白介素-6的结合成员制造技术

本发明专利技术提供结合白介素-6(IL-6)和中和其生物学作用的结合成员，如人抗体分子。本发明专利技术还提供IL-6的结合成员在医疗，例如治疗与IL-6有关的炎性疾病和肿瘤中的应用。

【技术实现步骤摘要】
白介素-6的结合成员本申请是2007.11.28提交的CN200780044214.7以及其分案201310446215.1，题为“白介素-6的结合成员”的分案申请。本专利技术涉及抑制IL-6的生物学作用的结合成员，特别是抗体分子。该结合成员可用于治疗与IL-6有关的疾病，包括炎性疾病和肿瘤。白介素6(IL-6)是各种细胞类型，包括刺激的成纤维细胞、单核细胞和内皮细胞产生的26kDa多效促炎细胞因子，它们构成了IL-6的主要体内来源。细胞如T细胞、B细胞、巨噬细胞、角质形成细胞、成骨细胞和几种其它细胞受刺激后可产生IL-6。IL-6也由肿瘤细胞系和肿瘤细胞，例如肺癌、前列腺癌、骨髓瘤、肾上腺样瘤和心脏粘液瘤的细胞表达[1,2]。在非炎症条件下，IL-6由脂肪组织分泌[3]。IL-6表达的调节取决于产生它的细胞。在多发性骨髓瘤细胞中，IL-6似乎以正反馈环路起作用–刺激细胞生长和产生更多的IL-6[4,5]。在其它细胞类型中，IL-6似乎能抑制细胞的生长和激活，并可用作一些促炎细胞因子的负调节物。为了启动细胞信号转导，IL-6以低亲和力结合跨膜受体IL-6受体α(也称为IL-6Rα、IL-6Ra、IL-6R、gp80或CD126)，形成"IL-6:IL-6Ra"复合物。这种复合物与gp130信号受体结合；IL-6Rα和gp130一起形成高亲和IL-6结合位点，并诱导形成由IL-6、IL-6Ra和gp130各两拷贝组成的六聚体[6]。信号转导不需要IL-6Ra的跨膜和胞质结构域，因为IL-6Ra也存在可溶分泌形式(sIL-6R或sIL-6Ra)。可溶受体由IL-6Ra信使的差异剪接或蛋白质水解脱落产生。sIL-6R能够与IL-6形成配体-受体复合物"IL-6:sIL-6Ra"。这种复合物可结合细胞上的gp130，从而在gp130阳性细胞中启动细胞信号转导，即使这些细胞不表达IL-6Ra。因此，sIL-6R具有加宽IL-6响应性细胞的范围的潜能，认为它在IL-6-介导的炎症中起到重要作用[7]。人IL-6配体的晶体结构已经阐明[6]。也已得到了人IL-6Ra胞外结构域的晶体结构[8]和IL-6/IL-6R/gp130复合物的六聚体结构[9]。将这些结构与诱变研究相结合后，在IL-6表面上鉴定到参与IL-6与各种受体组分形成复合物的功能活性的三个位点。位点1残基参与IL-6和IL-6Ra的相互作用。位点2残基参与IL-6和gp130细胞因子结合域的相互作用。IL-6的位点3残基参与与六聚体复合物中第二个gp130的Ig-样结构域的相互作用。也已鉴定到IL-6上的第四个位点，在该位点上IL-6与IL-6/IL-6R/gp130六聚体复合物中的第二个IL-6分子相互作用[10]。已经分离到许多抗-IL-6配体单克隆抗体。已经进行作图研究，研究显示它们结合于人IL-6表面上如上所述的不同结合位点[11,12,13,14,15]。也已产生许多抗-IL-6Ra单克隆抗体，对它们在IL-6Ra上的结合位点绘图[16,14,15,17]。IL-6属于细胞因子家族，该家族包括白介素-11(IL-11)、睫状节神经细胞营养因子(CNTF)、制瘤素M(OsM)、白血病抑制因子(LIF)、心肌营养素样细胞因子(CLC)和心肌营养素1(CT-1)。该家族的各成员具有其自身的特定受体α亚基，并与共同受体亚基gp130形成复合物。对胚胎而言，靶向破坏gp130基因是致死性的[18,19]。所有IL-6家族成员均可诱导肝细胞表达急性期蛋白质。IL-6信号转导包括通过JAK家族激酶的酪氨酸磷酸化，接着激活两种主要的胞内信号转导级联反应，即SHP2/ERKMAPK和STAT1/3通路，通过NF-IL-6和AP-1导致基因表达[18,20]。IL-6显示出广谱生物学功能，包括：造血、诱导急性期反应、T细胞激活、刺激抗体分泌、抵御感染的宿主防御、骨髓瘤细胞和破骨细胞激活[21,22]。有关IL-6效应的综述参见参考文献[23]。IL-6最初鉴定为T细胞产生的B细胞分化因子[24]，但随后鉴定为许多细胞类型的强效激活物和生长促进因子。它诱导B细胞最终成熟为产生抗体的细胞，是T细胞活化和增殖的必需辅助因子。