miR-204和miR-211及其用途制造技术

本发明专利技术涉及能够提高对象的细胞中一种或多种miRNA水平的至少一种试剂、相关药物组合物、核酸、载体和宿主细胞，所述miRNA包含序列UUCCCUU，所述试剂用于治疗和/或预防视网膜营养不良，特别是以感光细胞退化为特征的那些。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及至少一种能够提高对象的细胞中一种或多种miRNA水平的试剂、相关 药物组合物、核酸、载体和宿主细胞，所述miRNA包含序列UUCCCUU，所述试剂用于治疗和/ 或预防视网膜营养不良，特别是以感光细胞退化为特征的那些。
技术介绍
微小RNA(miRNA)是基因表达的转录后调控因子，其在生理和病理状态中的基础 生物过程的控制方面起关键作用。越来越多的证据表明，miRNA可通过靶向功能上相关基因 的基因网络来控制特定的功能通路。在人中，miRNA本身或其靶基因中突变导致的miRNA表 达失调已与多种病理病症（如糖尿病、神经退行性疾病、心力衰竭和遗传性耳聋（1，2)等） 相关。最近，miRNA也开始作为多种疾病的治疗性介入的新靶标。miRNA的治疗性功能已描 述于多种癌症模型（3,4)、心脏病（5,6)、肌肉萎缩症（7)和肝疾病（8,9)中。1^1^-122的 应用已进入临床，其中在以治疗丙型肝炎感染为目的方面处于I期试验（10)。因此，miRNA 的治疗性应用代表现代医学中理想的研究领域，但其广泛应用需要正确了解由miRNA控制 的基因表达变化。 视网膜是一种层状结构，由六个神经元和一个神经胶质细胞类型组成，其构成 为三个细胞层：神经节细胞层（包含视网膜神经节（RGC)和移动性无长突细胞）、内核层 (INL)(含有双极、水平和无长突中间神经原和穆勒胶质细胞（MiIller glial cells))以及 外核层（ONL)(其中有视杆细胞和视锥细胞）。视网膜紧邻视网膜色素上皮细胞（RPE)(-种 滋养视网膜视细胞的色素细胞层），并牢固连接下方的脉络膜和上方的视网膜视细胞（图 20)。 遗传性视网膜营养不良（IRD)是西方遗传学眼盲的最常见病因之一。该类疾病的 潜在主要病症是感光细胞（即将光信息转化为化学和电信号并随后通过视觉回路传输至 脑的细胞）的退化。在人视网膜中存在两种类型的感光细胞：视杆细胞和视锥细胞。视杆 细胞代表人视网膜中约95%的感光细胞并负责感知对比度、亮度和移动，而高分辨率、空间 分辨率和色觉由视锥细胞感知。 IRD可细分为不同的疾病组，即色素性视网膜炎（RP)、莱伯先天性黑朦（LCA)、视 锥细胞-视杆细胞营养不良和视锥细胞营养不良。 RP是遗传学视网膜营养不良的最常见形式，近似频率为约4000名个体中存在一 名患者（11)。在其临床发作阶段，RP的特征是夜盲和进行性感光细胞退化，伴随骨针样色 素沉积和降低或缺失的视网膜电图（ERGhRP可以是分离的或综合征的，即与眼外表现（如 在亚瑟综合征（Usher syndrome)和巴尔得-别德尔综合征（Bardet-Biedle syndrome)中） 相关。从遗传观点来看，RP是高度异质性的，具有常染色体显性、常染色体隐性和X连锁的 遗传模式。然而，很大百分比的RP患者是明显分散的。迄今为止，已发现约50个致病基因 /基因座负责非综合征形式的RP并发现超过25个致病基因/基因座负责综合征RP (RETnet 网站出1^://￥￥￥.3011.111；11.1；111(：』(111/1^价1；/)〇 LCA的发病率为每100000个体中约2-3人，且特征为生命的第一个月/年开始的 严重视觉缺陷（12)。LCA具有视网膜、眼睛和眼外特征，且偶尔是系统性相关联的。LCA在大 部分患者中以常染色体隐性性状继承，而仅在少数病例中报道了常染色体显性继承。