针对组织因子途径抑制剂的前体药物抗体制造技术

本公开内容提供了仅在暴露于来源凝血级联的蛋白酶后，与组织因子途径抑制剂（TFPI）特异性结合的前体药物抗体。所述前体药物抗体可用于治疗出血障碍例如血友病。当在此类治疗中使用时，这些前体药物抗体显示相对于其他抗TFPI抗体增加的半衰期，同时减轻副作用例如血栓形成的可能性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 背景 根据37 C.F.R. 1.821 (C)，随同提交作为ASCII标准文本文件的序列表，所述ASCII 标准文本文件命名为"BAYRP0004W0_ST25.txt"，于2014年3月14日创建，并且具有~312 千字节的大小。前述文件的内容在此整体引入作为参考。 本申请要求于2013年3月15提交的美国临时申请序列号61/794, 024的优先权 利益，所述美国临时申请的完整内容在此引入作为参考。 I.

涉及血友病及其他凝血病的治疗。 II.相关技术 血液凝固是通过其血液形成稳定血块以止血的过程。该过程涉及在血液中循环的许多 酶原和促辅因子（procofactor)(或"凝血因子")。这些酶原和前辅因子通过几种途径相互 作用，它们通过所述途径相继或同时转换为活化形式。最终，该过程导致在因子Va、离子钙 和血小板的存在下，凝血酶原通过活化因子X (FXa)活化为凝血酶。活化凝血酶进而诱导 血小板聚集，并且将纤维蛋白原转换成纤维蛋白，其随后通过活化因子XIII (FXIIIa)交联 以形成血块。 导致因子X活化的过程可以通过两个不同途径进行：接触活化途径（以前称为内 源性途径）和组织因子途径（以前称为外源性途径)。先前认为凝血级联由与共同途径连接 的具有相等重要性的两个途径组成。目前已知用于起始血液凝固的主要途径是组织因子途 径。因子X可以被与活化因子VII (FVIIa)组合的组织因子（TF)活化。因子Vila及其必 需辅因子TF的复合物是凝血级联的有力引发剂。 凝血的组织因子途径受组织因子途径抑制剂（〃TFPI〃）负面控制。TFPI是FVIIa/ TF复合物的天然FXa依赖性反馈抑制剂。它是多价Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂的成员。 生理学上，TFPI与活化因子X (FXa)结合，以形成异二聚复合物，其随后与FVIIa/TF复合 物相互作用，以抑制其活性，因此关闭凝血的组织因子途径。原则上，阻断TFPI活性可以恢 复FXa和FVIIa/TF活性，因此延长组织因子途径的作用持续时间且扩大FXa的生成，所述 FXa是血友病A和B中的共同缺陷。 事实上，一些初步实验证据已指示通过针对TFPI的抗体阻断TFPI活性使延长的 凝血时间标准化或缩短出血时间。例如，Nordfang等人显示在用针对TFPI的抗体处理血 衆后，血友病血衆的延长稀释凝血酶原时间被标准化//aewosi·，1991，66 (4): 464-467)。类似地，Erhardtsen等人显示血友病A兔模型中的出血时间被抗TFPI抗体显 著缩短（扮ooi/ 388-394)。这些研究提不通过抗 TFPI抗体抑制TFPI可以用于治疗血友病A或B。仅多克隆抗TFPI抗体用于这些研究中。 使用杂交瘤技术，制备且鉴定针对重组人TFPKrhTFPI)的单克隆抗体。参见Yang 等人，Oi/?. ifeoi ^，1998,111(8): 718-721。测试单克隆抗体对稀释凝血酶原时间（PT) 和活化部分促凝血酶原时间（APTT)的作用。实验显示抗TFPI单克隆抗体缩短因子IX缺 乏血浆的稀释凝血酶凝血时间。提示组织因子途径不仅在生理学凝血中，还在血友病的出 血中起重要作用（Yang 等人，及《a/? /i 心 /? Λ/e Λ/e 你〇，1997,22 (4) : 297-300)。 授予Kjalke等人的美国专利号7, 015, 194公开了包含FVIIa和TFPI抑制剂的组 合物，所述TFPI抑制剂包括多克隆或单克隆抗体或其片段，用于治疗或预防出血发作或凝 血治疗。还公开了此类组合物降低正常哺乳动物血浆中的凝血时间的用途。进一步提出因 子VIII或其变体可以包括在公开的FVIIa和TFPI抑制剂的组合物中。