本发明专利技术属于肿瘤靶向给药领域，涉及肿瘤细胞及肿瘤血管双靶向纳米粒、构建方法及应用。本发明专利技术公开了一种乳糖酸(LA)和血管内皮生长因子抗体(VEGFab)修饰的甲醚聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚赖氨酸(mPEG-PLGA-PLL)载基因肿瘤靶向阳粒子聚合物纳米粒(mPEG-PLGA-PLL-LA-VEGFab)的制备及应用，该mPEG-PLGA-mPEG-PLGA-PLL-LA-VEGFab纳米粒由两个靶向分子同时修饰，具有特异性靶向肿瘤组织细胞和肿瘤血管特性，可制备靶向递送的抗肿瘤药物，特别适用于负载miRNA用于制备治疗肝癌的药物。本发明专利技术制备方法简便，适于大规模生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肿瘤祀向给药系统
设及一种肿瘤细胞及肿瘤血管双祀向纳 米粒、构建方法及应用。进一步说是乳糖酸（LA)和血管内皮生长因子抗体（VEGF油）修饰 的甲酸聚乙二醇-聚乳酸径基乙酸-聚赖氨酸（mPEG-PLGA-PLL)载基因肿瘤祀向纳米粒 (mPEG-PLGA-P化-LA-VEGF油）、制备方法及其在医药领域中的应用，尤其适用于制备供静脉 注射用的抗癌药物和制剂。
技术介绍
临床上应用化疗药物治疗恶性肿瘤在许多情况下获得了一定的成功，但是，同时 也存在着一些严重的问题。一个主要的问题是临床用的抗肿瘤药物普遍缺乏祀向性，容易 导致严重的剂量依赖性毒副作用的产生，极大地限制了药物的抗肿瘤效果。因此，如何安 全、高效的将药物递送到祀细胞并发挥作用是取得理想抗肿瘤治疗效果的最为关键因素之 〇 目前用于药物递送系统的载体主要分为病毒载体和非病毒载体。由于病毒载 体存在毒副作用和潜在的免疫原性、致瘤性等问题极大的限制其进一步的应用，从而具 有无免疫原性、易于制备、稳定性好等优点的非病毒载体受到国内外研究者更多的关 注。像非病毒载体，如脂质体、纳米粒、阳离子多聚物、胶束等纳米递送系统在基因递送 方面都取得了不同程度的研究成果。纳米递送系统可增强基因递送的祀向性，同时在纳 米载体表面禪联特异性的祀向分子，如特异性配体、单克隆抗体等，通过祀向分子与细胞 表面特异性受体结合，可实现基因的特异性的主动祀向递送，提高治疗效率。由此可知， 良好递送效率和祀向性的非病毒基因递送载体，在肿瘤的基因治疗中具有举足轻重的作 用。然后尽管非病毒载体已取得较大的研究进展，但是其特异性的祀向和高效的荷载效 率的问题仍没有得到彻底的解决。为此，本专利技术人在前期研究基础上构建具有肿瘤高特 异性和高荷载基因效率的mPEG-PLGA-P化-La-VEGF油纳米递送载体巧eifengLiu,et al.IntracellulartraffickingandcellularuptakemechanismofmPEG-PLGA-PLL andmPEG-PLGA-PLL-Galnanoparticlesfortargeteddeliverytohepatomas. Biomaterials2014, 35(2) :760-770.)，其中mPEG-PLGA-P化-La-VEGF油纳米递送系统的 祀向性设计将通过肿瘤组织细胞、肿瘤血管的多重祀向来实现，运将会有效地提高基因递 送和肿瘤治疗的效率。 (1)长循环的组织祀向 肿瘤组织的祀向是通过使用具有体内长循环特性的纳米粒而实现，其主要利用纳 米粒所具有的被动祀向功能而产生的增强渗透滞留巧PR)效应，具体方法为使用mPEG修饰 的纳米递送系统在体内能有效地逃避网状内皮系统（RE巧的吞隧，增加递送系统在体内的 循环时间和稳定性。 可降解聚合物PLGA具有良好的生物相容性、可降解性和缓释性，适用于基因的体 内外递送。阳离子多聚物聚左旋赖氨酸化L生物相容性好，其结构灵活（多聚物存在如线 形、星形、无规网状、嵌段、接枝等构型）、稳定、分子量易调；并可w很容易的通过引入侧链 或通过特异祀向性基团的修饰而调整和改善载体的性能。 将mPEG、PLGA和化L结合可W发挥立者的优点，水溶性较强的化L对脂溶性的 PLGA进行修饰，可W改善PLGA的亲水性和结晶性、调节其降解速度，而所形成的具有双亲 特性的嵌段共聚物则更易形成纳米颗粒。mPEG能在纳米粒表面形成一层水化膜，阻碍血浆 成分与胶束表面的吸附，从而降低网状内皮系统对纳米粒的摄取，使纳米粒在体循环中的 时间延长，增加对肿瘤的祀向。[000引 似肿瘤细胞和肿瘤内皮血管祀向 为了增强纳米粒祀向的高效率，我们选择对肿瘤细胞和肿瘤血管共同祀向。利用 肿瘤细胞的特异性受体配体结合原理，因此选择对肿瘤细胞具有良好祀向功能的乳糖酸 化a)和对肿瘤血管具有良好祀向的血管内皮生长因子抗体（VEGF油）来修饰纳米粒。 无唾液酸糖蛋白受体（ASGP-R)是在肝癌细胞膜表面高水平表达的特异性受体， 而正常细胞和绝大多数正常器官系统则无表达，因此ASGP-R是一个理想的祀标。根据受体 理论，含La基序列的配基类似物可与ASGP-R进行有效结合（其与配基的结合是通过La基 序列与ASGP-R进行共价键结合）。血管内皮生长因子（VEG巧是一种可W强烈诱导血管生 长的因子，在肿瘤血管生成过程中起重要作用。肿瘤细胞在低氧化ypoxia)情况下可W分 泌VEGF。VEGF可W促进内皮细胞增殖，促进细胞迁移，并抑制细胞调亡。总多实验证实VEGF 的表达水平和肝癌肿瘤内的血管生长情况呈正相关，并且和肿瘤的转移风险呈正相关。而 VEGF油通过有效的识别并结合肿瘤血管内皮细胞的VEGF来实验主动祀向的目的。 由此可知所选择的mPEG-PLGA-P化-La-VEGF油纳米粒具有强大的功能。本项目同 时也对mPEG-PLGA-P化-La-VEGF油纳米粒递送miRNA抗肝癌治疗进行相应的研究，为该纳 米粒的临床应用奠定基础。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种W甲酸聚乙二醇-聚乳酸径基乙酸-聚赖氨酸-乳糖 酸-血管内皮生长因子抗体mPEG-PLGA-P化-La-VEGF油纳米给药载体系统，mPEG有长循 环功效，PLGA能有效荷载抗肿瘤药物、可生物降解有缓控释功效，PLL带正电荷可W介导 与负电荷的基因结合，LA能有效祀向肝癌细胞，VEGFab能有效祀向肿瘤血管，运使构建的 mPEG-PLGA-P化-La-VEGF油纳米给药载体系统具有肿瘤特异性的多功能祀向功能。运种载 体材料还具有运送miRNA、siRNA、中药单体、人参皂巧和血管内皮抑制素等功能。 本专利技术所要解决的技术问题在于选择合适的载体，使其能共同祀向到肿瘤组织细 胞和肿瘤血管，并有效的将基因、药物和中药单体递送到祀点。 1.本专利技术所述的mPEG-PLGA-P化-LA-VEGF油为一系列不同分子量、不同单体 比例的载体材料，聚合物分子量为2. 0X103-10. 0X106;其中mPEG/PLGA的重量比为 1-50:50-100,PLGA中LA/GA的重量比为 1-100:1-100,PLGA/P化的重量比为 50-100:1-50， mPEG-PLGA-P化、LA和VEGF油的重量比为 1 :0. 0001-0. 001:0. 0001-0. 001。 本专利技术的祀向肿瘤细胞及肿瘤血管双祀向纳米粒mPEG-PLGA-P化-LA-VEGF油中， LA含量为0. 01-10%重量，VEGF油含量为0. 01-10%重量，其余为mPEG-PLGA-P化的重量。 mPEG-PLGA-P化、LA和VEGF油的重量比为 1:0. 0001-0. 001:0. 0001-0. 001。 本专利技术所述的肿瘤细胞及肿瘤血管双祀向纳米粒中，mPEG-PLGA-P化阳离子聚合 物和LA及VEGFab的连接方法是通过阳离子聚合物和LA及VEGFab的多肤之间的官能团反 应形成共价键结合。 2.本专利技术的甲酸聚乙二醇-聚乳酸径基乙酸-聚赖氨酸-乳糖酸-血管内皮 生长因子抗体mPEG-PLGA-P化-LA-VEGF油的双祀向阳离子聚合物纳米粒的构建方本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种能特异性靶向肿瘤组织细胞和肿瘤血管的双靶向甲醚聚乙二醇‑聚乳酸羟基乙酸‑聚赖氨酸‑乳糖酸‑血管内皮生长因子抗体mPEG‑PLGA‑PLL‑LA‑VEGFab阳离子聚合物，所述聚合物分子量为2.0×103‑10.0×106；其中mPEG/PLGA的重量比为1‑50:50‑100，PLGA中LA/GA的重量比为1‑100:1‑100，PLGA/PLL的重量比为50‑100:1‑50，mPEG‑PLGA‑PLL、LA和VEGFab的重量比为1：0.0001‑0.001:0.0001‑0.001。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：段友容，刘培峰，孙颖，王琪，沈鸣，
申请(专利权)人：上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31
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