本发明专利技术公开了从龙眼肉中分离木犀草素5‑O‑β‑葡萄糖苷的方法，包括以下步骤：(1) 用丙酮提取龙眼果肉，获得丙酮提取物；(2) 所述丙酮提取物上大孔树脂分离柱，先后用超纯水和95%乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇溶液，浓缩至乙醇完全回收；(3) 所述浓缩液上聚酰胺树脂柱，依次用水以及体积分数为10%、20%的乙醇进行梯度洗脱，而后采用体积分数为25‑35%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；(4) 将25‑35%乙醇的洗脱液注入高效液相色谱仪，用甲醇‑水进行洗脱，收集含有木犀草素5‑O‑β‑葡萄糖苷的级分，浓缩，干燥获得木犀草素5‑O‑β‑葡萄糖苷。该方法工艺简单，条件容易控制，易于产业化，为它在广泛范围内使用提供了方便。
【技术实现步骤摘要】
从龙眼肉中分离木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法
本专利技术涉及龙眼肉中分离酚类化合物的方法，尤其涉及从龙眼肉中分离木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法。
技术介绍
龙眼被誉为“果中圣品”，有“南方人参”的美称，在我国栽培历史悠久，主要分布于福建、广西、广东、四川和台湾省，是我国南方的特色大宗水果，其中广东省龙眼种植面积12.9万公顷，年产55.48万吨，对当地农业和经济发展起重要作用。龙眼果肉不仅营养丰富，并且具有很高的药用功效。《本草纲目》中记载“食品以荔枝为贵，而资益以龙眼为良”，认为龙眼肉具有“开胃健脾，补虚益智”的功效。中医学著作中也有记载，龙眼果肉可用于治疗脾虚泄泻，自汗盗汗，心血不足，失眠健忘等症状。已有研究人员对荔枝果肉生物活性做了初步探索，报道荔枝果肉富含酚类物质具有抗氧化、抗辐射和保护肝脏等生物活性。龙眼资源在我国华南地区非常丰富，如果对龙眼果肉进行深入系统的研究，确定其抗氧化作用物质基础、鉴定其单体的化学结构、明析其作用机理，并在此基础上开发出可降低慢性疾病发生发展的功能食品，不仅可以充分利用龙眼资源，而且还可以减少慢性疾病的发病率、促进人们的健康水平、创造出较大的经济效益和社会效益。已有研究表明，龙眼果肉中含有丰富的酚类化合物，目前已从龙眼果肉中分离得到的酚类化合物(见下式和表1)。大量试验表明龙眼果肉中的酚类化合物有较强的抗氧化、延缓衰老功效，是龙眼果肉抗氧化活性的主要功效物质。Rangkadilok等用70％甲醇从龙眼果肉中提取得到的酚类物质主要为没食子酸、鞣花单宁、鞣花酸(Rangkadiloketal.，2005)。JianSun用聚酰胺柱和SephadexLH-20凝胶柱层析法分离纯化果肉中酚类物质，鉴定得到4-O-甲基没食子酸和(-)-表儿茶素(Jianetal.，2007)。其中4-O-甲基没食子酸表现出较高的DPPH和自由基清除活性，而后者证实与龙眼果肉的褐变反应相关。王志远采用普鲁士兰法测定了龙眼果肉70％丙酮提取物中多酚和单宁的含量分别约为0.90±0.06mg/g和0.56±0.06mg/g(王志远等，2008)。万红霞比较了不同浓度的甲醇、乙醇、丙酮对多酚提取含量的影响，结果显示以70％丙酮为提取剂时，多酚提取量达到最大，为51.5±1.4mg/100g(万红霞，2011)。肖毅美用HPLC的方法测定了不同品种龙眼果肉中酚类物质的组成和含量，发现酚类单体含量最大的是表儿茶素，其次是四甲基邻苯二酚和香豆素(肖毅美，2011)。酚类物质在抗氧化、延缓衰老等方面具有较强的作用，这与龙眼果肉的生理功效是一致的。表1从龙眼果肉中分离出的酚类化合物目前，没有人从龙眼果肉中分离得到木犀草素5-O-β-葡萄糖苷。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从龙眼肉中分离木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法。该方法工艺简单，条件容易控制，易于产业化，为它在广泛范围内使用提供了方便。本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：从龙眼肉中分离木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法，包括以下步骤：(1)用丙酮提取龙眼果肉，获得丙酮提取物；(2)所述丙酮提取物上大孔树脂分离柱，先后用超纯水和95％乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇溶液，浓缩至乙醇完全回收；(3)所述浓缩液上聚酰胺树脂柱，依次用水以及体积分数为10％、20％的乙醇进行梯度洗脱，而后采用体积分数为25-35％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；(4)将25-35％乙醇的洗脱液注入高效液相色谱仪，用甲醇-水进行洗脱，收集含有木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的级分，浓缩，干燥获得木犀草素5-O-β-葡萄糖苷。本专利技术的一个实施方式，所述步骤(1)具体操作为：取鲜龙眼果肉，按质量体积比1:2-5加入4℃预冷的80％丙酮，破碎组织，之后用均质机在冰水浴下，4500-5500rpm均质4-6分钟，然后离心，取上清液，果渣重复提取一次，合并两次上清液，真空浓缩至40mL，-80℃冷藏备用。所述离心转速4500-5500rpm。所述步骤(2)中的超纯水和95％乙醇溶液的用量分别为2L。所述步骤(3)中的水和乙醇的用量分别为2L。所述步骤(4)中甲醇-水中甲醇和水体积比为45﹕55；流速5mL/min，所述干燥为冷冻干燥。本专利技术的有益效果：1.