最小杀菌浓度MBC值。 (1)营养肉汤的配制：取营养肉汤30g加1000血蒸馈水即得。使用前12rc高压 蒸汽灭菌20min待用。 (2)营养琼脂固体培养基的配制：取营养琼脂45g加lOOOmL蒸馈水即得。使用前 12rC高压蒸汽灭菌20min待用。 (3)菌株的培养：操作于超净工作台上进行。吸取已灭菌的液体培养基lOmU放在 已灭菌的试管中，然后用接菌环挑取一个菌落，加到液体培养基中，放于培养箱内培养，细 菌培养2地，培养溫度为28°C。 (4)菌液配制及计数：将培养后的菌液，采用10倍稀释法用液体培养基稀释，并 用血球计数板在显微镜上初步观察计数，然后将菌液用液体培养基稀释，作为加入供试品 中的菌液。细菌采用平板计数法进行计数，将W上菌液用无菌生理盐水再稀释100倍，取 50y以均匀涂于已铺有固体培养基的平皿中，培养2地，培养溫度为28°C。培养后，单个活 细菌生长形成一个菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数；计算公式为：菌液浓 度=nX20X100cfu/mL。 (5)药品溶液的配制：称取化合物，加入灭菌生理盐水，摇勾，得均匀溶液，备用。存 放于4°C冰箱保存待用。 (6)最小抑菌浓度（MIC)与最小杀菌浓度（MBC)的测定：采用微量肉汤稀释法测定 最小杀菌浓度MBC(MinimalBactericidalConcentration)。在MIC基础上，从每管吸取 10化溶液，点于固体培养基上，继续按MIC培养条件下培养，W完全杀灭细菌的最低浓度 为最小杀菌浓度(菌落数小于等于5)。 阳0%] 采用二倍稀释法将药液用无菌生理盐水将药液稀释系列浓度，0.5、1、2、4、8、16、 32、64、128和256 ^邑/111以在96孔板上1~10行，每孔加lOOyL不同浓度的药液和lOOyL菌液，使最终菌液浓度为1~5X105c化/mL，第11行W无菌生理盐水加菌液作为阳性对照， 第12行W不加菌液的无菌生理盐水为阴性对照，混匀后于28°C培养2地，W肉眼观察药物 最低浓度管中无细菌生长者为该试验药物的MIC。将上述未见生长细菌的各孔中的肉汤取 10化接种于营养琼脂平板上，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制落叶松枯梢病菌生长的化合物，其特征在于：（1）结构特征如下图式所示：（2）其可作为落叶松枯梢病菌的抑制剂和杀菌剂；（3）其对落叶松枯梢病菌的最小抑菌浓度MIC值为0.5μg/mL；（4）其对落叶松枯梢病菌的最小杀菌浓度MBC值为1μg/mL。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：许自协，
类型：发明
国别省市：福建;35