本发明专利技术提供一种鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗，包括鸡新城疫病毒LaSota株灭活抗原、H9N2亚型禽流感病毒WF株灭活抗原，水溶性疫苗佐剂Gel01ST以及pH6.8-7.2PBS溶液。本发明专利技术还提供所述灭活疫苗的制备方法，包括鸡新城疫病毒LaSota株灭活抗原和H9N2亚型禽流感病毒WF株灭活抗原的制备、纯化，以及二联灭活疫苗的配制。本发明专利技术提供的二联灭活疫苗产品为水溶性制剂，注射后能够快速产生免疫力，可同时有效预防鸡新城疫和H9N2亚型禽流感。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗制备领域，具体地说，涉及。
技术介绍
鸡新城疫和H9N2亚型禽流感是鸡的两种主要病毒性传染病，能够引起各种日龄鸡发病。发病鸡群轻者发生程度不一的呼吸道症状，导致生产性能下降，重者有可能引起整个鸡群死亡，造成严重经济损失，引发生物安全危机。疫苗预防是防控两种疫病的有效方法，含有鸡新城疫和H9N2亚型禽流感两种灭活抗原的二联灭活疫苗，可以通过免疫接种，同时预防两种疫病。目前，鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗均采用矿物油佐剂制备，制剂中灭活抗原被矿物油包裹，疫苗免疫注射后，抗原成分在机体内释放速度慢，免疫鸡群不能及时产生保护性免疫抗体，鸡新城疫和H9N2亚型禽流感免疫空白期长，易导致两种疫病发生。目前未见到采用GelOlST佐剂制备的鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗水溶性制剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种在注射后快速产生免疫力的，能够有效预防鸡新城疫和H9N2亚型禽流感的二联灭活疫苗。本专利技术的另一目的是提供上述二联灭活疫苗的制备方法。为了实现本专利技术目的，本专利技术的一种鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗，包括鸡新城疫LaSota株灭活抗原、H9N2亚型禽流感WF株灭活抗原、水溶性疫苗佐剂GelOlST (Montanide?)以及 pH6.8-7.2PBS 溶液。其中，所述鸡新城疫病毒LaSota株灭活抗原的制备方法为:将鸡新城疫LaSota株病毒毒种接种10-11日龄鸡胚，接种剂量为1000EID5Q，36-37°C培养96-120小时，收获鸡胚液，向其中加入甲醛溶液，使甲醛终浓度达0.2%，混匀后于37°C灭活24小时，经无菌检验和灭活检验合格后，2-8°C保存备用。所述H9N2亚型禽流感病毒WF株灭活抗原的制备方法为:将H9N2亚型禽流感WF株病毒毒种接种10-11日龄鸡胚，接种剂量为1000EID5。，36-37 °C培养72-96小时，收获鸡胚液，向其中加入甲醛溶液，使甲醛终浓度达0.2%，混匀后于37°C灭活24小时，经无菌检验和灭活检验合格后，2-8°C保存备用。所述灭活疫苗中各组分按重量份计:新城疫病毒LaSota株灭活抗原5-10份、H9N2亚型禽流感病毒WF株灭活抗原5-10份、水溶性疫苗佐剂Gel01ST5-20份、0.0lmol/L PBS溶液60-85份。本专利技术还提供上述灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤:I)鸡新城疫病毒LaSota株灭活抗原以及H9N2亚型禽流感WF株灭活抗原的制备:将鸡新城疫LaSota株病毒毒种接种10_11日龄鸡胚，接种剂量为1000EID5。，36-37°C培养96-120小时，收获鸡胚液，向其中加入甲醛溶液，使甲醛终浓度达0.2%，混匀后于37°C灭活24小时，经无菌检验和灭活检验合格后，即得鸡新城疫病毒LaSota株灭活抗原，2-8 °C保存备用；将H9N2亚型禽流感WF株病毒毒种接种10_11日龄鸡胚，每胚接种0.2毫升，接种剂量为1000EID5。