本发明专利技术公开了一种邻苯二甲酸二甲酯人工免疫原及其制备和用途；所述邻苯二甲酸二甲酯人工免疫原DMP-BSA的结构式为：其制备方法为通过重氮化法将DMP半抗原与蛋白质分子BSA偶联制备获得。本发明专利技术免疫原制备方法简单，稳定性好，成本低，易于工业化生产。邻苯二甲酸二甲酯人工免疫原DMP-BSA通过免疫动物后制备成特异性抗体，为建立免疫检测方法奠定基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及一种邻苯二甲酸二甲醋人工免疫原DMP-BSA及其制备和用途，具体是 一种用于新兴持久性有机污染物一一塑化剂类免疫检测的邻苯二甲酸二甲醋人工免疫原 DMP-BSA及其制备方法和用途。
技术介绍
邻苯二甲酸醋类塑化剂（缩写为PAEs)，又称献酸醋类，是一类由邻苯二甲酸与含 有4-15个碳的醇发生费歇尔（Fischer)醋化反应所形成的醋的重要衍生物的统称。运类物 质有特殊性气味，毒性较大，一般情况下状态为粘稠液体；液态条件下溫度范围宽，流动性 大，挥发性低，不溶于水，易溶于大多数有机溶剂。运类物质用途广泛，它不仅可作为食品包 装材料、玩具、农药载体、驱虫剂、润滑剂、乙締地板和壁纸、去泡剂、清洁剂、医用材料（如 人工屯、脏瓣膜等人工器官、血袋、注射器和胶管）和个人护理用品（主要有化妆品、香味品、 指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液）等近千种产品的生产原材料，还常作为塑料增塑剂被 用于改造塑料制品性能。 邻苯二甲酸二甲醋（英文名称：Dimethyl地thalate，简称DMP)，又名献酸二甲 醋、避蚊醋、驱蚊油等，CAS号为131-11-3,分子式为。讯1。〇4,分子量为194. 19,无色透明微 黄色油状液体，稍具芳香味，能与乙醇、乙酸等一般有机溶剂混溶，不溶于水和石油酸；高度 易燃，遇明火、高热、氧化剂有燃烧的危险。该物质微毒，对眼睛粘膜有较强的刺激性；可能 对胎儿造成伤害，对水生生物有极高毒性；有损害生育能力的危险性；吸入、皮肤接触及吞 食有毒；人体组织内可蓄积，从而抑制中枢神经系统。由于其具备良好的塑膜性、粘着性和 防水性，故常被用于制作醋酸纤维素的薄膜、清漆涂料、透明纸和成模塑料粉等；还可用作 驱蚊油、聚氣乙締涂料W及杀虫剂的溶剂3。近些年来，由于频频发现该物质在食品、水体中 的含量过高，因此，该物质含量的检测便备受关注。 目前，关于邻苯二甲酸二甲醋的研究主要集中在水体、沉积物、大气等环境领域和 生物体的毒性方面，但样品的检测方法方面研究较少。目前对邻苯二甲酸二甲醋的检测手 段主要为气相色谱和高效液相色谱等仪器检测方法，运些方法虽然准确可靠，但对样品的 预处理方法和操作人员的专业性有很高的要求。正因为运些方法的处理复杂、耗时、仪器价 格昂贵而不适合推广使用，也不利于在环境污染事故现场快速检测。为克服运些缺点，寻求 一种快速、简便、灵敏且经济实用的分析方法就成为环境监测领域的主要研究方向。 20世纪60年代发展起来的免疫分析（Immunoassay,IA)是基于抗原和抗体的特异 性、可逆性结合反应的分析技术。免疫分析具有常规理化分析技术无可比拟的选择性和高 灵敏性，非常适合复杂介质中痕量组分的分析。因此免疫分析具有的特异性强、灵敏度高、 方法快捷简单、分析通量大、检测成本低等优点，使得该类方法可W满足简单、快速、灵敏地 检测持久性有机污染物的要求。1985年美国Cetus公司的K.B.Mullis和R.K.Saiki等发 明了一种特异性DNA体外扩增技术，成为化lymerase化ainReaction,简称PCR，即聚合酶 链式反应。1992年Sano等将免疫分析技术与PCR技术结合，发展出巧光免疫PCR技术。巧 光免疫PCR技术兼具了免疫分析的特异性强和PCR技术的灵敏度高（检测限高达10 11~ 10i2g/L)的特点，可用于检测环境中痕量污染物。 目前，尚无用巧光免疫PCR技术检测DMP的相关报道。而制备合格的DMP人工免 疫原是生物免疫得到高特异性抗DMP抗体的前提，更是建立DMP巧光免疫PCR检测分析方 法的关键，运将具有重要的应用价值和理论研究意义。
