一种用于检测人体淋巴细胞CD抗原表达量的免疫层析方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测人体淋巴细胞CD抗原表达量的免疫层析方法，步骤如下；取全血样本加入到溶血剂中，使细胞完全裂解，释放出CD抗原分子；取裂解后的样本液，加入到稀释剂中，混匀；取稀释后的样本，加入到检测板的加样孔中，样本开始扩散和层析；在规定的层析时间，仪器对T、C线进行检测，根据设定的函数关系，得到样本中CD抗原的浓度。本发明专利技术方法是一种简单、快捷、准确的方法学，用于淋巴细胞CD抗原表达量的检测，辅助或取代目前的流式细胞仪检测；填补了国际以及行业领域的空白，开拓了从CD抗原表达总量的角度研究与疾病的关系，用于精确研究CD抗原表达量与疾病的关系，而且该方法使用的试纸条造价低，极大的降低医院的检测成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞检测领域，具体是一种用于检测人体淋巴细胞CD抗原表达量的免疫层析方法。
技术介绍
人体内的白细胞分为五类:淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞。其中淋巴细胞是一类重要的免疫细胞，分为主要参与细胞免疫的T细胞、主要参与体液免疫的B细胞。淋巴细胞在分化过程中，主要在细胞表面生成特异性的抗原分子，被命名为CD，至今已经发现超过130种⑶分子。如⑶1、⑶2、⑶3......CD，cuttle of diferetat1n，分化群。在病理状态下，携带有某种CD抗原分子的淋巴细胞的数量、细胞膜上的某些CD抗原分子的表达量，都会发生较明显的变化，与相关疾病呈现一定程度的相关性。国内外关于这方面的研究资料很多。在临床检验中，就某种疾病相关的某CD抗原的检测，主要就是用流式细胞仪检测携带该抗原的细胞的数量。即用该CD抗原特异的被特殊染料标记的单克隆抗体，与细胞上的CD抗原反应，其中带有一定表达量以上的细胞被染色，通过仪器对散射光的接收和分析，区别以及计算出阳性细胞的数量或比例。作为临床疾病诊断的参考。该方法的局限性在于，标本处理及仪器相关阈值的设定要求都比较严格，影响检测结果的因素很多，因此，检测结果的波动范围较大。成本很高等因素。所以，在临床检测中尚未被很好地普及。虽然有众多的研究资料表明，CD抗原表达量与疾病的发生、发展、治疗和预后有关系，但是这些研究仍旧集中在具有较高表达量的那些细胞的数量及比例的变化方面。但是，尚未发现，在一定量的临床血液标本中，某CD抗原的总量变化的定量研究，当然，也未有相关的仪器及配套试剂用于临床检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于检测人体淋巴细胞CD抗原表达量的免疫层析方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案:—种用于检测人体淋巴细胞CD抗原表达量的免疫层析方法，具体方法步骤如下:(I)取全血样本加入到溶血剂中，使细胞完全裂解，释放出⑶抗原分子；(2)取裂解后的样本液，加入到稀释剂中，混匀；(3)取稀释后的样本，加入到检测板的加样孔中，样本开始扩散和层析；扩散和层析过程:样本扩散到垫子上被固定的标记抗体区域，溶解标记抗体，标记抗体与对应的CD抗原分子发生特异性结合，生成复合物；复合物层析到包被在NC膜上的捕获抗体区域时，与固定在膜上的捕获抗体发生特异性反应，被聚集，形成T线；未被捕获的复合物、过量的标记物，继续层析到质控区，被二抗捕获而聚集，形成C线；未被C线捕获的，层析到吸水纸，被吸收；(4)在规定的层析时间，使用定量免疫层析分析仪，仪器对T、C处的反应线进行光学扫描，根据设定的函数关系，得到样本中CD抗原的浓度。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是:1、从方法学和检测目标物角度，填补了国际以及行业领域的空白；2、开拓了从⑶抗原表达总量的角度研究与疾病的关系；3、与目前临床的细胞计数结合起来，用于精确研究CD抗原表达量与疾病的关系；4、是一种简单、快捷、准确的方法，用于淋巴细胞⑶抗原表达量的检测，辅助或取代目前的流式细胞仪检测；5、通过本专利技术方法使用的试剂盒成本低，该方法使用的检测试纸条的成本约5元/人份，而目前在流式细胞仪上的测定CD抗原的试剂来自国外，每人份的价格超过100元，成本太过昂贵，因此本方法使用的检测试纸条的成本低，为医院极大的降低检测成本。【具体实施方式】下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。