LCA具 有遗传异质性，且迄今为止已在15种不同基因中鉴定到突变：GUCY2D(基因座名称LCAl)、 RPE65 (LCA2)、SPATA7 (LCA3)、AIPLl (LCA4)、LCA5 (LCA5)、RPGRIP1 (LCA6)、CRX (LCA7)、 CRBl (LCA8)、CEP290 (LCAlO)、MPDHl (LCAll)、RD3 (LCAl2)、NMNATl (LCA9)、LRAT (LCA14)、 TULP1(LCA15)和RDH12(LCA13)。LCA的诊断由临床发现结果建立。对于目前已知与LCA相 关的15种基因，分子遗传学测试是临床上可行的。总的来说，预测这些基因中的突变导致 所有LCA病例中的约40% -50%，这依赖于征询工作。 视锥细胞-视杆细胞营养不良（CRD)发病率为1/40000个体，且特征为眼底检查 时可见的视网膜色素沉积，其主要位于黄斑区。与典型的RP不同（其特征为先发生视杆 感光细胞损失，随后发生视锥感光细胞损失），CRD中事件顺序相反。CRD的特征为，主要涉 及视锥细胞，或有时伴随视锥细胞和视杆细胞的共同损失，这解释了 CRD的主要症状：视力 减弱、色觉缺陷、厌光（photo-aversion)和中心视野灵敏度降低，随后是周边视野的进行 性损失和夜盲（13)。已有至少20种不同基因中的突变与CRD相关（RETnet网址：http:// www. sph. uth. tmc. edu/RetNet/) 〇 视锥细胞营养不良（CD)是其中视锥感光细胞显示选择性功能障碍且该选择性功 能障碍不延伸至视杆细胞的病症。其特征为视觉缺陷、色觉异常、视野损失和不同程度的眼 球震颤和畏光。在CD中，视锥功能在视网膜电图（ERG)和心理物理测试中缺失或严重受损 (14)。与其他形式的遗传性视网膜营养不良类似，CD是异质性病症，可由至少10种不同基 因中的突变导致（RETnet 网址：http://www. sph. uth. tmc. edu/RetNet/)。 同样如上文所述，IRD归因于感光细胞的退化和随后的死亡，所述感光细胞在RP 和LCA中主要是视杆细胞，而在CRD和CD中主要是视锥细胞。感兴趣的是，在RP和大多数 形式的LCA中，视杆细胞退化之后是视锥细胞的继发性退化。大多数负责IRD的基因主要 表达在感光细胞（视杆细胞或视锥细胞）中。一些IRD基因普遍表达在视网膜色素上皮细 胞中。然而，同样在后一种情况中，这些基因失调的主要后果是感光细胞功能的损伤，其随 后转化为感光细胞退化和死亡。对于大多数形式的上述疾病，目前没有有效的治疗方法。 作者目前正在研究miRNA用作遗传性视网膜营养不良中的治疗工具的可能性。作 者最近研究了哺乳动物眼部发育的主要阶段期间miRNA的表达模式，并生成了迄今为止最 具综合性的哺乳动物眼中miRNA的表达图谱（15,16)。 结果是，作者鉴定到了一个miRNA亚组，其显示在哺乳动物眼中具有显著的表达 水平，其中有miR-204和miR-211。作者开始对后者miRNA进行详细的功能表征，大部分使 用体内模型。具体而言，通过在青鏘鱼（Oryziaslatipes(ol))模式生物中使用功能获得 和功能丧失方法，作者已于先前证明，miR-204活性的变化显著影响了眼分化和功能的多个 方面。具体而言，吗啉代介导的miR-204表达消融导致特征为小眼畸形和改变的视网膜的 背-腹（D-V)模式的眼表型，其导致视缺损（17)。 有趣的是，miR-204和miR-211是哺乳动物中密切相关的旁系同源物，其共有相同 的种子区序列和相同的预测靶标组（TargetScan) (18)。其在小鼠中仅相差一个核苷酸且在 人中仅本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于治疗和/或预防视网膜营养不良的至少一种试剂，所述试剂能够提高对象的一种或多种细胞中一种或多种miRNA的水平，所述miRNA包含序列UUCCCUU。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·M·瑟瑞斯，S·班菲，I·孔特，M·卡拉里，E·马鲁可，
申请(专利权)人：泰莱托恩基金会，
类型：发明
国别省市：意大利;IT