未提出FVIII或因 子IX与TFPI单克隆抗体的组合。除用于血友病的治疗之外，还已提出TFPI抑制剂包括多 克隆或单克隆抗体可以用于癌症治疗(参见授予Hung的美国专利号5, 902, 582)。 相应地，需要对于TFPI特异性的改善抗体用于治疗血液学疾病和癌症。 公开内容概述 因此，依照本公开内容，提供了包含下述的抗体：（a)含有第一轻链可变区和第一重链 可变区的第一可变结构域，所述第一可变结构域与组织因子途径抑制剂（TFPI)免疫学结 合；（b)与第一轻链可变区和/或第一重链可变区的氨基末端连接的掩蔽结构域；和（C)介 于第一轻链可变区和/或第一重链可变区和掩蔽结构域之间的蛋白酶可切割接头。蛋白酶 可切割结构域可以是凝血酶、纤溶酶、因子Vila或因子Xa切割位点。掩蔽结构域可以包含 第二可变结构域，其包含第二轻链可变区和第二重链可变区。抗体可以是IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgM、IgAU IgA2、分泌型IgA、IgD和IgE抗体。抗体可以是人或人源化抗体，和/或 单链抗体。抗体可以是：二价的且包含两个掩蔽结构域，一个连接至每个第一轻链可变区的 氨基末端；或二价的且包含两个掩蔽结构域，一个连接至每个第一重链可变区的氨基末端； 或二价的且包含四个掩蔽结构域，一个连接至每个第一轻链可变区和每个第一重链可变区 的氨基末端，例如其中掩蔽结构域中的两个是第二轻链可变区，并且掩蔽结构域中的两个 是第二重链可变区，其中第二轻链可变区和第二重链可变区形成第二可变结构域。第二可 变结构域可以与组织因子（TF)、红细胞或白蛋白结合。掩蔽结构域可以是白蛋白结合蛋白。 抗体可以与人组织因子途径抑制剂的Kunitz结构域2结合。 还提供的是包含处于启动子的控制下的关于如上所述的抗体的编码区的表达载 体，以及包含此类表达载体的细胞。还提供的是包含用药学可接受的缓冲液、载体或稀释剂 配制的如上所述的抗体的药物制剂。 在另一个实施方案中，提供的是治疗对象中的凝血障碍的方法，其包括以有效促 进对象中的凝血的量给对象施用包含下述的抗体：（a)含有第一轻链可变区和第一重链可 变区的第一可变结构域，所述第一可变结构域与组织因子途径抑制剂（TFPI)免疫学结合； (b)与第一轻链可变区和/或第一重链可变区的氨基末端连接的掩蔽结构域；和（C)介于 第一轻链可变区和/或第一重链可变区和掩蔽结构域之间的蛋白酶可切割接头。蛋白酶可 切割结构域可以是凝血酶、纤溶酶、因子Vila或因子Xa切割位点。掩蔽结构域可以包含第 二可变结构域，其包含第二轻链可变区和第二重链可变区。抗体可以是IgGU IgG2、IgG3、 IgG4、IgM、IgAU IgA2、分泌型IgA、IgD和IgE抗体。抗体可以是人或人源化抗体，和/或 单链抗体。抗体可以是：二价的且包含两个掩蔽结构域，一个连接至每个第一轻链可变区的 氨基末端；或二价的且包含两个掩蔽结构域，一个连接至每个第一重链可变区的氨基末端； 或二价的且包含四个掩蔽结构域，一个连接至每个第一轻链可变区和每个第一重链可变区 的氨基末端，例如其中两个掩蔽结构域是第二轻链可变区，并且两个掩蔽结构域是第二重 链可变区，其中第二轻链可变区和第二重链可变区形成第二可变结构域。第二可变结构域 可以与组织因子（TF)、红细胞或白蛋白结合。掩蔽结构域可以是白蛋白结合蛋白。对象可 以是人或非人哺乳动物。对象可以患有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体，其包含：（a）含有第一轻链可变区和第一重链可变区的第一可变结构域，所述第一可变结构域与组织因子途径抑制剂（TFPI）结合；（b）与所述第一轻链可变区和/或第一重链可变区的氨基末端连接的掩蔽结构域；和（c）介于所述第一轻链可变区和/或第一重链可变区和所述掩蔽结构域之间的蛋白酶可切割接头。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：Z王，J默菲，T赫米斯顿，Y朱，R温特，
申请(专利权)人：拜尔健康护理有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US