—种用于检测人体淋巴细胞CD抗原表达量的免疫层析方法，具体方法步骤如下:(I)取全血样本加入到溶血剂中，使细胞完全裂解，释放出⑶3抗原分子；(2)取裂解后的样本液，加入到稀释剂中，混匀；(3)取稀释后的样本，加入到检测板的加样孔中，样本开始扩散和层析；扩散和层析过程:样本扩散到垫子上被固定的标记抗体区域，溶解标记抗体，标记抗体与CD3抗原分子发生特异性结合，生成复合物；复合物层析到包被在NC膜上的捕获抗体区域时，与固定在膜上的捕获抗体发生特异性反应，被聚集，形成T线；未被捕获的复合物、过量的标记物，继续层析到质控区，被二抗捕获而聚集，形成C线；未被C线捕获的，层析到吸水纸，被吸收；(4)在规定的层析时间，使用定量免疫层析分析仪，仪器对T、C处的反应线进行光学扫描，根据设定的函数关系，得到样本中CD抗原的浓度。原理:先运用双抗体夹心法对⑶抗原特异性的单克隆抗体进行纳米金标记或荧光纳米微粒标记，然后进行溶血裂解，裂解后的淋巴细胞上的CD抗原与标记抗体特异性结合，成为复合物；复合物层析到NC膜上包被有CD捕获抗体时，复合物被捕获并聚集；随着聚集物的量的增加，包被区域出现了可被仪器精准识别和测量的反应线，即T线；过量的标记抗体以及未被捕获的复合物，将被质控区域的二抗所捕获，出现可被仪器精准识别和测量的反应线，即C线；仪器根据测得的数据，以及抗原与检测值之间设定好的线性函数关系，计算出样本中的CD抗原浓度。该检测方法重要意义:1、从方法学和检测目标物角度，填补了国际空白；2、开拓了从⑶抗原表达总量的角度研究与疾病的关系；3、与目前临床的细胞计数结合起来，用于精确研究CD抗原表达量与疾病的关系；4、是一种简单、快捷、准确的方法学，用于淋巴细胞⑶抗原表达量的检测，辅助或取代目前的流式细胞仪检测；5、通过本专利技术方法使用的试剂盒成本低，该方法使用的检测试纸条的成本约5元/人份，而目前在流式细胞仪上的测定CD抗原的试剂来自国外，每人份的价格超过100元，成本太过昂贵，因此本方法使用的检测试纸条的成本低，为医院极大的降低检测成本。对于本领域技术人员而言，显然本专利技术不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本专利技术的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本专利技术。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本专利技术的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本专利技术内。【主权项】1.一种用于检测人体淋巴细胞CD抗原表达量的免疫层析方法，其特征在于，具体方法步骤如下: (1)取全血样本加入到溶血剂中，使细胞完全裂解，释放出CD抗原分子； (2)取裂解后的样本液，加入到稀释剂中，混匀； (3)取稀释后的样本，加入到检测板的加样孔中，样本开始扩散和层析，15?20min后，分别形成T线和C线，层析结束，开始检测； (4)在规定的层析时间，使用定量免疫层析分析仪，仪器对T、C处的反应线进行光学扫描，根据设定的函数关系，得到样本中CD抗原的浓度。【专利摘要】本专利技术公开了一种用于检测人体淋巴细胞CD抗原表达量的免疫层析方法，步骤如下；取全血样本加入到溶血剂中，使细胞完全裂解，释放出CD抗原分子；取裂解后的样本液，加入到稀释剂中，混匀；取稀释后的样本，加入到检测板的加样孔中，样本开始扩散和层析；在规定的层析时间，仪器对T、C线进行检测，根据设定的函数关系，得到样本中CD抗原的浓度。本专利技术方法是一种简单、快捷、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测人体淋巴细胞CD抗原表达量的免疫层析方法，其特征在于，具体方法步骤如下：(1)取全血样本加入到溶血剂中，使细胞完全裂解，释放出CD抗原分子；(2)取裂解后的样本液，加入到稀释剂中，混匀；(3)取稀释后的样本，加入到检测板的加样孔中，样本开始扩散和层析，15～20min后，分别形成T线和C线，层析结束，开始检测；(4)在规定的层析时间，使用定量免疫层析分析仪，仪器对T、C处的反应线进行光学扫描，根据设定的函数关系，得到样本中CD抗原的浓度。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵军理，
申请(专利权)人：江苏荣盛嘉美生物试剂有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32