，36-37°C培养72-96小时，收获鸡胚液，向其中加入甲醛溶液，使甲醛终浓度达0.2%，混匀后于37°C灭活24小时，经无菌检验和灭活检验合格后，即得H9N2亚型禽流感WF株灭活抗原，2-8 °C保存备用；2)采用化学沉淀方法或超滤方法分别对步骤I)中制备的灭活抗原进行纯化；3)将纯化后的鸡新城疫病毒LaSota株灭活抗原和H9N2亚型禽流感病毒WF株灭活抗原、疫苗佐剂GelOlST和PBS溶液按比例混合，200-500转/分搅拌20-30分钟，分装。前述的方法，步骤2)中采用化学沉淀方法纯化，具体为:向灭活抗原中分别加入抗原重量4-10%的PEG6000和2_6%的氯化钠，搅拌溶解后，常温静置2_4小时，5000-10000g离心30-60分钟，弃上清，按照纯化前抗原体积的1/4向沉淀中加入PBS溶液悬浮沉淀，即得纯化的灭活抗原，2-8°C保存备用。前述的方法，步骤2)中采用超滤方法纯化，具体为:选用的截留分子量规格为300-1000KD的膜包对灭活抗原进行切向流超滤，在超滤过程中向灭活抗原中均衡加入PBS溶液，使抗原体积保持恒定；当滤出液体积为抗原体积的2-3倍时，停止加入PBS溶液，继续超滤，直至抗原体积达到纯化前体积的1/4。前述的方法，纯化后灭活抗原的体积为纯化前体积的I/4。本专利技术提供的新型鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗为水溶性制剂，注射后能够快速产生免疫力，可同时有效预防鸡新城疫和H9N2亚型禽流感。【具体实施方式】以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例中涉及的鸡新城疫病毒LaSota株购自中国兽医药品监察所。H9N2亚型禽流感病毒WF株2012年分离自蛋鸡鸡群，由乾元浩生物股份有限公司鉴定和保存。其它所用原料均为市售商品。实施例1包括以下步骤:1、鸡新城疫病毒LaSota株灭活抗原的制备:将鸡新城疫LaSota株病毒毒种接种10-11日龄鸡胚，接种剂量为1000EID5Q，36-37°C培养96-120小时，收获鸡胚液，向其中加入甲醛溶液，使甲醛终浓度达0.2%，混匀后于37°C灭活24小时，经无菌检验和灭活检验合格后，2-8 °C保存备用。2、H9N2亚型禽流感病毒WF株灭活抗原的制备:将H9N2亚型禽流感WF株病毒毒种接种10-11日龄鸡胚，接种剂量为1000EIDM，36-37°C培养72-96小时，收获鸡胚液，向其中加入甲醛溶液，使甲醛终浓度达0.2%，混匀后于37°C灭活24小时，经无菌检验和灭活检验合格后，2-8 °C保存备用。3、采用化学沉淀方法或超滤方法分别对上述制备的灭活抗原进行纯化。采用化学沉淀方法纯化，具体为:向灭活抗原中分别加入抗原重量4-10%的PEG6000和2-6%的氯化钠，搅拌溶解后，常温静置2_4小时，5000-10000g离心30-60分钟，弃上清，按照纯化前抗原体积的1/4向沉淀中加入PBS溶液悬浮沉淀，即得纯化的灭活抗原，2-8 °C保存备用。采用超滤方法纯化，具体为:选用的截留分子量规格为1000KD的膜包对灭活抗原进行切向流超滤，在超滤过程中向灭活抗原中均衡加入PBS溶液，使抗原体积保持恒定；当滤出液体积为抗原体积的2-3倍时，停止加入PBS溶液，继续超滤，直至抗原体积达到纯化前体积的1/4。纯化后灭活抗原的体积为纯化前体积的1/4。4、将纯化后的鸡新城疫病毒LaSota株灭活抗原和H9N2亚型禽流感病毒WF株灭活抗原、PBS 溶液(0.01mol/当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗，其特征在于：包括鸡新城疫LaSota株灭活抗原、H9N2亚型禽流感WF株灭活抗原、水溶性疫苗佐剂Gel01ST以及pH6.8‑7.2PBS溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王贺民，刘兆环，张贺楠，李浩鹏，陈秋阁，周蕾蕾，
申请(专利权)人：乾元浩生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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