本发明专利技术公开了一种具有反硝化功能的除烃海杆菌STW2及其应用。除烃海杆菌(Marinobacter hydrocarbonoclasticus)STW2，其保藏编号为CCTCC NO：M 2014339。本发明专利技术的除烃海杆菌(Marinobacter hydrocarbonoclasticus)STW2具有反硝化和有机物多环芳烃降解功能，因此可以将其应用于反硝化进行脱氮中以及降解多环芳烃有机物，从而能够有效应用于海洋滨海湿地生态系统的修复和保护中，具有较好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
： 本专利技术属于微生物领域，具体设及一种具有反硝化功能的除控海杆菌STW2及其 应用。
技术介绍
： 由于经济的发展和城市化进程的推进，人类活动在滨海湿地生态系统区域日益频 繁，使得越来越多的无机污染和有机污染物质进入到滨海湿地系统中，对生态系统造成严 重的破坏，其中比较常见的是无机氮污染和多环芳控、农药、多氯联苯、邻苯二甲酸醋等有 机污染物等有机污染物。滨海生态系统中的氮素富集，常常蕴含着过量的高浓度氨氮和亚 硝酸氮的积累，从而会对海洋生物产生直接的毒害作用，降低其免疫力，引发病原生物入侵 从而造成，而好养反硝化功能菌介导的反硝化作用可W有效地缓解运一现象（Camargoand Alonso, 2006)。好氧反硝化菌（AerobicDenitrifier)是一类能够在有氧条件下，利用好 氧反硝化酶进行反硝化作用的反硝化菌，在运个过程中通过它能够使硝酸盐（N03)逐步转 变为亚硝酸盐（N02)、一氧化二氮（成0)和氮气（成)，从而达到脱氮的目的。水体脱氮最有 效且环保的方法即采用硝化反硝化微生物进行水体修复，且具有高效、价格低廉、安全性较 高等特点。目前已有报道的好氧反硝化菌主要包括假单胞菌属（Pseudomonas)、产碱杆菌属 (Alcaligenes)、副球菌属（Paracoccus)和芽抱杆菌属度acillus)等，属好氧或兼性好氧 异养微生物，而关于海杆菌的报道较少化ietal.，2013)。 有机污染物多环芳控具有致癌、致崎、致突变性、半挥发性、亲脂性、高生物蓄积性 和难降解等特性，其能够在环境中长时间存在、长距离迁移并富集于生物体，给人类健康和 生态系统安全造成长期而严重的危害，而在海洋湿地环境中的多环芳控除较少部分通过光 化学分解外，大多数还是依赖于生物降解的途径进行消除，微生物降解是一条高效途径。已 有研究表明海杆菌（Marinobacterhy化ocarbonoclasticus)在高达20%的盐浓度下仍能 降解控类，具有更为广泛的应用性。
技术实现思路
： 本专利技术的第一个目的是提供一种同时具有反硝化和有机物多环芳控降解功能 的除巧海杆菌（Marinobacterhy化oca;rbonoclasticus)STW2,该菌于 2014 年 7 月 10 号 保藏于中国典型培养物保藏中屯、（CCTCC)，中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCCN0:M 2014339。 本专利技术的除控海杆菌（Marinobacterhy化ocarbonoclasticus)STW2具有反硝化 和有机物多环芳控降解功能。 因此本专利技术的第二个目的是提供除控海杆菌（Marinobacter hy化ocarbonoclasticus)STW2在通过反硝化进行脱氮中的应用或者在降解多环芳控有机 物中的应用。 本专利技术的除控海杆菌（Marinobacterhy化ocarbonoclasticus)STW2具有反硝化 和有机物多环芳控降解功能，因此可w将其应用于反硝化进行脱氮中w及降解多环芳控有 机物，从而能够有效应用于海洋滨海湿地生态系统的修复和保护中，具有较好的应用前景。除控海杆菌（Marinobacterhy化ocarbonoclasticus)STW2 于 2014 年 7 月 10 号保藏于中国典型培养物保藏中屯、（CCTCC)，中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCCN0:M 2014339。