基于IL-6的抗原表位及其应用制造技术

本发明专利技术公开了基于IL-6的抗原表位及其应用。具体地，本发明专利技术提供了一种抗原表位肽，所述抗原表位肽源自哺乳动物IL-6且包含一个或多个抗原表位，并且所述抗原表位肽氨基酸序列长度为IL-6全长的2-100％，且所述抗原表位肽的长度为3-300个氨基酸；并且所述抗原表位肽与载体蛋白形成的重组蛋白可诱发同一种类的所述哺乳动物产生针对IL-6的免疫反应。本发明专利技术还提供了包含上述抗原表位肽的融合蛋白。使用本发明专利技术的抗原表位肽与载体蛋白融合表达制备的融合蛋白，可有效激发机体针对IL-6的免疫反应。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体地说，本专利技术涉及基于IL-6的抗原表位及其应 用。
技术介绍
类风湿性关节炎烟leumatoidArt虹itis)属于最常见的自身免疫病之一。该疾 病是一种由于机体的免疫系统对于人体的关节部位的异常的攻击所造成的关节部位的的 长期的慢性炎症。治疗类风湿性关节炎（RA)的药物研究已经开展有很多年。W往的策略 是首先服用消炎药，一旦临床检测出有关节损坏的症状，便会开始使用控制类风湿药物。控 制类风湿疾病的药物一般被分为异源生物体制剂W及生物工程制剂两类。异源生物体制剂 是一类不能由自然的状态的机体产生、合成的分子化合物，比如常见的环抱菌素、甲氨噪岭 (Methotrexate)、氯奎宁等。其中甲氨噪岭是目前最重要W及有效的控制性抗风湿药物。通 常氯奎宁被认为是毒性最低的改善类风湿病情的药物，但是它的药性有限，对于很多重症 病人，它无法达到令人满意的治疗效果。 大量的研究已经证实，比-6与类风湿性关节炎RA有着密切的关系。相对于正常 人的血清中IL-6的含量而言，RA患者血清中该因子的含量会有显著升高，且其浓度与C反 应蛋白的水平、晨僵持续的时间及影像学关节破坏的程度呈明显正相关。在经过有效治疗 后，IL-6水平有明显的降低。RA患者关节液中的IL-6浓度较血清中更高，高浓度的IL-6 可激活破骨细胞，而破骨细胞活性则与关节破坏程度有明显关联。 目前祀向比-6治疗类风湿性关节炎的药物研发主要集中在单克隆抗体的制备， 通过阻断比-6与比-6R结合介导的信号通路达到治疗疾病的目的。Regeneron公司研发的 IL-6受体特异性人源化单克隆抗体（REGN-88)已进入I期临床研究；此外，Centor化tho Biotech公司研发的比-6抑制剂（CNT0-136)，UCBSA公司研发的比-6特异性单克隆抗 体（CDP-6038)W及Alder联合BMS公司研发的比-6特异性人源化单克隆抗体（ALD518) 均已进入II期临床研究，2010年1月FDA批准人源化抗IL-6R单克隆抗体一巧珠单抗 灯ocilizumab商品名Actemra)被用于中、重度活动性RA的患者的治疗。由此我们看到阻 断IL-6信号通路来治疗类风湿关节炎拥有非常广阔的前景。但是抗体药物使用周期长、价 格昂贵且易产生免疫耐受，基于IL-6疫苗的主动免疫治疗策略正成为RA免疫治疗研究的 新热点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种基于IL-6的抗原表位。 本专利技术的另一目的是提供上述基于IL-6的抗原表位的用途。 本专利技术的第一方面，提供了一种抗原表位肤，所述抗原表位肤源自哺乳动物比-6 且包含一个或多个抗原表位， 并且所述抗原表位肤氨基酸序列长度为IL-6全长的2-100% (优选地，所述抗原 表位肤氨基酸序列长度为相应的低免疫原性蛋白全长的5-70% ;更优选地，所述抗原表位 肤氨基酸序列长度为相应的低免疫原性蛋白全长的5-50% ;最优选地，所述抗原表位肤氨 基酸序列长度为相应的低免疫原性蛋白全长的5-30 %，如5 %、10 %、15 %、20 %、25 %)，且 所述抗原表位肤的长度为3-300个氨基酸； 并且所述抗原表位肤与载体蛋白形成的重组蛋白可诱发同一种类的所述哺乳动 物产生针对IL-6的免疫反应。 优选地，所述抗原表位肤氨基酸序列长度为3-57。更优选地，所述抗原表位肤氨基 酸序列长度为 5-17。如 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17个氨基酸。 在另一优选例中，所述抗原表位肤包括人IL-6全长序列、鼠IL-6全长序列或其同 源序列。 