研究证明，IL-6参与了自身反应性T淋巴细胞的活化以及细胞毒性T细胞的增殖和分化。已证明，IL-6作为辅因子参与了造血过程，引起造血干细胞的活化和分化。IL-6对急性期反应的作用也有记录[25]。IL-6诱导人肝细胞产生各种急性期蛋白质，包括纤维蛋白原、α-抗-糜蛋白酶、血清淀粉样蛋白A和C-反应性蛋白质。急性期蛋白质控制免疫应答和炎症，并对组织重建有影响。在各种疾病中，IL-6的血清水平与C反应性蛋白质的血清水平良好相关，这提示IL-6在急性期反应中的病因作用。也已证明，IL-6可由成骨细胞产生，似乎参与破骨细胞活化和骨再吸收[26，27，28]。自相矛盾的是，提示IL-6不仅可用作促炎细胞因子，而且在某些情况和细胞类型中可削弱其它促炎细胞因子的作用，导致炎症减轻。由于IL-6具有多种生物学作用，所以IL-6水平升高可能是各种疾病病症中的关键细胞因子。已证明，在多种疾病，如类风湿性关节炎、卡斯特尔曼代病(Castleman’sdisease)、青少年特发性关节炎和克罗恩病[29]中循环IL-6水平升高。因此，IL-6参与驱动这些炎性病症的病理。而且，已证明IL-6能刺激多种肿瘤类型，包括黑色素瘤、肾细胞癌、卡波济氏肉瘤、卵巢癌、淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤和前列腺癌[30]。另外，已报道在若干癌症中IL6循环水平升高。在一些癌症病症中，IL-6水平升高已用作该疾病的预后指标。由于IL-6在疾病中的作用，已经开发了多种鼠和嵌合抗-人IL-6单克隆抗体作为潜在疗剂。US5856135描述衍生自小鼠单克隆抗体"SK2"的IL-6的重构人抗体。JP-10-66582报道IL-6的嵌合抗体，它能够识别IL-6的螺旋D区(位点1)。WO2004/020633(EP1536012)记载了用噬菌体展示技术分离的IL-6的人scFv抗体分子。据报道，scFv的亲和力为13nM。鼠抗-IL-6抗体艾思莫单抗(elsilimomab)(也称为B-E8)已经用于治疗多发性骨髓瘤[31，32]、肾细胞癌[33]和类风湿性关节炎[34]患者，在所治疗的所有三种疾病的患者中观察到某些诊断标记有改进。BE-8也已用于治疗HIV-阳性的免疫母细胞或多形大细胞淋巴瘤[35]患者，在约50％患者中全身症状(即发热、发汗、恶病质)缓解和淋巴瘤的自发生长受抑制。然而，此种抗体的快速清除和由于对艾思莫单抗产生人抗-小鼠抗体(HAMA)而可能引起过敏反应限制了它的临床应用[36]。通常，鼠单克隆抗体的临床应用受限，因为这种抗体常常诱导HAMA。常常对小鼠免疫球蛋白的Fc部分产生HAMA，导致抗-IL-6mAb快速清除和可能的过敏反应[36]。也知道，小鼠抗体在人体中的药代动力学特性不同于人抗体，其半衰期较短，清除率提高。为了降低鼠抗体在人体内的免疫原性，构建具有小鼠可变区和人恒定区的嵌合抗体。已经用嵌合的人-小鼠抗-IL-6抗体cCLB8(称为CNTO328)治疗多发性骨髓瘤患者本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人IL‑6结合成员，经表面等离振子共振测定，其结合人IL‑6的KD不超过30pM。

【技术特征摘要】
2006.11.30 US 60/861,7041.一种分离的人IL-6抗体，所述抗体包含选自以下的VH与VL区组合：(a)VH的氨基酸序列是SEQIDNO:12且VL的氨基酸序列是SEQIDNO:17；(b)VH的氨基酸序列是SEQIDNO:22且VL的氨基酸序列是SEQIDNO:27；(c)VH的氨基酸序列是SEQIDNO:32且VL的氨基酸序列是SEQIDNO:37；(d)VH的氨基酸序列是SEQIDNO:42且VL的氨基酸序列是SEQIDNO:47；(e)VH的氨基酸序列是SEQIDNO:62且VL的氨基酸序列是SEQIDNO:67；(f)VH的氨基酸序列是SEQIDNO:72且VL的氨基酸序列是SEQIDNO:77；(g)VH的氨基酸序列是SEQIDNO:82且VL的氨基酸序列是SEQIDNO:87；(h)VH的氨基酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·马林尔，S·G·莱恩，S·C·克鲁威，
申请(专利权)人：米迪缪尼有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB