一种提取银杏白果多糖的方法及其产品技术

本发明专利技术公开了一种提取银杏白果多糖的方法其产品，本发明专利技术以银杏白果为原料，经石油醚脱脂后，加入复合酶（纤维素酶和果胶酶）超声后灭酶，再加入中性蛋白酶水解，使银杏白果中的多糖游离到上清液中，上清液经Sevage试剂除蛋白，无水乙醇沉淀后，加水复溶，然后利用季铵盐进一步纯化银杏白果多糖，再经透析袋脱盐处理，最后冷冻干燥，从而制备出高活性的银杏白果多糖产品。采用本发明专利技术的方法可以直接制得具有降血糖、抗氧化活性的银杏白果多糖，可以将其作为天然功能因子加入到食品，或直接作为保健品食用。

【技术实现步骤摘要】
一种提取银杏白果多糖的方法及其产品
本专利技术属于天然产物多糖的分离提取领域，具体涉及一种提取银杏白果多糖的方法及其产品。
技术介绍
银杏属裸子植物银杏科银杏属植物，为亚热带、温带树种，在我国广泛栽培，是我国主要的经济树种之一。银杏白果是银杏的主要经济器官，其资源量大、售价高、销路畅，表现出明显的经济优势。研究发现银杏制剂有对防治心脑血管疾病、老年痴呆症和对抗血小板活化因子的作用，目前已经研制开发了银杏植物药制剂、功能性食品、保健品和化妆品。有研究表明白果中含有丰富的营养物质，主要有：碳水化合物类(60％)、蛋白质类(13％)、脂类物质(4％)、糖类(6％)，同时白果中还含有维生素、无机盐以及人体需要但自身不能合成的9种氨基酸。现研究表明，白果蛋白及脂肪具有抗氧化、抗衰老等作用。而银杏白果多糖也是白果中一种重要的活性成分，它具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗炎等多种活性作用。目前，银杏白果多糖的提取大都采用热水浸提或水煎煮，其提取方法简单，不会引起多糖降解，但一般只能提取胞壁外多糖，所得多糖生物活性较低。近年有文献报道，利用超声波或微波提取，但提取率及纯度较低，对原料的利用率低。且粗多糖中蛋白的去除一般采用Sevag法，此法只能除去少量蛋白质，效率不高，需反复多次，多糖损失较大，且在某种度上会影响银杏白果多糖的生物活性。在多糖分离纯化方面，多采用凝胶过滤法分离纯化多糖，成本高，工作量大，技术操作繁杂，不宜应用于工业生产中。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术缺陷，提供一种可以用于工业化生产高效率和操作简单的，且可用于食品工业的白果多糖的提取方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种提取银杏白果多糖的方法，包括以下步骤：(1)超声协同酶处理提取银杏白果多糖：脱脂银杏白果粉加水后制备成反应液，所述反应液中添加复合酶进行水解，复合酶水解的同时对反应液进行超声处理，所述复合酶为果胶酶和纤维素酶，超声处理后灭活复合酶，调节体系pH值，加入蛋白酶进行水解，水解后灭活蛋白酶，离心处理，得上清液为银杏白果多糖溶液；(2)醇沉、除蛋白纯化得银杏白果粗多糖：步骤(1)所得的银杏白果多糖溶液添加乙醇进行沉淀，复溶沉淀加入Sevag试剂除蛋白，再次加入乙醇后沉淀、洗涤干燥沉淀得银杏白果粗多糖；(3)溶解步骤(2)所得的银杏白果粗多糖添加季铵盐再次沉淀进行分离纯化；(4)脱盐处理；(5)冷冻干燥得银杏白果精多糖。进一步的，步骤(1)中所述反应液中脱脂银杏白果粉的质量浓度为4.0％-10％，果胶酶添加量为35-55U/g脱脂银杏白果粉，纤维素酶添加量为30-60U/g脱脂银杏白果粉，添加复合酶前调解反应液pH值为5.0-6.0，复合酶水解温度为45-65℃，超声功率为250-450W，每次复合酶水解并结合超声提取的时间为10-50min，超声两次。进一步的，步骤(1)中灭活复合酶后加入蛋白酶前调解反应液pH值至7.0，蛋白酶的种类为中性蛋白酶，蛋白酶添加量为150-350U/g脱脂银杏白果粉，调节中性蛋白酶的水解温度为50-60℃。进一步的，步骤(1)中灭活复合酶后加入蛋白酶前调解反应液pH值至7.0，蛋白酶的种类为中性蛋白酶，蛋白酶添加量为150-350U/g脱脂银杏白果粉，调节中性蛋白酶的水解温度为50-60℃，蛋白酶水解反应时间为1-3h。进一步的，步骤(4)的具体操作为：将步骤(3)所得的复溶溶液装入分子量2-14kDa透析袋内进行脱盐。一种使用所述的方法得到的银杏白果精多糖。进一步的，所述银杏白果精多糖纯度为65-80％。进一步的，所述银杏白果精多糖重均分子量为2.020×104g/mol。进一步的，所述银杏白果精多糖的单糖组成为甘露糖、鼠李糖和葡萄糖，其物质的量的比为8.25:1.00:1.53。所述银杏白果精多糖应用于降血糖、抗氧化的保健品及药物的制备。本专利技术的有益效果是：1)本专利技术采用超声波协同酶法提取多糖具有条件温和、杂质易除、得率高、操作简便、无副作用、无二次污染、在某种程度上可提高多糖的生物活性等优点。2)通过本专利技术提取方法可以直接获得得率及纯度较高的银杏白果多糖，可以直接制得具有天然抗氧化和降血糖活性的银杏白果多糖，可以将其作为天然降血糖功能因子加入到食品或作为抗氧剂加入化妆品等日常用品中，还可以直接作为天然保健品食用。3)本专利技术先利用蛋白酶将蛋白水解，再用Sevag法去除蛋白，只需两次处理就可以很好的去除蛋白，效率高。在多糖分离纯化方面，多采用凝胶过滤法分离纯化多糖，成本高，工作量大，技术操作繁杂，不宜应用于工业生产中，而本专利技术中用季铵盐法分离纯化多糖，操作方便、成本低，适合应用于工业生产中。4)本专利技术利用超声波协同酶法，建立了快速、高效率、低成本的白果多糖的提取技术，能够满足工业化大规模生产的要求。附图说明图1为不同提取方式对银杏白果多糖提取率的影响；图2为不同提取方式提取的银杏白果多糖DPPH自由基清除率的比较；图3为不同提取方式提取的银杏白果多糖羟自由基清除率的比较；图4为不同提取方式提取的银杏白果多糖还原力的比较；图5为不同提取方式提取的银杏白果多糖对葡萄糖苷酶抑制率影响的比较；图6为不同提取方式提取的银杏白果多糖的全波长扫描图谱；图7为扫描电镜下的热水提取的银杏白果多糖形貌；图8为扫描电镜下的超声提取的银杏白果多糖形貌；图9为扫描电镜下的酶法提取的银杏白果多糖形貌；图10为扫描电镜下的超声协同酶技术提取的银杏白果多糖形貌；图11为热水提取的银杏白果多糖的多角度激光散色光谱；图12为超声提取的银杏白果多糖的多角度激光散色光谱；图13为酶法提取的银杏白果多糖的多角度激光散色光谱；图14为超声协同酶技术提取的银杏白果多糖的多角度激光散色光谱；图15为单糖标准品高效液相色谱分离图谱；图16为热水提取的银杏白果多糖水解物高效液相色谱分离图；图17为超声提取的银杏白果多糖水解物高效液相色谱分离图；图18为酶法提取的银杏白果多糖水解物高效液相色谱分离图；图19为超声协同酶技术提取的银杏白果多糖水解物高效液相色谱分离图。具体实施方式实施例1一种提取银杏白果多糖的方法，包括以下步骤：(1)超声协同酶处理提取银杏白果多糖：脱脂银杏白果粉加水后添加复合酶制备成反应液，同时对反应液进行超声处理，所述复合酶为果胶酶和纤维素酶，超声处理后灭活复合酶，保持液料比和酶解温度恒定，调节体系pH，加入蛋白酶水解蛋白，水解后灭酶，离心处理，得上清液为银杏白果多糖溶液；(2)醇沉、除蛋白纯化得银杏白果粗多糖：步骤(1)所得的银杏白果多糖溶液添加乙醇进行沉淀，复溶沉淀加入Sevag试剂除蛋白，再次加入乙醇后沉淀、洗涤干燥沉淀得银杏白果粗多糖；(3)溶解步骤(2)所得的银杏白果粗多糖添加季铵盐再次沉淀进行分离纯化；(4)脱盐处理；(5)冷冻干燥得银杏白果精多糖。步骤(1)中所述反应液中脱脂银杏白果粉的质量浓度为4.0％-10％，果胶酶添加量为35-55U/g脱脂银杏白果粉，纤维素酶添加量为30-60U/g脱脂银杏白果粉，复合酶水解温度为45-65℃，添加复合酶前调解反应液pH值为5.0-6.0，超声功率为250-450W，超声时间为10-50min，超声两次。步骤(1)中灭活复合酶后加入蛋白酶前调解反应液pH值至7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取银杏白果多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)超声协同酶处理提取银杏白果多糖：脱脂银杏白果粉加水后制备成反应液，所述反应液中添加复合酶进行水解，复合酶水解的同时对反应液进行超声处理，所述复合酶为果胶酶和纤维素酶，超声处理后灭活复合酶，调节体系pH值，加入蛋白酶进行水解，水解后灭活蛋白酶，离心处理，得上清液为银杏白果多糖溶液；(2)醇沉、除蛋白纯化得银杏白果粗多糖：步骤(1)所得的银杏白果多糖溶液添加乙醇进行沉淀，复溶沉淀加入Sevag试剂除蛋白，再次加入乙醇后沉淀、洗涤干燥沉淀得银杏白果粗多糖；(3)溶解步骤(2)所得的银杏白果粗多糖添加季铵盐再次沉淀进行分离纯化；(4)脱盐处理；(5)冷冻干燥得银杏白果精多糖。

【技术特征摘要】
1.一种提取银杏白果多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)超声协同酶处理提取银杏白果多糖：脱脂银杏白果粉加水后制备成反应液，所述反应液中添加复合酶进行水解，复合酶水解的同时对反应液进行超声处理，所述复合酶为果胶酶和纤维素酶，超声处理后灭活复合酶，调节体系pH值，加入蛋白酶进行水解，水解后灭活蛋白酶，离心处理，得上清液为银杏白果多糖溶液；(2)醇沉、除蛋白纯化得银杏白果粗多糖：步骤(1)所得的银杏白果多糖溶液添加乙醇进行沉淀，复溶沉淀加入Sevag试剂除蛋白，再次加入乙醇后沉淀、洗涤干燥沉淀得银杏白果粗多糖；(3)溶解步骤(2)所得的银杏白果粗多糖添加季铵盐再次沉淀进行分离纯化；(4)脱盐处理；(5)冷冻干燥得银杏白果多糖。2.根据权利要求1所述的提取银杏白果多糖的方法，其特征在于：步骤(1)中所述反应液中脱脂银杏白果粉的质量浓度为4.0％-10％，果胶酶添加量为35-55U/g脱脂银杏白果粉，纤维素酶添加量为30-60U/g脱脂银杏白果粉，添加复合酶前调节反应液pH值为5.0-6.0，复合酶水解温度为45-65℃，超声功率为250-450W，每次复合酶水解并结合超声提取的时间为10-50min，超声两次。3.根据权利要求1所述的提取银杏白果多糖的方法，其特征在于：步骤(1)中灭活复合酶后加入蛋白酶前调节反...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽哲，程利明，
申请(专利权)人：珠海夫大食品科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44