技术实现思路
针对上述现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种步骤简单，速度快，产率高 的邻苯二甲酸二甲醋人工免疫原值MP-BSA)及其制备和用途，为免疫得到特异性抗体和利 用人工抗原、抗体建立免疫检测方法奠定基础。 本专利技术的目的是通过W下技术方案实现的： 第一方面，本专利技术设及一种邻苯二甲酸二甲醋的人工免疫原DMP-BSA，其结构式如 式（I)所示：BSA为牛血清蛋白。 第二方面，本专利技术设及一种邻苯二甲酸二甲醋的人工免疫原DMP-BSA的制备方 法，所述方法包括采用重氮化法将DMP半抗房与牛血清蛋白 BSA偶联制备人工免疫原DMP-BSA。 优选的，所述方法具体包括如下步骤： S1、将所述DMP半抗原溶于呈强酸性的水溶液中，形成DMP半抗原溶液； S2、向所述DMP半抗原溶液中滴加（逐滴加入，就是一滴一滴的滴入，每滴之间 没有间隔；加入速度过快容易导致重氮盐制备效率降低）亚硝酸钢溶液（1M)，控制抑为 2. 0~3. 0,反应（20~40min，优选30min)结束后去除未反应的亚硝酸钢，生成重氮盐溶 液；S3、将牛血清蛋白BSA溶于0.01~0.05MpH9. 18 (抑过高或过低，均不利于本发 明人工免疫原的制备）棚酸钢缓冲液中，形成牛血清蛋白溶液；S4、在所述重氮盐溶液中滴加所述牛血清蛋白溶液，发生偶联反应，即得所述人工 免疫原DMP-BSA。 本专利技术采用重氮化法合成邻苯二甲酸二甲醋人工免疫原，其反应方程式如下： 上述反应方程式中，中间产物重氮盐与牛血清蛋白BSA结合，偶联脱氯，生成了 DMP人工免疫頂 优选的，所述DMP半抗原、强酸、亚硝酸钢、牛血清蛋白BSA的摩尔比为1:3~ 4:8 ~10:0. 001 ~0. 005。 优选的，步骤S1中，所述强酸性的水溶液中的强酸选自浓盐酸、浓硫酸或浓硝酸。 优选的，步骤S1中，所述去除未反应的亚硝酸钢是加入尿素W去除未反应的亚硝 酸钢，所述尿素与DMP半抗原的摩尔比为300~350:1。 优选的，步骤S4中，所述偶联反应是在0~4°C、揽拌的条件下进行，所述揽拌时间 为2~3小时。所有需要保持蛋白活性的长时间反应都需要在低溫情况下进行，经验表明 0~4°C最合适。此外，为充分反应，根据经验，当半抗原与强酸、亚硝酸钢、尿素、BSA的摩 尔比为1:3:8:300:0.001时揽拌反应2小时就可W，当半抗原与强酸、亚硝酸钢、尿素、BSA 的摩尔比为1:4:10:350:0. 005时反应就需要3小时。 优选的，所述步骤S4还包括偶联反应结束后，离屯、分离，将上清液装入透析袋中 透析，离屯、分离沉淀即得所述人工免疫原DMP-BSA的步骤。 优选的，所述DMP半抗原是由包括如下步骤的方法制备而得： 4-硝基邻苯二甲酵与甲醇在浓盐酸或浓硫酸的催化下 回流反应，生成4-硝基邻苯二甲酸二甲醋； W苯或甲苯为溶剂，所述4-硝基邻苯二甲酸二甲醋和锋粉、浓盐酸或浓硫酸发生 还原反应，生成所述DMP半抗原。DMP半抗原化学名称为4-氨基邻苯二甲酸二甲醋，分子式 为CwHiiNO"分子量 209. 20。 阳02引所述4-硝基邻苯二甲酸、甲醇、浓盐酸或浓硫酸的摩尔比为1:5~6. 5:0. 6~ 0. 7 ;所述4-硝基邻苯二甲酸二甲醋、浓盐酸或浓硫酸、苯或甲苯和锋粉的摩尔比为1:20~ 22:550~570:20~22。（其中苯或甲苯作为基质溶液并不参与反应） 理想状态下，4-硝基邻苯二甲酸、甲醇的摩尔比是1:2,但为了反应顺利进行，一 般甲醇的用量是4-硝基邻苯二甲酸的摩尔量本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种邻苯二甲酸二甲酯的人工免疫原DMP‑BSA，其特征在于，结构式如式(I)所示：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：庄惠生，孙瑞艳，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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