【附图说明】：图 1 是除控海杆菌（Marinobacterhy化ocarbonoclasticus)STW2 的 16SrDNA的 系统进化发育树，图中的51胖2表示除控海杆菌（祀117化〇〇日计〇11〇(31日3^(3113化1胖2; 图2是除控海杆菌STW2的nosZ的系统进化发育树，图中的STW2表示除控海杆菌 (M.hydroc曰rbonocl曰sticus)STW2。 图3是好氧条件下除控海杆菌STW2的反硝化效率测定。【具体实施方式】： W下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。 阳〇1；3]实施例1 :除控海杆菌（Marinobacterhy化ocarbonoclasticus)STW2的分离和纯 化. 样品采集：2012年4月于中国海南省新村湾海草生态系统海富蒲巧nhalus acodoides)根际沉积物，取Ig沉积物样品于装有100血无机盐培养基并含有一定量 PAHs(糞、巧和巧各含量为lOOmg/L)的S角瓶中，W多环芳控（奈、巧和巧）为唯一碳源，采 用定向富集法、逐级驯化获得菌株，用锡锥纸包裹遮光置于摇床中30°C，200rpm震荡培养， 然后进一步通过反硝化培养基培养进行筛选、分离和纯化，最终筛选出一株具有兼具有好 氧反硝化和多环芳控降解能力的菌株，命名为：菌株STW2。反硝化培养基：pH:7. 0，含KN032.Og，M拆〇4. 7&0 0.诚，K2HPO4.抓2〇 0.5邑， 〔4〇班2謂曰20.0g，去离子水1L。灭菌消毒备用。 无机盐培养基（MSM)的组分为：(NH4)2S04,l，000mg/L、Na2HP〇4,800mg/ L、KH2PO4, 200mg/L、M拆O4? 7&0, 200mg/L、Ca(N〇3)2? 4&0, 50mg/L;其中微量元素： FeCls? 3电0, 5mg/L、（NH4)gM〇7〇24 ? 4电0,Img/L、MnClz, 0. 2mg/L、CuS〇4, 0. 02mg/L、 CoCl2,〇. 02mg/L。灭菌消毒备用实施例 2 :除控海杆菌（Marinobacterhy化ocarbonoclasticus)STW2 的鉴定 阳〇1引1、形态学特征： 菌株STW2,为革兰氏阴性，杆状，在LB或2216E培养基上，菌落均呈灰白色，不透 明，表面光滑湿润，边缘比较规则，中央微凸起，菌落形态大小l-3mm，化C1的生长范围为 0-22%，最适浓度为5%，能够进行硝酸盐还原，利用屯叶巧、葡萄糖、麦芽糖和木糖。 2、16SrDNA和功能基因序列鉴定： 选择实施例1分离纯化得到的菌株STW2进行基因组DNA提取和纯化，其操作方法 参考东秀珠《常见细菌系统鉴定手册》?4。9。采用细菌的通用引物16SF/16SR(Weisenburget 曰1., 1991，16Sribosom曰1DNAamplificationforphylogeneticstudy.Journalofb曰c teriology, 1991, 173(2):697_703)和nosZ的引物巧ichJ,etal.Communitycomposition andfunctioningofdenitrifyingbacteriafromadjacentmeadowandforestsoils. AppliedandElnvironmentalMicrobiology, 2003, 69 (10): 5974-5982.)作为引物，W菌株STW2基因组DM作为模板，进行16SrDNA的PCR扩增，具体的PCR反应体系如下：16SrDNA PCR扩增程序如下：94°C预变性5min;94°C变性60sec，退火溫度55°C复性90sec，72°C本文档来自技高网...
【技术保护点】
除烃海杆菌(Marinobacter hydrocarbonoclasticus)STW2，其保藏编号为CCTCC NO：M 2014339。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：凌娟，董俊德，张燕英，杨清松，林丽云，曾思泉，周卫国，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44
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