在另一优选例中，所述人IL-6全长序列如SEQIDNO. : 1所示。 在另一优选例中，所述鼠IL-6全长序列如SEQIDNO. :2所示。 在另一优选例中，所述抗原表位肤选自下组：[001引 （l)SEQIDNO. :1、2或8所示的氨基酸序列； (2)将（1)中所示氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而 形成的，且与载体蛋白融合后具有诱发免疫反应功能的衍生的多肤。 在另一优选例中，所述抗原表位肤的氨基酸序列为AE邸GCFQSGFN。 在另一优选例中，所述载体蛋白具有至少一个T细胞表位，并且在所述载体蛋白 的至少一个分子表面氨基酸残基区通过拼接、替换、和/或插入而引入所述的抗原表位肤。 在另一优选例中，所述载体蛋白与所述抗原肤段不是来自同一个蛋白，并且所述 载体蛋白可W增强所述表位肤的免疫原性。 在另一优选例中，所述载体蛋白包括白喉毒素DT、白喉毒素的跨膜结构域DTT、霍 乱毒素B亚单位（CTB)、沙口氏菌鞭毛蛋白（Flic)、百日咳毒素（PT讶、破伤风毒素、或上述 蛋白的免疫原性片段（如破伤风毒素的C片段）、轮状病毒VP7、利什曼原虫的热休克蛋白、 空肠弯曲菌鞭毛蛋白、沙眼衣原体主要外膜蛋白、血藍蛋白化巧holeLimpet化mo巧anin, KLH)、牛血清白蛋白度ovineSe;rumA化umin，BSA)，鸡卵白蛋白（Ova化umin，OVA)，纤维蛋 白原。 在另一优选例中，所述"分子表面氨基酸残基区"包括loop区、beta-tum区、N末 端或C末端。 本专利技术的第二方面，提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白是如本专利技术第一方面所 述的抗原表位肤与载体蛋白融合所形成的。 在另一优选例中，所述载体蛋白具有至少一个T细胞表位，并且在所述载体蛋白 的至少一个分子表面氨基酸残基区通过拼接、替换、和/或插入而引入所述的抗原表位肤。 在另一优选例中，所述载体蛋白与所述抗原肤段不是来自同一个蛋白，并且所述 载体蛋白可W增强所述表位肤的免疫原性。 在另一优选例中，所述载体蛋白包括白喉毒素DT、白喉毒素的跨膜结构域DTT、霍 乱毒素B亚单位（CTB)、沙口氏菌鞭毛蛋白（Flic)、百日咳毒素（PT讶、破伤风毒素、或上述 蛋白的免疫原性片段（如破伤风毒素的C片段）、轮状病毒VP7、利什曼原虫的热休克蛋白、 空肠弯曲菌鞭毛蛋白、沙眼衣原体主要外膜蛋白、血藍蛋白化巧holeLimpet化mo巧anin. KLH)、牛血清白蛋白度ovineSe;rumA化umin，BSA)，鸡卵白蛋白（Ova化umin，OVA)，纤维蛋 白原。 在另一优选例中，所述"分子表面氨基酸残基区"包括loop区、beta-tum区、N末 端或C末端。 在另一优选例中，所述的载体蛋白为白喉毒素的跨膜结构域DTT。 在另一优选例中，所述白喉毒素的跨膜结构域DTT的loop区包括；DTT的第 305-310位氨基酸残基（1F0L.pdb)。 在另一优选例中，所述将权利要求1所示抗原表位替换白喉毒素跨膜结构域DTT 的第305-310位氨基酸残基（lH)L.p化）形成所述融合蛋白。 在另一优选例中，所述的载体蛋白为霍乱毒素B亚单位。 在另一优选例中，所述霍乱毒素B亚单位的loop区包括：霍乱毒素B亚单位（CTB) 的 31-LAGKRE-36 位氨基酸残基（3CHB.pdb)。 在另一优选例中，所述抗原表位肤连接于所述载体蛋白的C末端和/或N末端形 成所述融合蛋白。 在另一优选例中，所述抗原表位和所述载体蛋白之间具有连接肤。优选地，所述连 接本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽源自哺乳动物IL‑6且包含一个或多个抗原表位，并且所述抗原表位肽氨基酸序列长度为IL‑6全长的2‑100％，且所述抗原表位肽的长度为3‑300个氨基酸；并且所述抗原表位肽与载体蛋白形成的重组蛋白可诱发同一种类的所述哺乳动物产生针对IL‑6的免疫反应。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李荣秀，都伟杰，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31