本专利技术实施过程中大孔吸附树脂出去糖类化合物后，采用聚酰胺吸附树脂与高效液相色谱相结合的方式，实现了该黄酮类化合物的快速高效分离。所得的木犀草素5-O-β-葡萄糖苷纯度可达到95％以上。2.本专利技术获得的木犀草素5-O-β-葡萄糖具有细胞的抗氧化能力。附图说明图1是本专利技术30％乙醇洗脱液的高效液相色谱图。图2是本专利技术提取的木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的核磁共振H谱图，各个H质子的信号位移值(ppm)示于图中。图3是本专利技术提取的木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的核磁共振C谱图，各个C原子的信号位移值(ppm)示于图中。具体实施方式实施例一(1)取500g鲜龙眼果肉，按质量体积比1:2加入4℃预冷的80％丙酮，采用飞利浦搅拌机破碎组织，之后用XHF-D均质机在冰水浴条件下，5000rpm转速下均质5分钟，均质后5000rpm离心5min，取上清液。果渣再重复提取一次。合并两次离心上清液，真空浓缩至约40mL，龙眼果肉提取物浓缩液在-80℃冷藏备用。(2)龙眼果肉提取物浓缩液首先采用填充了HPD-826型大孔树脂直径3.5cm，长40cm玻璃柱进行分离，分别用2L超纯水和2L95％乙醇溶液(v/v)进行洗脱。收集有机相洗脱液，真空浓缩有机相洗脱液。(3)将有机相浓缩液用填充了聚酰胺树脂(PR)直径3.5cm，长40cm玻璃柱作进一步纯化，依次采用水和以下体积分数的乙醇溶液进行洗脱：10％、20％、30％、40％、50％、80％和100％，各洗脱液均为2L，分别收集洗脱液，各洗脱液采用HPLC进行分析，HPLC分析采用二极管阵列检测器(DAD)。与木犀草素5-O-β-葡萄糖苷标准品进行比较发现，只有30％乙醇洗脱液中含有木犀草素5-O-β-葡萄糖苷，如图1所示，该图横坐标表示出峰时间，从左到右出峰时间依次为17.864，25.421，28.272，29.688，34.828。其中，在25.421分钟处出现的是木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的峰。(4)将30％乙醇洗脱液注入高效液相色谱仪，液相色谱条件：检测波长280nm；流动相甲醇-水比例45:55,v/v；流速5mL/min。收集25分钟出峰段的洗脱液，浓缩，干燥获得单体，避光干燥器中保存备用。产物结构鉴定：对所得的单体进行1HNMR、13CNMR鉴定，如图2和图3所示，核磁C谱数据如下：13CNMR:156.4(C-2),132.6(C-3),176.9(C-4),161.6(C-5),99.0(C-6),157.1(C-7),94.6(C-8),156.3(C-9),100.3(C-10),121.9(C-1'),115.6(C-2'),149.5(C-3'),146.6(C-4'),116.0(C-5'),121.2(C-6'),100.9(C-1”),100.3(C-1″″),72.3(C-2”),72.2(C-2″″),77.6(C-3”),70.7(C-4”),70.6(C-3″″)本文档来自技高网...
【技术保护点】
从龙眼肉中分离木犀草素5‑O‑β‑葡萄糖苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 用丙酮提取龙眼果肉，获得丙酮提取物；(2) 所述丙酮提取物上大孔树脂分离柱，先后用超纯水和95%乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇溶液，浓缩至乙醇完全回收；(3) 所述浓缩液上聚酰胺树脂柱，依次用水以及体积分数为10%、20%的乙醇进行梯度洗脱，而后采用体积分数为25‑35%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；(4) 将25‑35%乙醇的洗脱液注入高效液相色谱仪，用甲醇‑水进行洗脱，收集含有木犀草素5‑O‑β‑葡萄糖苷的级分，浓缩，干燥获得木犀草素5‑O‑β‑葡萄糖苷。
【技术特征摘要】
1.从龙眼肉中分离木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用丙酮提取龙眼果肉，获得丙酮提取物；(2)所述丙酮提取物上大孔树脂分离柱，先后用超纯水和95%乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇溶液，浓缩至乙醇完全回收；(3)所述浓缩液上聚酰胺树脂柱，依次用水以及体积分数为10%、20%的乙醇进行梯度洗脱，而后采用体积分数为25-35%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；(4)将25-35%乙醇的洗脱液注入高效液相色谱仪，用甲醇-水进行洗脱，收集含有木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的级分，浓缩，干燥获得木犀草素5-O-β-葡萄糖苷。2.根据权利要求1所述的从龙眼肉中分离木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体操作为：取鲜龙眼果肉，按质量体积比1:2-5加入4℃预冷的80%丙酮，破碎组织，之后用均质...
【专利技术属性】
技术研发人员：遆慧慧，张名位，魏振承，张瑞芬，张雁，唐小俊，邓媛元，刘磊，马永轩，郭锦欣，
申请(专利权)人：广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，广州力衡临床营养品有限公司，广东宝桑园健康食品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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